Mẫu cây tươi mới thu hái được sấy khô đem nghiền nhỏ rồi ngâm kiệt với metanol ở nhiệt độ phòng cho đến khi nhạt màu. Dịch chiết được cất loại dung môi ở áp suất giảm. Cặn dịch chiết metanol được chiết lần lượt với n- hexan, etylaxetat, metanol và thu được các cặn chiết tương ứng, làm khan bằng Na2SO4. Việc thu nhận các dịch chiết từ cây thổ phục linh (Smilax grabra Roxb) tóm tắt trong sơ đồ 2.1.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Sơ đồ 2.1: Sơ đồ ngâm chiết mẫu cây thổ phục linh (Smilax glabra)
Sm. H Sm. E Sm. M
Các phân đoạn dịch chiết nói trên được làm khan bằng Na2SO4 , lọc rồi cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm, cặn được sấy khô và cân đến khối lượng không đổi. Như vậy từ củ cây Smilax glabra sẽ có 3 loại cặn chiết được ký hiệu là:
Sm. H, Sm. E, Sm. M
Ký hiệu:
Sm. H: Cặn chiết n-Hexan của củ cây Smilax glabra
Sm. E: Cặn chiết EtOAc của củ cây Smilax glabra
Sm. M: Cặn chiết MeOH của củ cây Smilax glabra
Kết quả thu nhận các dịch chiết từ củ cây thổ phục linh ở Thái Nguyên được nêu trong bảng 2.1
Mẫu khô (2kg) nghiền nhỏ n- hexan ( 8.3g ) Etylaxetat ( 37.3g ) Metanol (31,1g) Cặn tổng Metanol 1. MeOH
2. Cất loại dung môi dưói áp suất giảm 3. Cặn
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 2.1: Khối lƣợng các cặn chiết thu đƣợc từ củ cây thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.,)
Mẫu thu vào tháng 02/2010
Khối lượng mẫu khô (g)
Khối lượng cặn chiết thu được (g)
n-hexan EtOAc MeOH
Củ 2000g 8,3 ( Sm.H) 37,3 ( Sm.E) 31,1 (Sm.M) 2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết 2.3.2.1. Phát hiện các hợp chất sterol
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 2ml dung dịch NaOH 10% đun cách thuỷ đến khô. Hoà tan cặn trong 3ml cloroform - lấy dịch cloroform để làm phản ứng định tình các sterol và thuốc thử Lieberman - Bourchardt (gồm hỗn hợp 1ml anhydric acetic + 1ml cloroform để lạnh ở 00C, sau đó cho thêm 1 giọt H2SO4 đậm đặc). Lấy 1ml dịch cloroform rồi thêm 1 giọt thuốc thử, dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tình.
Ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng dương tình.
2.3.2.2. Phát hiện các ancaloid
Lấy 0.01g cặn các phân đoạn, thêm 5ml HCl, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước lọc axit.
Ống (1): 1 - 2 giọt dung dịch silicostungtic axit 5%, nếu có tủa trắng và nhiều là phản ứng dương tình.
Ống (2): 1 - 2 giọt thuốc thử Dragendorf, nếu xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tình.
Ống (3): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng dương tình.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Lấy 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 10ml metanol, đun nóng cho tan và lọc qua giấy lọc. Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ìt bột magiê (Mg) hoặc Zn, sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bính cách thuỷ vài phút. Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hoặc màu hồng là phản ứng dương tình với các flavonoid.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.2.4. Phát hiện các cumarin (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Dịch để thử định tình được chuẩn bị như mục 2.3.2.1. Lấy vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml dịch thử cho vào một trong 2 ống đó 0,5ml dung dịch NaOH 10%. Đun cách thuỷ cả hai ống trên đến sôi, để nguội rồi mỗi ống cho thêm 4ml nước cất. Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm có thể xem là phản ứng dương tình, nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong mất màu vàng xuất hiện vẩn đục và có thể tạo ra tủa là phản ứng dương tình.
Ngoài ra có thể làm phản ứng điazo hoá với axit sulfanilic trong môi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, sẽ là dương tình cho cumarin.
