3.1. Phết dung dịch Albumin lên lame:
Chuẩn bị:
Dung dichAlbumin Lame
Que tăm
Tiến hành: Nhúng que tăm vào dung dịch Albumin, dùng que tăm này dàn đều mỏng dung dịch Albumin lên lame. Để khơ dưới ánh đèn trịn.
3.2. Quy trình thực hiện tiêu bản cố định về quá trình nguyên phân ở rễ hành: hành:
Rễ hành sau khi được định hình, làm mềm bằng HCl 1N, nhuộm rễ bằng thuốc nhuộm carmin – acêtic hay hematoxyline – phèn sắt giống như thực hiêïn tiêu bản tạm thời.
Dùng kim mũi giáo cắt lấy mơ phân sinh của rễ, đặt mơ phân sinh lên lame cĩ phết albumni, nhỏ lên lame một giọt thuốc nhuộm, đậy lamelle lại, đè đẹp mẫu bằng đầu cây que diêm, sau đĩ quan sát dưới kính hiển vi, nếu mẫu rõ, đẹp, ta chuyển sang giai đoạn tách mẫu.
Tách mẫu:
Dùng chậu thuỷ tinh cĩ đường kính 20cm, cho vào chậu dung dịch Acid acêtic 10%. Đặt tiêu bản cĩ mẫu nhuộm lên 2 chiếc đĩa thuỷ tinh gác ngang qua hai miếng bìa cứng đặt ở đáy chậu.
Nếu tách mẫu bằng hơi Acid acêtic, mất thời gian từ 20 đến 30 phút với nồng độ Acid acêtic 20%.
Nếu cho dung dịch Acicd acêtic 10% ngập mẫu thời gian tách mẫu diễn ra nhanh hơn, khoảng 10 phút
Khử nước:
Tiêu bản sau khi tách mẫu, được rữa bằng nước cất, sau đĩ lượt cho vào cồn cĩ nồng độ tăng dần. Cồn 10o: 20phút Cồn 20o: 20 phút Cồn 30o: 20 phút Cồn 40o: 20 phút Cồn 50o: 20 phút Cồn 60o: 20 phút Cồn 70o: 20 phút Cồn 80o: 20 phút Cồn 90o: 20 phút Cồn tuyệt đối: 20phút
Mục đích khử nước để loại ra khỏi tế bào. Tế bào mơ phân sinh mềm, mỏng, dễ bị co rút khi cho vào cồn cĩ nồng độ cao, vì thế ta phải loại nước từ từ với nồng độ cồn tăng dần.
Làm trong mẫu: Tiêu bản sai khi đã khử hết nước, sẽ được làm trong mẫu bằng cách cho vào Xylen cĩ nồng độ tăng dần.
XylenI: 5 phút Xylen II: 5 phút Xylen III: 5 phút Xylen tuyệt đối: 5 phút
Dán mẫu:
Chuẩn bị:
-Baume canada được pha loảng bằng Xylen. -Lamelle.
-Khay đựng mẫu. Tiến hành:
Khi mẫu trong, dùng baume canada đã pha loảng để dán lamelle lên mẫu, khi đậy lamelle tránh khơng cho cĩ bọt khí.
Để tiêu bản vào khay đựng mẫu, chờ khơ tự nhiên khoảng 3 ngày, dán nhãn cho vào hộp bảo quản.
3.3. Quy trình thực hiện tiêu bản cố định về quá trình giảm phân ở cờ bắp non: non:
Giầm mẫu:
Cách lấy bao phấn cũng giống như khi thực hiện bản tạm thời, bao phấn lấy ra đựơc đưa lên lame đã phết albumin dùng lưỡi dao lam hoặc đầu kim mũi giáo cắt đơi bao phấn. Sau đĩ nhuộm bằng thuốc nhuộm là dùng dung dịch carmin hoặc dung dịch hematoxyline.
-Thuốc nhuộm là dung dịch carmin: pha thuốc nhuộm với Acid acêtic 45% theo tỷ lệ 1: 1.
-Thuốc nhuộm là dung dịch hematoxyline: Pha thuốc nhuộm với Acid acêtic 45% tye lệ 1:2 (1 Phần thuốc nhuộm và 2 phần Acid acêtic).
Chờ cho mẫu khơ thuốc nhuộm, đem mẫu đi khử nước. Đối với cờ bắp, bằng phương pháp giầm mẫu, chúng tơi bỏ qua giai đoạn tách mẫu.
Thời gian chờ mẫu khơ khoảng 10 phút. Nếu mẫu chưa khơ, đem khử nước sớm, mẫu sẽ bị trơi.
Khử nước:
Mẫu đựơc rữa bằng nước cất, sau đĩ lần lượt cho vào cồn cĩ nồng độ tăng dần. Cách khử nước giống với tiêu bản cố định ở rễ hành. Vì thế bào sinh giao tử mềm, mỏng giống như tế bào mơ sinh ở rễ, cũng dễ bị co rút khi cho vào cồn cĩ nồng độ cao, vì thế ta phải loại nước từ từ với nồng đợ cồn tăng dần
Làm trong mẫu:
Tiêu bản sau khi đã khử hết nước, sẽ được làm trong mẫu bằng cách cho vào Xylen cĩ nồng độ tăng dần. Cách làm trong mẫu giống tiêu bản cố định ở rễ hành.
Dán mẫu:
Dán mẫu bằng baume canada được pha lỗng bằng xylen, cách dán giống như dán tiêu bản ở rễ hành.
Bảng tĩm tắt quy trình thực hiện tiêu bản cố định về sự nguyên phân ở tế bào mơ phân sinh của rễ hành (Allium fistulosu)
Hĩa chất sử dụng Từng bước Tổng Cộng I Cố định -Cố định -Rửa -Dung dịch carnoy -Nước cất 2 giờ 5 phút 2 giờ 5 phút
Mẫu được cố định, giữ cho cấu trúc của nĩ như trạng thái sống và khơng bị tiếp tục phân hủy. II Làm mềm mẫu vật -Làm mềm vật mẫu -Rửa -Dung dịch HCl 1N -Nước cất 15 phút 5 phút 20 phút Mẫu vật mềm. Carmin– acetic