1.4. Các phương pháp làm giàu chất phân tích
1.4.2. Phương pháp chiết pha rắn (SPE)
1.4.2.4. Một số công trình làm giàu Salbutamol bằng chiết pha rắn
Chen Huijing và các cộng sự [13] đã nghiên cứu phương pháp xác định đồng thời 25 beta-agonist. Các chất phân tích được làm sạch bằng chiết lỏng-lỏng và chiết pha rắn SPE, sau đó định lượng bằng sắc kí lỏng ghép ion hóa khối phổ UPLC-ESI-MS/MS. Cân 2 g thịt heo trên cân phân tích (± 0,01 g) cho vào ống 15 ml, thêm 8 ml dung dịch natriacetat 0,2 M (pH 5.2) và 100 ml β-glucuronidat sau đó lắc vortex trong 2 phút. Tiếp theo thủy phân ở 37°C trong 16 giờ, loại cặn lấy dung dịch lắc 15 phút, ly tâm 4000 rpm trong 10 phút. Lấy dịch trong điều chỉnh pH xuống 1 ± 0,3 bằng acid percloric, sau đó đem ly tâm ở 4000 rpm trong 10 phút. Thu dịch trong điều chỉnh pH đến 11 bằng NaOH. Sau đó thêm 10ml isopropanol-ethyl acetat (60:40), lắc 5 phút và ly tâm với tốc độ 4000 rpm trong 5 phút, thu phần hữu cơ, làm khô ở 40°C bằng dòng khí nitơ, hòa tan cặn bằng 5 ml
dung dịch natri acetat 0,2 M (pH 5,2) rồi cho chảy qua cột SPE. Cột SCX được hoạt hóa bằng 3 ml methanol và 3 ml nước. Sau đó nạp 5 ml mẫu thu được ở trên với tốc độ (khoảng 1 ml/phút), rửa cột bằng 2 ml nước, 2 ml axit formic 2% trong nước, cuối cùng rửa giải bằng 5 ml dung dịch methanol (95/5 v/v) với tốc độ chảy 1 ml/phút. Sau đó dung dịch thu được sấy khô bằng nitơ ở 40°C. Cuối cùng hòa tan cặn bằng 1 ml axit formic 0,1% trong dung dịch nước/trile (90/10 v/v). Mẫu thu được phân tích bằng sắc ký phân tích UPLS-ESI MS/MS. Kết quả cho thấy giới hạn phát hiện (LOD) của Salbutamol nằm trong khoảng 0,02†0,05 ppb, hiệu suất thu hồi trong khoảng 78-101%, giá trị RSD là 1,8-7,2%.
Tomasz Sniegocki và các cộng sự [22] đã đưa ra phương pháp xác định Clenbuterol và Salbutamol trong mẫu nước tiểu động vật bằng phương pháp sắc kí khí khối phổ GC-MS. Mẫu nước tiểu trước khi được bơm vào GC-MS được làm sạch cặn và làm giàu chất phân tích bằng kĩ thuật chiết pha rắn (SPE). Lấy 10 ml nước tiểu, thêm 10 ml dung dịch đệm (pH= 7), rồi đem ly tâm ở 4000 vòng trong 10 phút ở nhiệt độ phòng. Cột SPE được hoạt hóa bằng 2 ml methanol, 2 ml nước, 2 ml đệm photphat sau đó nạp mẫu nước tiểu ở trên, tiếp theo rửa cột bằng 1ml dung dịch acid acetic, 6 ml methanol. Hút khô cột trong 5 phút, rửa giải bằng 5 ml axetyl axetat với amoniac (4%), thu dịch rửa giải đem sấy khô bằng dòng khí nitơ ở 45°C cuối cựng hũa tan cặn bằng 300 ml methanol. Sau đú thờm 20 àl BSTFA cú chứa 1% TMCS, đun nóng ở 65°C trong 1,5 giờ, dịch thu được đem phân tích bằng GC- MS. Kết quả thu được cho giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) là 0,022 ppb và 0,037 ppb với Clenbuterol còn Salbutamol là 0,024 ppb và 0,041 ppb. Hiệu suất thu hồi tương ứng là 68,8% và 69,6%.
Một phương pháp khác để xác định đồng thời dư lượng của 11 β2-agonist bao gồm Clenbuterol, Salbutamol, Ractopamine, Terbutaline, Salmeterol, Propranolol, Tulobuterol, Cimaterol, Mabuterol, Mapenterol và Zilpaterol trong thịt lợn đã được Andy Zhai phát triển và xác nhận [10]. Các chất phân tích được chiết xuất bằng cách chiết lỏng-lỏng (LLE), chiết pha rắn (SPE) và định lượng bằng sắc ký lỏng ghép với ion hóa khối phổ (LC-ESI-MS/MS). Cân 5 g thịt lợn (± 0,01 g)
vào ống 50 ml, thờm 20 ml dung dịch natriacetat 0,2 M (pH 5,2) và 250 àl β glucuronidase (1000 U/ml), lắc vortex trong 2 phút, thủy phân ở 37°C trong 16 giờ sau đó ly tâm ở 4000 rpm trong 10 phút hút dịch trong phía trên cho vào một ống ly tâm, thêm 5 m axit percloric 0,1 M điều chỉnh pH đến 1 ± 0,3 rồi đem ly tâm ở 4000 rpm trong 10 phút sau đó được chuyển đến ống ly tâm khác và điều chỉnh pH lên 11 bằng natrihidroxit 10M, thêm tiếp 10ml isopropanol-ethyl acetat (60:40) lắc trong 5 phút, ly tâm ở 4000 rpm trong 5 phút lấy dịch trong đem cô khô bằng dòng khí nitơ ở 40°C cuối cùng hòa tan cặn trong 5 ml dung dịch natriacetat 0,2 M (pH 5,2). Các mẫu sau đó đã sẵn sàng cho SPE đề làm sạch. Cột SPE PCX được hoạt hóa với 3 ml methanol, 3 ml nước sau đó nạp 5 ml dung dịch mẫu ở trên (khoảng 1 ml/phút), rửa tạp bằng 2 ml nước, 2 ml axit formic 2% trong nước. Hút chân không 3 phút để khô hoàn toàn tiếp theo rửa giải bằng 5ml hỗn hợp dung dịch methanol/(95/5 v/v) (tốc độ khoảng 1 ml/phút) thu dịch rửa giải, sấy khô bằng dòng khí nitơ ở 40°C cuối cùng hòa tan cặn bằng 1ml hỗn hợp gồm axit formic 0,1% trong nước/ace-tonitrile (90/10 v/v), lắc và rung siêu âm để đảm bảo cặn hòa tan hoàn toàn, lọc qua màng lọc 0,45àm và được chuyển vào ống 1,5ml sau đú được phõn tớch bằng thiết bị LC- MS/MS. Phương pháp đã xác định được giới hạn phát hiện (LOD) của 11 β2- agonist trong thịt lợn nằm trong khoảng từ 0,01-0,08 ng/g, hiệu suất thu hồi các beta-agonist nằm trong khoảng từ 82% đến 105% với giá trị RSD nằm trong khoảng 1,6% và 8,4%.