2.3.2.5. Định tính các glucosid tim
Chuẩn bị dịch thử định tình cũng làm như mục 2.3.2.1.
+ Phản ứng Legal: cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch thử, thêm vào 1 giọt dung dịch natri prussiat 0,5% và 2 giọt NaOH 10% nếu xuất hiện màu đỏ là phản ứng dương tình với vòng butenolid.
+ Phản ứng Keller - Kilian: Thuốc thử gồm 2 dung dịch. Dung dịch 1: 100ml axit axetic loãng + 1ml FeCl3 5% Dung dịch 2: 100ml axit H2SO4 đậm đặc + 1ml FeCl3 5%
Cách tiến hành: lấy 0,01g cặn các dịch chiết cho vào ống nghiệm thêm vào 1ml dung dịch 1, lắc đều cho tan hết, nghiêng ống nghiệm và cho từ từ 1ml dung dịch 2 theo thành ống nghiệm, quan sát sự xuất hiện của màu đỏ hay nâu đỏ, giữa hai lớp chất lỏng. Nếu không xuất hiện màu là phản ứng âm tình với các glucosit tim.
2.3.2.6. Định tính các saponin
Chuẩn bị dịch thử như ở mục 2.3.2.1. lấy 2 ống nghiệm mỗi ống cho 2ml dịch thử. Ống 1 cho 1ml HCl loãng, ống 2 cho 1 ml NaOH loãng rồi bịt miệng ống nghiệm, lắc trong vòng 5 phút theo chiều dọc, quan sát sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt. Nếu bọt cao quá 3 - 4 cm và bền trên 15
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
phút là phản ứng dương tình.
Kết quả phân tìch định tình các nhóm chất trong cây Smilax glabra
được nêu trong bảng 2.2.
Bảng 2.2 :Kết quả định tính các nhóm chất trong củ cây thổ phục linh
TT Nhóm chất Thuốc thử Hiện tƣợng Củ
1 Sterol Lieberman-Bourchard Màu xanh vàng +
2 Ancaloit Dragendorff Vàng da cam -
3 Flavonoit Zn(Mg) + HCl Dung dịch nhạt màu dẫn đến màu đỏ nhạt + H2SO4 đặc Hồng nhạt + NaOH đặc Vàng + FeCl3 5% Xanh thẫm +
4 Cumarin Phản ứng tạo kết tủa
bông Có kết tủa - 5 Glucosit trợ tim FeCl3 trong CH3COOH + H2SO4đ Nâu đỏ rõ + 6 Saponin Phản ứng tạo bọt Bọt bền trong HCl +
Chú giải : + : Phản ứng dương tình ─ :Phản ứng âm tình
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3. Phân lập và tinh chất các chất
2.3.1. Cặn dịch chiết n-hexan của củ (Sm. H)
Lấy 8,3 g cặn chiết hexan đem tách trên cột silica gel, rửa giải cột bằng hệ dung môi etylaxetat-hexan theo tỷ lệ tăng dần từ 0-100%. Dịch rửa giải thoát ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (5-10 ml/ phân đoạn). Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin-H2SO4 5%, sau đó các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung môi.
2.4.1.1. - Sitosterol (Sm.H1)
Rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan - etyl axetat (20:1), thu được khối chất rắn vô định hính, tách lặp lại trên cột silicagel và kết tinh lại trong n-hexan đã thu được những tinh thể hính kim, không màu, có khối lượng 23mg, RfA=50, nóng chảy ở 135-136C.
