Quy trình thử nghiệm:

II. Định lượng Creatinin:

7. Quy trình thử nghiệm:

- Bước sóng: 334, 340, 365 nm - Nhiệt đợộ̣ 37 độộ̣ C

 Hỗn hợp phản ứng với huyết thanh: trợộ̣n thuốc thử 1 với 5 thể tích và thuốc thử 2 với 1 thể tích  Nhiệt đợộ̣ từ 2 đến 8 độộ̣ C trong 15 ngày và 18 đến 22 độộ̣ C trong 3 ngày

- Bắt đầu với huyết thanh 1000 μl (hỗn hợp phản ứng) và 100 μl (với mẫu đo)

- Bắt đầu với thuốc thử R2 1000 μl (thuốc thử 1), 100 μl (mẫu đo), 200 μl (thuốc thử 2)

 Trộộ̣n đều và ủ trong 30 giây ở 25 độộ̣ C. Đo sự thay đổi của sự hấp thụ ánh sáng trong ít nhất 3 phút sẽ cho ra 3 khoảng δA bao gồm δA1, δA2, δA3, δA4

δA/phút =

8. Tính tốn:

9. Biện luận:

Trong bệnh nhồi máu cơ tim thì GPT tăng ít hơn, GOT tăng đến 20 lần

Chương 4: Hemoglobin và Acid nucleic

I. Định lượng billirubin toàn phần: Tổng quát:

Billirubin là sắc tố có màu vàng

Billirubin tự do (Billirubin gián tiếp) là sản phẩm của q trình thối hố Hb (Hem)

Sau đó Billurubin tự do kết hợp với acid glucuronic tạo Billirubin liên hợp ở gan và mất tính đợộ̣c đồng thời tan được trong nước Billirubin toàn phần = Billirubin tự do (85%) + Billirubin liên hợp (15%)

Billirubin tự do khuếch tán qua thành mạch và các tổ chức do có thể đi trực tiếp qua màng bán thấm gây vàng da Định lượng Billirubin tồn phần nhằm chẩn đốn chức năng gan, mật,…

Định lượng Billirubin trực tiếp nhằm xác định nguyên nhân của hiện tượng vàng da là trước, tại hay sau gan 1. Nguyên tắc:

Cần chất gia tốc như: DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine

Cho billirubin tác dụng với diazotized 2,4-dichloroaniline để tạo nên azobillirubin màu đỏ. Albumin bao lấy bilirubin sẽ giải phóng bởi chát tẩy rửa

Do đặc tính nhiều vịng thơm nên hợp chất nhạy với ánh sáng

Độộ̣ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độộ̣ Billirubin 2.Nồng độộ̣ chỉ định:

Diazotized 2,4-dichloroaniline 1.6 mmol/l HCl 33 mmol/l Chất tẩy rửa Thuốc thử B: NaNO2 1.5 mmol/l Thuốc thử C: Chất ổn định

Diazotized 2,4-dichloroaniline 0.8 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Chất tẩy rửa

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2 o đến +8oC. Thuốc thử A và C có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng

4. Mục đích sử dụng

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hợộ̣ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa các chất gây kích thích. Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc. Khi lỡ chạm phải rửa sạch vùng da đó với nước và can thiệp y tế khi chạm phải mắt, hít hay nuốt phải.

6. Giá trị kỳ vọng: 1 ngày tuổi1 ngày tuổi 1 ngày tuổi 2 ngày tuổi 3 -5 ngày tuổi Trẻ em và người lớn 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu 8. Độộ̣ tuyến tính:

Nồng đợộ̣ tuyến tính là 30 mg/dl hoặc 510 μmol/ l. Trong trường hợp cao hơn cần pha loãng với nước cất ở tỉ lệ ½ và nhân kết quả với 3

9.Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl

10. Quy trình thử nghiệm:

 Phương pháp đo điểm cuối hố học - Bước sóng: 546 nm

- Nhiệt độộ̣ 25 độộ̣ C

 Trộộ̣n thuốc thử 1 với 2 ở tỉ lệ 1/1. Trước khi dùng điều chỉnh nhiệt đợộ̣ phịng trước 15 phút và trong điều kiện tối; chuẩn bị ống trắng thứ 3 với thuốc thử 3

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đến 8 độộ̣ C trong 21 ngày và 18 đến 22 đợộ̣ C trong 7 ngày

 Thử nghiệm bình thường:

