CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.2. TỶ LỆ DƯƠNG TÍNH EV71 CHẨN ĐOÁN THEO PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ
3.2.1. Tỷ lệ dương tính EV71 chẩn đoán theo phương pháp RT-PCR
Đoạn gen đích có kích thước 376bp trong vùng gen VP1 của EV71đã được nhân dòng thành công bằng kỹ thuật RT-PCR sử dụng cặp mồi MAS01 và MAS2A [34]. Chứng dương là chủng chuẩn nuôi cấy từ đại học Gothenburg -Thụy Điển và chứng âm là nước từ kit thương mại Qiagen quantitect probe RT-PCR. Kết quả điện di sản phẩm sau phản ứng RT-PCR đƣợc thể hiện ởHình 3.5 sau:
Hình3.5: Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR chẩn đoán EV71
Trong đó: 1,2: Mẫu bệnh phẩm 3: Mẫu chứng âm 4: Mẫu chứng dương 5: Thang chuẩn DNA 100bp
Trên Hình 3.5kết quả điện di sản phẩm RT-PCR chẩn đoán EV71 cùng với thang chẩn 100bp trên gel agarose 1,5% cho thấy: mẫu chứng dương ở vị trí số 4 xuất hiện một băng duy nhất có kích thước 376 bp, mẫu chứng âm ở vị trí số 3 không xuất hiện băng nào. Mẫu bệnh phẩm ở vị trí số 2 xuất hiện một băng duy nhất có cùng kích thước với chứng dương nên mẫu số 2 được xem là mẫu dương tính với EV71. Ngƣợc lại ở vị trí mẫu số 1 không xuất hiện bất kỳ băng nào nên đƣợc xem là mẫu âm tính với EV71.
Ứng dụng phương pháp RT-PCR EV71 chúng tôi tiến hành chẩn đoán trên 86 bệnh nhân và 100 bệnh phẩm đã dương tính với EV. Kết quả chúng tôi thu được nhƣ sau:
8bệnh nhândương tính với EV71chiếm 9,3%và 78 bệnh nhân âm tính chiếm 90,7%.13 bệnh phẩmdương tính với EV71chiếm 12,7% và 69 bệnh phẩm âm tính với EV71chiếm 87,3%. Trong đó, 1 bệnh nhân có cả mẫu phân, dịch tỵ hầu và dịch nội khí quản, 4 bệnh nhân có mẫu dịch họng và phân cùng dương tính với EV71, 4 bệnh nhân chỉ có dịch họng và 1 bệnh nhân chỉ có phân dương tính với EV71.
Kết quả đƣợc minh họa bằng Bảng 3.3 và Hình 3.6
Bảng 3.3: Tỷ lệ dương tính EV71 chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR
RT-PCR EV71 Dương tính Âm tính
Bệnh nhân 8 (9,3%) 78 (90,7%)
Bệnh phẩm 13 (13%) 87 (87%)
87 78
8 13
90 Dương tính
Âm tính
45
0
Bệnh nhân Bệnh phẩm
Hình 3.6: Tỷ lệ dương tính EV71 chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR Chúng tôi so sánh kết quả của mình với kết quả của tác giả Piyada
Linsuwanon và cộng sự trên 1182 bệnh nhân có tỷ lệ dương tính với EV71 là 9,1%
[35]. Như vậy, kết quả của chúng tôi có tỷ lệ dương tính với EV71tương đương với tác giả.