1
H-NMR (500 MHz, CDCl3); (ppm): 0,68 (3H, s, Me-18); 1,01 (3H, s, 19-Me); 2 cụm doublet 0,81 và 0,88 (23H, d, J 7,7Hz, Me-26 và Me- 27);0,83 (3H, t, 7.32Hz, Me-29); 0,92 (3H, d, J 10 Hz, Me-21); 3,52 (1H, m, H-3); 5,35 (1H, d, J 5Hz, H-6). 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3); (ppm): 140,8 (s, C-5); 121,7 (d, C-6); 71,8 (d, C-3); 56,8 (d, C-14); 56,1 (d, C-17); 50,2 (d, C-9); 45,9 (d, C-24); 42,3 (s, C-13); 42,3 (t, C-4); 39,8 (t, C-12); 37,3 (t, C-1); 36,5 (s, C-10); 36,2 (d, C- 20); 33,9 (d, C-8); 31,9 (t, C-7); 31,7 (t, C-2); 29,2 (d, C-25); 28,3 (t, C-16); 26,2 (t, C-23); 24,3 (t, C-15); 21,1 (t, C-11); 19,8 (q, C-26); 19,4 (q, C-19); 19,1 (q, C-27); 18,8 (q, C-21); 11,9 (q, C-29); 11,9 (q, C-18); 23.1 (t, C-28); 42.3 (t, C-4). 2.4.1.2. - Sitosterol-glucopyranosit Sm.H2
Tiếp tục rửa giải cột bằng dung môi etylaxetat thu được khối chất rắn vô định hính, có khối lượng 25,1mg, RfB=62, nóng chảy ở 269-270o (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
C.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1073, 1026. Phổ EI-MS : m/z (%) : 396 [M - C6H12O6]+ . Phổ 1 H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ (ppm) : 0.70 (3H, s, 18-Me), 0.93 (3H, s, 19-Me), 0.94 (3H, s, Me). Phổ 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ (ppm) : 140.8 (s, C-5), 122.3 (d, C-6), 101.5 (d, C-1’), 79.5 (d, C-3), 76.9 (d, C-5’), 76.2 (d, C-3’), 74.0 (d, C-2’), 70.8 (d, C-4’), 62.3 (t, C-6’), 57.2 (d, C-14), 56.5 (d, C-17), 50.7 (d, C- 9), 46.4 (d, C-24), 42.7 (s, C-13), 40.2 (t, C-12), 39.1 (t, C-4), 37.6 (t, C-1), 37.1 (s, C-10), 36.4 (d, C-20), 34.4 (t, C-22), 32.3 (d, C-8), 32.2 (t, C-7), 29.9 (t, C-16), 29.7 (t, C-25), 28.5 (t, C-2), 26.7 (t, C-23), 24.6 (t, C-15), 23.5 (t, C- 28), 21.4 (t, C-11), 19.9 (q, C-19), 19.5 (q, C-21), 19.2 (q, C-26), 19.0 (q, C- 27), 12.1 (q, C-29), 12.0 (q, C-18).
2.4.2. Cặn dịch chiết etylaxetat của củ (Sm. E)
Dịch chiết etylaxetat làm khan bằng Na2SO4, sau đó cất loại dung môi dưới áp suất giảm, thu được 36,5g bột thô và 12 g cặn chiết. Kiểm tra sắc ký lớp mỏng thấy các chất chủ yếu tập trung ở bột thô. Làm tương tự như mục 2.4.1 từ 20g bột thô EtOAc đem tách trên cột silicagel. Rửa giải cột bằng hệ dung môi chloroform-metanol tăng dần theo độ phân cực (0-100%), dịch rửa giải thoát ra từ cột được thu ở những khoảng cách nhỏ (510ml/phân đoạn). Kiểm tra cặn thu được bằng sắc ký lớp mỏng và hiện màu bằng thuốc thử vanilin - H2SO4 5% sau đó các phân đoạn giống nhau được dồn lại rồi đem cất loại dung môi.