Thuốc thử R1+2

Huyết thanh bệnh nhân Thuốc thử 3

 Thử nghiệm cho trẻ em:

Thuốc thử R1+2

Huyết thanh bệnh nhân Thuốc thử 3

 Trợộ̣n đều và ủ trong ít nhất 10 phút trong điều kiện khơng ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B)

δA(S) = A(sample) – A(B)  Tính tốn:

Mg/dl

μmol/ l

 Tán huyết có thể gây ảnh hưởng đến kết quả 11. Biện luận:

Trị số bình thường: Bi tồn phần từ 0.5 – 1 mg/dl

Bi trực tiếp không quá 30%: ≤ 0.3 mg/dl Bi gián tiếp không quá 70%: ≤ 0.7 mg/dl

Khi Bi vượt quá mức đến 2 – 2.5 mg/dl thì gây vàng da

 Lượng Bi tăng cao so với mức bình thường là dấu hiệu cho thấy mắc các bệnh về gan cao hơn và lượng hồng cầu bị phá huỷ cao hơn. Đối với trẻ em, việc xác định nồng độộ̣ Billirubin sẽ giúp can thiệp kịp thời vào lượng Bi dư thừa để hạn chế khả năng tổn thương tế bào não.

Các bệnh lý gây tăng giảm lượng Bi:

Các trường hợp gây vàng da trước gan: vàng da sinh lý ở trẻ sơ sinh, truyền nhầm nhóm máu, thiếu men G6PD, sốt rét, bệnh

Các trường hợp gây vàng da tại gan và sau gan: viêm gan siêu vi, viêm và xơ gan do rượu, ung thư tụy tạng, bệnh Dubin-

Johnson, ung thư gan, tắc đường mật do giun,… tăng bilirubin trực tiếp là chính Mợộ̣t số lưu ý khác:

Tập luyện thể lực quá sức trước khi xét nghiệm sẽ làm cho nồng độộ̣ bilirubin tăng

Không ăn trong mộộ̣t thời gian dài (nhịn ăn), điều này thường làm tăng nồng độộ̣ bilirubin gián tiếp Bệnh phẩm bị tán huyết

Để mẫu bệnh phẩm tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời hay ánh sáng nhân tạo > 1 giờ sẽ làm giảm nồng độộ̣ bilirubin của bệnh phẩm (mức đợộ̣ giảm nồng đợộ̣ bilirubin tồn phần có thể lên tới 50% mỗi giờ).

Tiếp xúc trong vòng 24 giờ trước đó với thuốc cản quang sẽ làm thay đổi kết quả xét nghiệm. Mẫu huyết thanh đục có thể làm ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

Ngồi ra mợộ̣t số thuốc có thể gây tăng hay giảm Bill II. Định lượng Billirubin trực

tiếp: Tổng quát:

Xác định căn nguyên là do tan máu hay do tạo hồng cẩu không hiệu quả Đánh giá mức độộ̣ nặng của mộộ̣t bệnh lý gan.

Trong thăm dò các tắc mật (trong và ngồi gan): nồng đợộ̣ bilirubin tồn tăng > 40 mg / dL chỉ dẫn tình trạng tắc nghẽn ở mức đợộ̣ tế bào gan

Đánh giá mức độộ̣ tăng thành phần bilirubun trực tiếp hay gián tiếp có thể gợi ý các chẩn đoán:

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 20 - 40% bilirubin toàn phần: gợi ý nhiều cho vàng da nguyên nhân tại gan hơn là nguyên nhân sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 40 - 60% bilirubin toàn phần: gặp ở cả vàng da do nguyên nhân tại gan và sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm >50% bilirubin toàn phần gợi ý nhiều cho vàng da do nguyên nhân sau gan 1. Nguyên tắc:

Cho Billurubin toàn phần tác dụng với DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine và diazotized sulfanic acid để hình thành azo màu đỏ. Bil trực tiếp (Slucuronized billirubin thuỷ phân) phản ứng trực tiếp không cần DMSO hay coffeine. Sự tăng độộ̣ hấp thụ của azo ở 546 nm bị tác độộ̣ng trực tiwwps bởi nồng độộ̣ bil trưc tiếp trong mẫu và đo bằng máy quang phổ

2.Nồng độộ̣ chỉ định:Thuốc thử A:Thuốc thử A:Thuốc thử A: Thuốc thử A:

Sulfanilic acid 29 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Thuốc thử B:

