Sử dụng phương pháp điện di mao quản với detector độ dẫn không tiếp xúc kết nối kiểu tụ điện (CE – C4D).
Nguyên tắc định lượng chất phân tích dựa trên mối quan hệ giữa tín hiệu đo của chất phân tích và nồng độ Cxtheo biểu thức:
H = k. Cx hoặc A = k. Cx
Trong đó: H là chiều cao, A là diện tích pic điện di của chất phân tích.
Để xác định hàm lượng Salbutamol trong mẫu ta sử dụng phương pháp đường chuẩn hoặc thêm chuẩn dựa trên cơ sở của sự phụ thuộc tuyến tính trên.
2.2.2. Phương pháp lấy mẫu phân tích
Mẫu nước tiểu và mẫu thịt lợn được lấy từ con lợn nuôi thí nghiệm với sự hợp tác của nhóm nghiên cứu và Viện Vệ sinh An toàn Thực phẩm Quốc gia.
Qui trình nuôi lợn theo sự cố vấn của Viện Chăn nuôi: Chọn một con lợn con có nguồn gốc rõ, chưa từng nuôi bằng thức ăn công nghiệp hoặc sử dụng các loại thuốc thú y (trừ các loại vacxin). Nuôi dưỡng chăm sóc tốt ít nhất 21 ngày để loại trừ khả năng lợn bị nhiễm Salbutamol.
Nuôi lợn trong chuồng riêng (từ ngày 16.07.2014), cho ăn thức ăn có bổ sung Salbutamol liên tục trong 21 ngày với liều lượng là 10-20 mg/kg thức ăn (từ ngày 18.08.2014 đến ngày 07.09.2014). Trong quá trình nuôi có ghi nhật kí rõ về việc cho ăn và sức khỏe của lợn.
Tiến hành lấy mẫu nước tiểu từ ngày bắt đầu cho ăn bổ sung Salbutamol tới ngày giết mổ vào các buổi. Mỗi mẫu có ghi rõ ngày lấy mẫu, thời gian lấy mẫu và được bảo quản tại tủ bảo quản mẫu trước khi phân tích.
Lợn được mổ vào ngày 08.09.2014 dưới sự giám sát của nhóm phân tích.
Thịt lợn được lọc lấy các phần thịt nạc và đem đồng nhất rồi bảo quản trong tủ bảo quản mẫu trước khi phân tích.
2.2.3. Phương pháp xử lý mẫu
Các mẫu nước tiểu lợn và mẫu thịt lợn được xử lý bằng phương pháp chiết pha rắn [5, 7].
Các bước chiết pha rắn:
Bước 1: Hoạt hóa cột chiết
Cho dung môi đi qua chất hấp thu để làm ướt và hóa các nhóm chức trong vật liệu, đồng thời loại bỏ các khí trong cột, thay thế vào đó là dung môi.
Bước 2: Nạp mẫu vào cột chiết
Tùy theo kích thước cũng như loại mẫu, có thể sử dụng phương pháp chảy bình thường hoặc dùng áp suất, điều quan trọng là phải giữ được toàn bộ chất phân
tích. Chất phân tích có thể cùng với một vài chất khác được giữ lại trên cột, các tạp chất đi ra khỏi cột càng nhiều càng tốt.
Bước 3: Rửa loại tạp chất
Đây là giai đoạn loại các tạp chất. Điều quan trọng là chất phân tích không được tan trong dung dịch rửa.
Bước 4: Rửa giải chọn lọc chất phân tích
Hình 2.1. Các bước chiết pha rắn
2.2.4. Quy trình xử lý mẫu nước tiểu bằng phương pháp chiết pha rắn
Chiết pha rắn được nghiên cứu nhằm nâng cao hiệu quả xử lý mẫu nước tiểu lợn đối với việc phân tích Salbutamol. Dựa trên tham khảo tài liệu [2] và điều kiện sẵn có của phòng thí nghiệm chúng tôi tiến hành nghiên cứu xử lý mẫu nước tiểu lợn bằng 2 quy trình được cho duới đây với 2 loại cột chiết pha rắn là cột C18 (Sep- Park Water, Mỹ, 3 ml), (quy trình 1) và cột trao đổi cation mạnh (Bond Elut SCX, 3 ml) và (Bond Elut SCX, 6 ml) (quy trình 2).
Quy trình 1: Cột C18
Cột C18
Hoạt hoá 3 ml CH3OH + 3 ml H2O+3 ml đệm photphat pH = 6
Nạp mẫu 5 ml nuớc tiểu + 10 àl Sal 100 ppm
Rửa tạp 2 ml H2O + 1 ml CH3COOH 0,1 M
Rửa giải 3 ml CH3OH
Thổi khô khí nitơ 450 Hũa tan cặn bằng 100 àl CH3OH Quy trình 2 : Cột SCX 3 ml, và SCX 6 ml
SCX
Hoạt hoá 10 ml CH3OH + 10 ml H2O+10 ml đệm photphat pH 6
Nạp mẫu 10 ml nuớc tiểu + 10 àl Sal 100 ppm
Rửa tạp 6 ml H2O
Thổi khô cột, rửa giải 6 ml hh CH3OH/NH3(95/5)
Thổi khô bằng dòng khí nitơ ở 450 Hũa tan cặn bằng 100 àl CH3OH
2.2.5. Quy trình xử lý mẫu thịt bằng phương pháp chiết pha rắn
Chiết pha rắn được nghiên cứu nhằm nâng cao hiệu quả xử lý mẫu thịt lợn đối với việc phân tích Salbutamol. Dựa trên kết quả nghiên cứu với mẫu nước tiểu, tham khảo tài liệu và điều kiện sẵn có của phòng thí nghiệm chúng tôi tiến hành nghiên cứu xử lý mẫu nước tiểu lợn bằng 2 quy trình được cho duới đây với 2 loại cột chiết pha rắn là cột C18 (Sep-Park Water, Mỹ, 3ml), (quy trình 1) và cột trao đổi cation mạnh (Bond Elut SCX, 3 ml) và (Bond Elut SCX, 6 ml) (quy trình 2).
Quy trình 3: Cột C18
Cột C18
Hoạt hoá 3 ml CH3OH + 3 ml H2O+3 ml đệm photphat pH = 6
Nạp mẫu
Rửa tạp 3 ml HCOOH 2% +3 ml CH3OH
thổi khô cột, rửa giải 3 ml hỗn hợp (3%NH3 và CH3OH)
Thổi khô khí nitơ 450 Hũa tan cặn bằng 100 àl CH3OH
Quy trình 4: Cột SCX
SCX
Hoạt hoá 10 ml CH3OH + 10 ml H2O+10 ml đệm photphat pH 6
Nạp mẫu
Rửa tạp 6 ml H2O+ 3 ml CH3OH
Thổi khô cột, rửa giải 6 ml hỗn hợp CH3OH/NH3(95/5)
Thổi khô bằng dòng khí nitơ ở 450 Hũa tan cặn bằng 100 àl CH3OH