2.4.2.1. - Sitosterol-glucopyranosit Sm.E
Rửa giải cột bằng hệ dung môi clorform - metanol theo tỷ lệ 95:5 thu được thu được khối chất rắn vô định hính, có khối lượng 10,7mg, RfB=62, nóng chảy ở 269-270o
C.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
rhamnopyranoside (Smitilbin)
Thay đổi hệ dung môi rửa giải cột cloroform - metanol theo tỷ lệ 90:10 thu được khối chất rắn vô định hính. Kết tinh lại trong metanol thu được chất rắn màu trắng khối lượng 37,2mg, RfC=60 nóng chảy ở 165o
C. Phổ FT-IR max (cm-1): 3493, 3443, 3314, 2950, 1619, 1581, 1465, 1366, 1153, 1042, 975. Phổ ESI-MS (m/z : %): Phổ 1 H-NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ (ppm) : 11,74 (1H, s, 5-OH), 8,85 (2H, brs, 3’,5’-OH ), 6,84 (1H, d, J 1,2Hz, H-2’), 6,74 (1H, s, H-4’), 6,72 (1H, s, H-6’), 5,94 (1H, d, J 2,0Hz, H-8), 5,92 (1H, d, J 2,0Hz, H-6), 5,54 (1H, d, J 2,5Hz, H-2), 4,76 (2H, brs, H-1’’ ), 4,21 (1H, d, J 2,5Hz, H-3), 3,47 (1H, brs, H-2’’), 3,19 (1H, dt, J 8,9 và 10,9Hz, H-3’’), 3,05 (1H, t, J 6,1 và 9,1Hz, H-4’’), 2,46 (1H, dd, J 6,4 và 9,4Hz, H-5’’), 0,84 (3H, d, J 6,2Hz, H-6’’). Phổ 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ (ppm) : 193,02 (s, C-4), 167,04 (s, C-7), 163,94 (s, C-5), 162,44 (s, C-9), 145,10 (s, C-3’), 144,93 (s, C-5’), 126,34 (s, C-1’), 117,57 (d, C-4’), 115,07 (d, C-6’), 114,06 (d, C-2’), 100,26 (s, C-10), 98,82 (d, C-1’’), 96,15 (d, C-6), 95,15 (d, C-8), 79,92 (d, C-2), 73,32 (d, C-3), 71,21 (d, C-4’’), 70, 22 (d, C-3’’), 70, 22 (d, C-2’’),68,96 (d, C- 5’’), 17,56 (q, C-6’’). 2.4.2.3 Chất E24.1.11: 5,7,3’,4’-tetrahydroxyflavanonone-3-O-L- rhamnopyranoside (astilbin)
Tiếp tục rửa giải cột bằng hệ dung môi cloroform -metanol theo tỷ lệ 90:10 thu được khối chất rắn vô định hính. Khối chất rắn này lại tinh chế trên cột silica gel cỡ hạt 0,040 - 0,063mm, hệ dung môi rửa giải cloroform - metanol tỷ lệ 9:1 thu được hỗn hợp hai chất có RfD = 55 và RfD = 32. Khối chất rắn này lại tinh chế trên cột silica gel cỡ hạt 0,040 - 0,063mm, hệ dung môi rửa giải cột cloroform - metanol theo tỷ lệ 7:1 thu được 26mg chất kết tinh hính kim, màu trắng, RfD = 55 và 29,1mg chất kết tinh hính kim, màu
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn trắng, RfD = 32 nóng chảy ở 142 - 143o C. Phổ FT-IR max (cm-1): 3427 (nhọn), 3263, 2912, 1640, 1603, 1519, 1476, 1363, 1301, 1177, 1070, 977. Phổ ESI-MS (m/z %): [M-H]+ 449 ứng với [M]+ 450. Phổ 1 H-NMR (500 MHz, MeOD), δ (ppm) : 6,97 (1H, d, J 1,8Hz, H- 2’); 6,86 (1H, dd, J 8,2 và 1,8Hz, H-6’); 6,82 (1H, d, J 8,1Hz, H5’); 5,94 (1H, d, J 2,2Hz, H-6); 5,92 (1H, d, J 2,0Hz, H-8); 5,10 (1H, d, J 10,6Hz, H-2); 4,58 (1H, d, J 10,7Hz, H-3); 4,25 (1H, dd, J 3,6 và 6,3Hz, H-1’); 4,08 (1H, d J 1,3Hz, H-1’’); 3,67 (1H, dd, J 3,3 và 