3. Lưu trữ và bảo quản

4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý

6. Giá trị kỳ vọng:

Lên đến 5.1 μmol/ l(0.3 mg/dl) 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh sạch và không tán huyết hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu

8. Độộ̣ tuyến tính:

Nồng đợộ̣ tuyến tính là 8 mg/dl hoặc 137 μmol/ l. Trong trường hợp cao hơn cần pha loãng với nước muôi sinh lý (0.9%) ở tỉ lệ 1/5 và nhân kết quả với 6

9. Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1

μmol/l  mg/dl. Hệ số: 0.0585

10. Quy trình thử nghiệm:

 Phương pháp đo điểm cuối hoá học

- Bước sóng: 546 nm - Nhiệt đợộ̣ 25 đợộ̣ C

 Trợộ̣n đều và ủ trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B) sau đúng 5 phút

δA(S) = A(sample) – A(B)

 Tính tốn: Với hệ số:

Mg/dl

μmol/ l

 Tán huyết có thể gây ảnh hưởng đến kết quả

Bil rất nhạy với ánh sáng nên q trình định tính cần diễn ra ngay khi lấy mẫu 11. Biện luận:

 Triệu chứng liên quan đến tăng bilirubin có thể gồm vàng da – vàng của da và mắt, mệt mỏi, ngứa da, nước tiểu sậm màu và chán ăn.

Các trường hợp tăng Bil trực tiếp:

• Giảm bài tiết Bi TT vào trong các tiểu quản mật.

• Khi gan bị tổn thương, khả năng bài tiết Bi TT giảm nặng hơn nhiều so với khả năng kết hợp

• Khi khơng được bài tiết vào mật thì Bi TT sẽ quay ngược vào hệ tuần hoàn do 5 cơ chế sau:

o Vỡ các tiểu quản mật thứ phát do hoạt tử tế bào gan.

o Tắc các tiểu quản mật do tế bào gan phù nề gây chèn ép hoặc cô đặc mật.

o Tắc các tiểu quản mật trong gan do tế bào viêm.

o Thay đổi tính thấm của tế bào gan.

• Bệnh lý tế bào gan: viêm gan do virus, viêm gan do thuốc (INH, Rifampicin, Halothan, Methyldopa, Chlorpromazine, Paracetamol, Salicylat..., viêm gan nhiễm đợộ̣c;

• Suy tim mất bù.

• Xơ gan, xơ gan mật tiên phát, viêm đường mật xơ hố

• Xâm nhiễm gan hoặc các tổn thương (ví dụ: bệnh lý khối u, di căn gan, bệnh Wilson, u hạt...). III. Định lượng acid

uric: Tổng quát:

Là sản phẩm thoái hoá của nhân purin

Việc dư thừa Acid uric có thể gây lắng đọng và dẫn đến hình thành các tinh thể urat gây bệnh Gout

Tuy nhiên ở pH bình thường thì Acid uric ở dạng ion, khi dư thừa và pH giảm thì sẽ gây lắng đọng tinh thể urat (kết hợp với các ion kim loại như Na,…) ở các khớp tạo nốt tophi

Định lượng Acid uric để theo dõi bệnh Gout hoặc điều trị bằng hoá xạ trị và theo dõi chức năng thận 1. Nguyên tắc:

 Phương pháp PAP

→

Acid uric + H2O + O2 Uricase Allantoin + CO2 + H2O2

→

 Độộ̣ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độộ̣ acid uric 2. Nồng độộ̣ chỉ định:

Dung dịch đệm:

Dung dịch đệm phosphate (pH=7.8) 100 mol/l 2,4,6 Triiodine-3-hydroxibenzone 5 mmol/l Chất tẩy màu 2 g/l Chất khởi độộ̣ng: Peroxidase 40 U/ml PAP 4.5 mmol/l Uricase 3 U/ml Chất ổn định

Dung dịch Acid uric chuẩn 6 mg/dl hoặc 357 μmol/ l

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử còn nguyên niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2o đến +8oC.