Kết quả nghiên cứu của tác giả Tăng Chí Thƣợng trên 419 bệnh nhân có tỷ lệ dương tính EV71 là 38,9% [4] và nghiên cứu của tác giả Phan Van Tu và cộng sự có tỷ lệ EV71 dương tính trong nghiên cứu 764 bệnh nhân là 42,1%[36]. Như vậy, tỷ lệ dương tính EV71 trong nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn so với hai tác giả này . 3.2.2. Tỷ lệ dương tính EV71 chẩn đoán theo phương pháp realtime RT-PCR
Ứng dụng kỹ thuật realtime RT-PCR chúng tôi khuếch đại thành công đoạn gen đích trên gen VP1với cặp mồi và phân tử Taqman Probe đặc hiệu (EV71-VP1- 634F, EV71-VP1-743R, EV71-VP1-TaqMan), chứng dương là RNA được tách chiết từ chủng chuẩn nuôi cấy từ đại học Gothernburg -Thụy Điển, chứng âm là nước lấy từ kit thương mại Qiagen quantitect probe RT-PCR kết quả minh họa trong Hình 3.7 sau:
Hình 3.7: Kết quả realtime RT-PCR chẩn đoán EV71
EV71-1, EV71-2, EV71-3, EV71-4 : mẫu bệnh phẩm NC-EV71: chứng âm
PC-EV71: chứng dương
Trên Hình 3.7 cho thấy mẫu chứng dương có tín hiệu huỳnh quang hình sin vượt qua tín hiệu nền ở chu kỳ 22,3. Các mẫu EV71-1, EV71-4 có tín hiệu tương tự với mẫu chứng dương PC-EV71 nên là mẫu dương tính với EV71 ở chu kỳ 19,1 và 34,2. Mẫu EV71-2, EV71-3 có tín hiệu huỳnh quang thấp không vƣợt qua tín hiệu nền giống với chứng âm NC-EV71 nên là mẫu âm tính với EV71. Nhƣ vậy, chúng tôi đã ứng dụng thành công phương pháp realtime RT-PCR trong chẩn đoán EV71.
Chúng tôi tiếp tục sử dụng phương pháp này để chẩn đoán 86 bệnh nhân và 100 bệnh phẩm đã dương tính với EV. Kết quả thu được như sau:
12 bệnh nhân dương tính với EV71 chiếm 14% và 74 bệnh nhân âm tính với EV71 chiếm 86%. 19 bệnh phẩm dương tính với EV71 chiếm 19% và 81 bệnh phẩm âm tính với EV71 chiếm 81%.
Kết quả đƣợc mô tả ở Bảng 3.4 và Hình 3.8.
74 81
12 19
Bảng 3.4: Tỷ lệ dương tính EV71 chẩn đoán bằng phương pháp realtime RT-PCR
Realtime RT-PCR Dương tính Âm tính
Bệnh nhân 12 (14%) 74 (86%)
Bệnh phẩm 19 (19%) 81 (81%)
90 Dương tính
Âm tính
45
0
Bệnh nhân Bệnh phẩm
Hình 3.8: Tỷ lệ dương tính EV71 chẩn đoán bằng phương pháp realtime RT-PCR Chúng tôi so sánh kết quả của mình với tác giả Tran Tan Thanh và cộng sự trên 112 bệnh nhân dương tính EVs có tỷ lệ dương tính EV71 là 6,3% [42]. Như vậy, kết quả của chúng tôi có tỷ lệ dương tính EV71 cao hơn so với tác giả này .
Theo một nghiên cứu của tác giả Yi-hong Xie ở Guang - Xi, Trung Quốc. Tỷ lệ dương tính EV71 trong 3 năm 2008, 2009, 2010 lần lượt là: 38,8%; 15,5% và 71,3% [52]. Như vậy, kết quả của chúng tôi có tỷ lệ dương tính thấp hơn so với tác giả.
Kết quả nghiên cứu của tác giả Wei Li có tỷ lệ dương tính EV71 trong năm 2010 là 25%, năm 2011 là 20% [48]. Nhƣ vậy kết quả của tác giả Wei Li có tỷ lệ dương tính cao hơn của chúng tôi.
3.3. So sánh tỷ lệ dương tính EVs và EV71 được chẩn đoán bằng hai phương pháp RT-PCR và realtime RT-PCR
Tiến hành so sánh kết quả chẩn đoán EVs bằng phương pháp RT-PCR và realtime RT-PCR chúng tôi nhận thấy nhƣ sau:
Ngoài 82 (32,2%) bệnh nhân dương tính với EVs chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR, chúng tôi phát hiện thêm 4 bệnh nhân khác dương tính với EVschẩn đoán bằng kỹ thuật realtime RT-PCR. Như vây, tỷ lệ dương tính bằng kỹ thuật realtime RT-PCR là 33,7%, tăng 1,5% so với phương pháp RT-PCR.
Ngoài 93 bệnh phẩm dương tính với EVs bằng phương pháp RT-PCR, phát hiện thêm 7 bệnh phẩm khác dương tính với EVs bằng kỹ thuật realtime RT-PCR.