10,6Hz, H-3’’); 3,56 (1H, dd, J 3,1 và 1,6Hz, H-2’’); 3,34 (1H, d, J 11,6Hz, H-4’’); 1,20 (3H, d, J 6,3Hz, H-6’’). Phổ 13 C-NMR (125 MHz, MeOD), δ (ppm) : 195,95 (s, C-4), 168,61 (s, C-7), 165,49 (s, C-5), 164,08 (s, C-9), 147,36 (s, C-4’), 146,53 (s, C-3’), 129,18 (s, C-1’), 120,48 (d, C-6’), 116,35 (d, C-2’), 115,50 (d, C-5’), 102, 49 (s, C-10), 102,14 (d, C-1’’), 97,39 (d, C-6), 96, 28 (d, C-8), 83,94 (d, C-2), 78,57 (d, C-3), 73,81 (d, C-4’’), 72,17 (d, C-3’’), 71,77 (d, C-2’’), 70,51 (d, C- 5’’), 17,83 (q, C-6’’). 2.4.2.4. Chất E5 : 5,7,4’-trihydroxyflavanonone-3-O-L-rhamnopyranoside (Engeletin)
Thay đổi hệ dung môi rửa giải cột cloroform - metanol theo tỷ lệ 85:15 thu được khối chất rắn vô định hính. Khối chất rắn này lại tinh chế trên cột silica gel cỡ hạt 0,040 - 0,063mm, hệ dung môi rửa giải cloroform - metanol theo tỷ lệ tăng dần 9:1 và 7:1. Ở hệ dung môi rửa giải cột cloroform - metanol tỷ lệ 7:1 thu được khối chất rắn vô định hính. Tiếp tục tách lặp lại trên cột silica gel cỡ hạt 0,040 - 0,063mm, hệ dung môi rửa giải cột cloroform - metanol, ở hệ dung môi nói trên theo tỷ lệ 5:1 thu được khối chất rắn vô định hính. Kết tinh lại khối chất rắn này trong metanol thu được 22mg chất kết tinh hính kim màu đỏ, RfE=18, nóng chảy ở 178-180o
C.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1290, 1170, 1026, 977, 826. Phổ ESI-MS (m/z %): [M-H]+ 433 ứng với [M]+ 434 Phổ 1 H-NMR (500 MHz, MeOD), δ (ppm) : 7,38 (2H, d, J 8,5Hz, H-2’ và H-6’), 6,87 (2H, d, J 8,5Hz, H-3’ và H-5’), 5,94 (1H, d, J 2,0Hz, H-6), 5,92 (1H, d, J 2,0, H-8), 5,16 (1H, d, J 10,8Hz, H-2), 4,63 (1H, d, J 10,8Hz, H-3), 4,25 (1H, dd, J 3,6 và 10,8Hz, H-3’’), 4,04 (1H, d, J 1,2Hz, H-1’’), 3,67 (1H, dd, J 3,2 và 9,6Hz, H-4’’), 3,53 (1H, dd, J 1,3 và 3,7Hz, H-2’’), 1,20 (3H, d, J 6,2Hz, H-6’’). Phổ 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ (ppm) : 196,02 (s, C-4), 168,60 (s, C-7), 165,49 (s, C-5), 164,11 (s, C-9), 159,42 (s, C-4’’), 130,03 (d, C-2’), 130,03 (d, C-6’), 128,60 (s, C-1’), 116,46 (d, C-3’), 116,46 (d, C-5’), 102,52 (s, C-10), 102,22 (d, C-1’’), 97,43 (d, C-6), 96,29 (d, C-8), 83,84 (d, C-2), 78,70 (d, C-3), 73,78 (d, C-5’’), 72,17 (d, C-4’’), 71,76 (d, C-2’’), 70,54 (d, C- 3’’), 17,83 (q, C-6’’).
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
CHƢƠNG 3: THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Phát hiện các nhóm chất ở dịch chiết của của cây Smilax glabra Roxb.,
Cấu trúc hoá học của các hợp chất hữu cơ và hoạt tình sinh học của chúng có quan hệ chặt chẽ với nhau do vậy việc tím hiểu hoạt chất ở những cây thuốc dân gian thường được bắt đầu bằng việc thử hoạt tình sinh học và sàng lọc hoá học để từ đó xác định bản chất hoá học của nhóm chất mang hoạt tình sinh học.