Trong đó, 1 bệnh nhân dương tính với cả phân và dịch não tủy, 2 bệnh nhân dương tính với cả dịch họng và phân, 1 bệnh nhân dương tính với dịch họng. Như vậy tỷ lệ dương tính EVs chẩn đoán bằng kỹ thuật realtime RT-PCR là 32,8%, tăng 2,3% so với phương pháp RT-PCR. Kết quả minh họa ở Bảng 3.5 sau:
Bảng 3.5: So sánh kết quả chẩn đoán EVs bằng hai phương pháp RT-PCR và realtime RT-PCR
Bệnh nhân Bệnh phẩm
Phương pháp Dương tính Âm tính Dương tính Âm tính RT-PCR 82 (32,2%) 173 (67,8%) 93 (30,5%) 212 (69,5%) Realtime RT-PCR 86 (33,7%) 169 (66,3%) 100 (32,8%) 205 (67,2%)
Những bệnh nhân và bệnh phẩm đƣợc phát hiện thêm bằng kỹ thuật realtime RT-PCR đƣợc phát hiện ở chu kỳ 35, 36, 37,38. Trong khi kỹ thuật RT-PCR đƣợc giới hạn trong 35 chu kỳ. Những mẫu phát hiện thêm tiếp tục chúng tôi tiến hành xác định nồng độ dựa vào một dãy chuẩn pha loãng đã biết trước nồng độ từ 25000 copies/ml tới 1600000 copies/ml của đại học Gothenburg - Thụy Điển. Các chỉ số đảm bảo kết quả của phản ứng realtime RT-PCR là: hệ số tương quan R2= 0,992, độ cong: -3,366, hiệu suất phản ứng: 98,2%. Nhƣ vậy các chỉ số đều nằm trong khoảng cho phép của một phản ứng realtime Rt-PCR. Kết quả chúng tôi thu đƣợc ở Bảng 3.6 và Hình 3.9 sau:
Bảng 3.6: Nồng độ EVs các mẫu phát hiện thêm bằng kỹ thuật realtime RT-PCR
Bệnh nhân 1 2 3 4
Bệnh phẩm Dịch não tủy Phân Dịch họng Phân Dịch họng Phân Dịch họng
Chu kỳ phát hiện 37 35 36 38 37 35 36
Nồng độ
(x103 copies/ml) 5 20 10 2.5 5 20 10
Hình 3.9: Đồ thị phản ứng realtime RT-PCR đo nồng độ EVs
Tương tự với EVs, chúng tôi tiến hành so sánh kết quả chẩn đoán EV71 bằng phương pháp RT-PCR và realtime RT-PCR kết quả như sau:
Ngoài 8 bệnh nhân dương tính EV71 chiếm 9,3%chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR, chúng tôi xác định được thêm 4 bệnh nhân khác dương tính với EV71 bằng phương pháp realtime RT-PCR. Như vậy, tỷ lệ dương tính với EV71 chẩn đoán bằng kỹ thuật realtime RT-PCRlà 14%, tăng 4,7%so với chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR.
Ngoài 13 bệnh phẩm dương tính với EV71 chiếm 13% chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR, chúng tôi xác định thêm 6 bệnh phẩm khácdương tính với EV71 bằng phương pháp realtime RT-PCR. Trong đó, 2 bệnh nhân dương tính với
cả dịch họng và phân, 1 bệnh nhân dương tính vớidịch họng và 1 bệnh nhân dương tính với phân. Như vậy, tỷ lệ dương tính với EV71 là 19%, tăng 6%so với chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCR. Kết quả minh họa ở Bảng 3.7 sau:
Bảng 3.7: So sánh kết quả chẩn đoán EV71 bằng hai kỹ thuật RT-PCR và realtime RT-PCR
Bệnh nhân Bệnh phẩm
Phương pháp Dương tính Âm tính Dương tính Âm tính
RT-PCR 8 (9,3%) 78 (90,7%) 13 (13%) 87 (87%)
Realtime RT-PCR 12 (14%) 74 (86%) 19 (19%) 81 (81%) Chúng tôi thống kê các mẫu đƣợc phát hiện thêm thì thấy rằng các mẫu này có chu kỳ phát hiện từ 35, 36, 37, 38. Kết quả đƣợc minh họa ở Bảng 3.8 sau
Bảng 3.8. Chu kỳ ngưỡng các mẫu dương tính EV71 phát hiện thêm bằng kỹ thuật realtime RT-PCR
Bệnh nhân 1 2 3 4
Bệnh phẩm Phân Dịch họng Phân Dịch họng Phân Dịch họng
Chu kỳ phát hiện 36 35 36 37 36 38
Như vậy, kết quả chẩn đoán EVs và EV71 bằng phương pháp realtime RT- PCR trên bệnh nhân có tỷ lệ 33,7% và 14% đều cao hơn kết quả chẩn đoán bằng phương pháp RT-PCRlà 32,2% và 9,3%. Kết quảnày của chúng tôi cũng hoàn toàn phù hợp với kết quả của tác giả Noordhoek GT[28]. Theo tác giả này, realtime RT- PCR là phương pháp có độ nhạy, độ đặc hiệu cao hơn do được sử dụng cặp mồi đặc hiệu và 1 phân tử Probe gắn huỳnh quang bổ sung với sợi DNA đích thay vì chỉ có một cặp mồi đặc hiệu của phương pháp RT-PCR. Thêm vào đó, realtime RT-PCR là phương pháp dễ dàng tiến hành, thời gian cho kết quả nhanh hơn và hạn chế được nhiễm chéo giữa các mẫu bệnh phẩm do không cần phải điện di và thực hiện nhiều thao tác đóng mở lắp ống như phương pháp RT-PCR cổ điển. Kết quả của phương pháp realtime RT-PCR đƣợc đọc trên máy tính tránh đƣợc nhầm lẫn, sai sót rất nhiều so với mắt thường như phương pháp RT-PCR thông thường. Do vậy chúng
tôi đã áp dụng phương pháp này để phục vụ cho các chẩn đoán EVs và EV71 sau này.
3.4. TỶ LỆ PHÂN BỐ EVs VÀ EV71 THEO GIỚI TÍNH 3.4.1. Tỷ lệ phân bố EVs theo giới tính
Trong 255 bệnh nhân nghi nhiễm EVs có 173 nam, 82 nữ. Nhƣ vậy tỷ lệ nam:nữ là 2,11:1. Qua xét nghiệm cho kết quả nhƣ sau:
Có 62/173 (35,8%) bệnh nhân nam và 24/82 (29,3%) bệnh nhân nữ dương tính với EVs. Kết quả đƣợc minh họa ở Bảng 3.9 và Hình 3.10.
Bảng3.9: Tỷ lệ phân bố EVstheo giới tính
EVs Dương tính Âm tính
Nam 62 (35,8%) 111 (64,2%)
Nữ 24 (29,3%) 58 (70,7%)
Tổng 86 (33,7%) 169 (69,3%)
120 111 Dương tính
Âm tính
80 62 58
40 24
0
Nam Nữ
Hình 3.10: Phân bố EVs theo giới tính
Tỷ lệ bệnh nhân dương tính với EVs trong nghiên cứu của chúng tôi giữa trẻ nam: nữ là 1,22 :1. Trong khi đó, theo tác giả Nino Khetsuriani và cộng sự trong khảo sát về tỷ lệ nhiễm EVs ở Mỹ giai đoạn 1970 - 2005 cho thấy tỷ lệ dương tính
với EVscủa nam:nữ là 1,3:1 [26].Trong một công bố khác của tác giả Xiao-ni Zou và cộng sự nghiên cứu ở thành phố Guangzhou tỷ lệ nhiễm EVs giữa trẻ nam và trẻ nữ năm 2008 là 1,7:1; năm 2009 là 1,4:1 và năm 2010 là 1,56:1 [51].Kết quả nghiên cứu của tác giả Wei Li cho thấy tỷ lệ dương tính nam : nữ là 1 : 1 [48].Như vậy, kết quả của chúng tôi cho tỷ lệ tương đương với cả ba tác giả này.