Về nguyên tắc, khi ngâm chiết mẫu thường sử dụng những dung môi hữu cơ có độ phân cực tăng dần, như vậy sẽ thu được các cặn chiết có độ phân cực tương tự nhau.
Việc phân đoạn được thực hiện theo sơ đồ 2.1.
Cặn chiết tổng được định hướng thử hoạt tình với tác dụng chống tiểu đường. Các cặn chiết thu được ở những phân đoạn phân cực khác nhau đem thử nghiệm phản ứng hoá học đặc hiệu sẽ cho biết trong đó có những lớp chất nào. Kết quả xác định thành phần định tình một số nhóm chất cơ bản cho biết trong cây thổ phục linh không có phản ứng dương tình với ancaloit và coumarin, có phản ứng dương tình với sterol, flavonoit, glucosid trợ tim và saponin điều này cũng phù hợp với những tài liệu đã thu thập về kết quả nghiên cứu loài S.glabra nước ngoài.
Kết quả thực nghiệm cho biết cặn chiết hexan có khối lượng ìt (8,3g), còn cặn chiết etylaxetat (37,3g) và metanol (31,1g) cho khối lượng tương đối lớn hơn so với cặn n-hexan. Hơn nữa trong quá trính cất loại dung môi để thu nhận cặn chiết etylaxetat đã thu được 36,5g bột thô và 12g cặn chiết. Điều này chứng tỏ các hợp chất tập trung chủ yếu ở cặn etylaxetat. Từ kết quả trên dịch chiết etylaxetat sẽ là đối tượng được chúng tôi định hướng tập trung nghiên cứu.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Các dịch chiết thu được từ cây Smilax glabra là hỗn hợp phức tạp của nhiều hợp chất hữu cơ. Việc tách riêng các chất ra khỏi hỗn hợp được thực hiện trên cột silicagel với các hệ dung môi rửa giải thìch hợp (xem mục 2.4) và thường phải lặp lại một vài lần để thu được chúng ở dạng tinh sạch, đáp ứng yêu cầu xác định cấu trúc hóa học.
3.2. Phân lập và nhận dạng các chất từ dịch chiết
Kết quả đã phân lập được các hợp chất hữu cơ thuộc nhóm chất sterol và flavonoit.
3.2.1. Các hợp chất steroit
Nhóm chất steroit tím thấy trong dịch chiết hexan và etylaxetat từ củ cây thổ phục linh. Dựa vào các đặc trưng hoá lý và quang phổ của 2 chất phân lập được, đối chiếu với chất chuẩn kết hợp so sánh với các dẫn liệu trong bảng 3.1 đã nhận ra chúng là: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.2.1.1. Hợp chất Sm.H1 : -Sitosterol hay stigmast-5-en-24S-3-ol
Những tinh thể hính kim, nóng chảy ở 135-136C, điểm nóng chảy so với chất mẫu không thay đổi. Trong các phổ 1H- và 13C-NMR đã chỉ ra sự có mặt của một nhóm hydroxyl (H tại 3,53ppm (proton của CH liên kết với OH), C tại 71,7ppm và một nối đôi H tại 5,35ppm (1H, d, J 5Hz) tìn hiệu của proton liên kết với C-6 ở vị trì một nối đôi, C-5 tại 140,70ppm, s và C- 6 tại 121,7ppm, d).
Các dữ liệu về phổ NMR đều phù hợp với -sitosterol [16]. (xem bảng 3.1).
3.2.1.2. -Sitosterol glucosid Sm. E (-sitosterol-3-O--D-glucopyranosyl)
Chất rắn vô định hính, nóng chảy ở 269-270C.
Quan sát trên các phổ 13C-NMR và DEPT thấy có 35 tìn hiệu của nguyên tử cacbon, trong đó có 7 nguyên tử cacbon gắn với oxy đặc trưng cho phần đường (nằm trong vùng 61,20 đến 100,8 ppm), có 2 tìn hiệu ở 140,6 và