3.4.2. Tỷ lệ phân bố EV71 theo giới tính
Trong 86 bệnh nhân nhiễm EVs có 62nam, 24 nữ. Nhƣ vậy, tỷ lệ nam:nữ là 2,58:1. Qua xét nghiệm cho kết quả nhƣ sau:
Có 9/62 (14,5%) bệnh nhân nam, 3/24 (12,5%) bệnh nhân nữ dương tính với EV71 . Kết quả đƣợc minh họa ở Bảng 3.8 và Hình 3.10
Bảng 3.10: Tỷ lệ phân bố EV71 theo giới tính
EV71 Dương tính Âm tính
Nam 9 (14,5%) 53 (85,5%)
Nữ 3 (12,5%) 21 (90,3%)
60 53 Dương tính
Âm tính
30 21
9
3 0
Nam Nữ
Hình 3.11: Phân bố EV71theo giới tính
Trong nghiên cứu của chúng tôi có tỷ lệ dương tính với EV71 giữa trẻ nam:nữ là 1,16 : 1. So sánh với một số các nghiên cứu khác đã đƣợc các tạp chí trên thế giới công nhận chúng tôi thấy nhƣ sau:
Kết quả nghiên cứu của tác giả Ru WP và cộng sự trên 201 bệnh nhân nhiễm EV71 cho thấy tỷ lệ dương tính giữa trẻ nam:nữ là 2,2:1,85 [38].
Theo tác giả Sun Limei mô tả đặc điểm dịch tễ của vụ dịch chân tay miệng năm 2008 ở GuangDong, Trung Quốc mà tác nhân chính là do EV71 có tỷ lệ dương tính với EV71 giữa trẻ nam:nữ là 1,8:1 [41].
Như vậy nghiên cứu của chúng tôi có kết quả tương đương với kết quả nghiên cứu của Ru WP nhƣng lại thấp hơn so với tác giả Sun Limei.
3.5. TỶ LỆ PHÂN BỐ EVs VÀ EV71 THEO NHểM TUỔI 3.5.1. TỶ lệ phân bố EVs theo nhóm tuổi
Dựa vào quan sát của chúng tôi về nhóm tuổi của trẻ em điều trị tại bệnh viện Nhi trung ƣơng có chẩn đoán mắc EVs, chúng tôi đã chia nhóm tuổi của bệnh nhân thành 5 mức độ khác nhau như sau: nhóm 1 là trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ dưới 1 tuổi, nhóm 2 là trẻ có độ tuổi từ 1 tới 2 tuổi, nhóm 3 là trẻ có độ tuổi từ 2 tới 3 tuổi, nhóm 4 là trẻ từ 3 tới 4 tuổi, nhóm 5 là trẻ từ 4 tuổi trở lên. Đối với mỗi nhóm tuổi chúng tôi lại có sự quan sát và phân tích sự khác nhau giữa hai giới tính nam và nữ và kết quả chúng tôi thu đƣợc nhƣ sau:
Nhóm 1: trong nhóm này chúng tôi quan sát thấy có 63 bệnh nhân nghi nhiễm EVs, sau khi tiến hành chẩn đoán bằng phương pháp realtime RT-PCR, kết quả cho thấy có 27/63 (42,9%) bệnh nhân dương tính và 36/63 (57,1%) âm tính với EVs. Trong đó tỷ lệ dương tính ở nam giới là 21/45 bệnh nhân (46,7)% và nữ giới là: 6/18 (33,3%).
Nhóm 2: Có 88 bệnh nhân nghi nhiễm EVs trong đó có 30/88 (34,1%) bệnh nhân là dương tính và 58/88 (65,9%) âm tính với EVs. Trong đó tỷ lệ dương tính ở nam giới là: 22/56 (39,3%) và nữ giới là: 8/32 (25%).
Nhóm 3: Có 51 bệnh nhân nghi nhiễm EVs trong đó có 19/51 (37,3%) bệnh nhân dương tính và 32/51 ( 62,7%) âm tính với EVs. Trong đó tỷ lệ dương tính ở nam giới là: 14/33 (42,4%) và nữ giới là: 5/18 (27,8%).
88 Tổng
% dương tính 42.9
63 34.1 37.3
51
21.7
27 30 16.7
30
19 23
5 5
Nhóm 4: Có 23 bệnh nhân nghi nhiễm EVs trong đó có 5/23 (21,7%) bệnh nhân dương tính và 18/23 (78,3%) âm tính với EVs. Trong đó tỷ lệ dương tính ở nam giới là: 2/15 (13,3%) và nữ giới là: 3/8 (37,5%).
Nhóm 5: Có 30 bệnh nhân nghi nhiễm EVs trong đó có 5/30 (16,7%) bệnh nhân dương tính và 25/30 (83,3%) âm tính với EVs. Trong đó tỷ lệ dương tính ở nam giới là: 3/21 (14,3%) và nữ giới là: 2/6 (33,3%).
Kết quả đƣợc minh họa bằng Bảng 3.10và Hình 3.12
Bảng 3.11: Tỷ lệ phân bố EVs theo độ tuổi
Độ tuổi Dương tính Âm tính
Nhóm 1 27 (42,9%) 36 (57,1%)
Nhóm 2 30 (34,1%) 58 (65,9%)
Nhóm 3 19 (37,3%) 32 (62,7%)
Nhóm 4 5 (21,7%) 18 (78,3%)
Nhóm 5 5 (16,7%) 25 (83,3%)
Dương tính %
100 50
50 25
0 0
Nhóm 1 Nhóm 2 Nhóm 3 Nhóm 4 Nhóm 5
Hình 3.12 : Phân bố EVs theo độ tuổi bệ
nh nh ân
Nhìn vào bảng và biểu đồ phân bố EVs theo độ tuổi chúng tôi nhận thấy rằng độ tuổi có tỷ lệ nhiễm EVs cao là dưới 3 tuổi. Trong đó trẻ dưới 1 tuổi có tỷ lệ dương tính với EVslà lớn nhất ở cảtrẻ nam và trẻ nữ. Kết quả này của chúng tôi phù hợp với nghiên cứu của Jeon JS tại Cheonan, Hàn Quốc trong giai đoạn từ năm 2008 tới 2010có tỷ lệ dương tính với EVs ở trẻ em dưới 1 tuổi là cao nhất (64,77%) [19].
Kết quả này của chúng tôi cũng phù hợp khi so sánh với kết quả nghiên cứu của Baek Kyoung Ah ở Chung Nam, Hàn Quốc năm 2008 và 2009 cho thấy tỷ lệ trẻ nhiễm EV cao nhất là nhóm trẻ dưới 1 tuổi, cụ thể là năm 2008 có 31,7% và năm 2009 là 57% trẻ bị nhiễm EVs [7].
Kết quả khảo sát của tác giả V A Jane ở Amsrerdam cho thấy tỷ lệ trẻ nhiễm EVs cao nhất tập trung vào trẻ dưới 3 tuổi với 46,8% [44]. Như vậy kết quả của chúng tôi không khác so với kết quả của tác giả này.
Kết quả nghiên cứu của tác giả Wei li cho thấy tỷ lệ trẻ nhiễm EVs cao nhất là nhóm trẻ từ 1 đến 5 tuổi (tỷ lệ dương tính với EVs từ 30,25% - 34,5%) [48]. Vậy kết quả nghiên cứu này có sự khác biệt so với chúng tôi.
3.6.2. Tỷ lệ phân bố EV71 theo nhóm tuổi
Tương tự như phân tích sự phân bố theo độ tuổi với EVs, ở EV71 chúng tôi cũng chia thành 5 nhóm tuổi. Kết quả chúng tôi thu đƣợc nhƣ sau:
Nhóm 1: Trong nhóm này có 27 bệnh nhân nhiễm EVs, sau khi tiến hành chẩn đoán EV71 bằng phương pháp Realtime RT-PCR, kết quả cho thấy có 7/27 (25,9%) bệnh nhân dương tính và 20/27 (74,1%) âm tính với EV71. Trong đó, tỷ lệ dương tính ở trẻ nam là 7/21 (33,3%) và trẻ nữ là 0/6
Nhóm 2: Có 30 bệnh nhân nhiễm EVs trong đó có 3/30 (10%) bệnh nhân là dương tính và 27/30 (90%) âm tính với EV71. Trong đó, tỷ lệ dương tính ở nam giới là: 2/22 (9,1%) và nữ giới không phát hiện được trường hợp nào (0/8)
Nhóm 3: Có 19 bệnh nhân nhiễm EVs trong đó có 2/19 (10,5%) bệnh nhân dương tính và 17/19 (89,5%) âm tính với EV71. Trong đó ở trẻ nam không phát hiện được trường hợp nào (0%) và trẻ nữ là 2/5 (40%).