4. Mục đích sử dụng

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hợộ̣ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa muối Natri azide (NaN3) như chất bảo quản. Không được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc

6. Giá trị kỳ vọng:

Huyết tương/huyết thanh Trẻ em

Người lớn

Nước tiểu

7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA Nước tiểu sạch:

8. Đợộ̣ tuyến tính:

Phạm vi định lượng là 0.25 đến 25 mg/dl 9.Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl

 mmol/l. Hệ số 59.5

Mmol/l  mg/dl. Hệ số: 0.0168 10. Quy trình thử nghiệm:

- Bước sóng: 500 - 550 nm, 546 nm - Nhiệt độộ̣ 37 độộ̣ C

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đế 8 độộ̣ C trong 40 ngày và 18 đến 22 độộ̣ C trong 10 ngày

Thuốc thử R Dung dịch chuẩn Huyết thanh bệnh nhân

Nước cất

Trộộ̣n đều và ủ trong 5 phút ở 37 độộ̣ C. Trong 20 phút sau, đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample), đo A(standard)

δA(S) = A(sample) – A(RBL) δA(RBL) = A(standard) – A(RBL)

 Tính tốn:

Với hệ số:

Đợộ̣ dài bước sóng 546 nm

Với chuẩn:

11. Biện luận:

Trị số bình thường của Acid uric là 3 đến 7 mg/dl  Tăng trên 7 mg/dl có ý nghĩa lâm

sàng Các bệnh lý liên quan đến tăng AU:

Nguyên phát:

Do giảm HGPRT gây tăng PRPP kích thích tăng tổng hợp purine lên 200 lần và tăng sản phẩm thoái hố của purine là AU lên: hợộ̣i chứng Lesch-Nyham (thiếu hồn tồn), hợộ̣i chứng Seegmiller (thiếu mộộ̣t phần)

Thứ phát: do ăn nhiều purine, dung huyết, hoá xạ trị, thiếu G-phosphatase (gây tan huyêt và giảm tuổi thọ hồng cầu), suy thận, tiểu đường, béo phì, cao huyết áp, nhiễm toan, cường giáp, nhược giáp, hợộ̣i chứng Down,…

 Khi có triệu chứng Gout có thể xét nnghiệm xem trong dịch khớp có tinh thể Acid uric

Các yếu tố ảnh hưởng đến trị số acid uric:

Sử dụng các loại thuốc nhất là với bệnh tim Sử dụng rượu bia

Do ngợộ̣ đợộ̣c chì hay thuốc trừ sâu Ăn kiêng quá mức

Chương 5: Glucid

I. Định lượng Glucose: 1. Tổng quát:

Nguồn gốc: Ngoại sinh: từ thức ăn

Nộộ̣i sinh: qua quá trình phân giải glycogen ở gan và quá trình tân tạo glucose nhờ thoái hoá lipid và protid Là đơn vị cấu tạo cơ bản của carbohydrat, là monosaccảide

Là đơn vị cung cấp năng lượng quan trọng cho cơ thể, có thể cung cấp từ 2 đến 33 ATP tuỳ vào nguồn gốc glucose và phân giải trong điều kiện hiếu khí hay kị khí

Qúa trình điều hồ nhờ vào nhiều loại hormone bao gồm: Tăng đường huyết:

Adrenalin và Glucagon: Khi đường huyết giảm thì kích thích tế bào α ở tuỵ tiết ra glucagon và tác đợộ̣ng lên gan kích thích gan

phân giải glycogen thành glucose vào máu  tăng đường huyết

Glucocorticoid: tạo ra ở vỏ thượng thận, tăng tân tạo glucose, tăng hấp thụ glucose ruộộ̣t, ức chế tiêu dùng glucose các mô, tăng

phân ly glycogen  tăng đường huyết

GH: ở thuỳ trước tuyến n, giảm tính thấm glucose vào mơ, giảm tổng hợp glycogen, tăng phân ly glycogen  tăng đường huyết ACTH: ở thuỳ trước tuyến yên, kích thích vỏ thượng thận sinh hormon steroid trong đó có glucocorticoid gây tăng đường huyết

Giảm đường huyết:

Insullin: do tế bào β đảo Langerhans tuyến tuỵ tiết ra, tăng tính thấm màng tế bào đối với glucose, tăng sự sự dụng glucose ở các

mơ  giảm đường huyết

 Vì insullin là hormone duy nhất giúp làm giảm nồng độộ̣ glucose nên nó rất quan trọng trong việc điều hồ đường huyết và là cơ sở phân loại đái tháo đường

2. Nguyên tắc định lượng:

Glucose được oxi hố nhờ glucose oxidase trong điều kiện có oxi thành gluconolactone. Phản ứng tạo hydrogen peroxide và được ly giải với phenol và 4-aminophenazone thành quinoneimine màu đỏ tím. Đợộ̣ đậm nhạt của màu sẽ bị ảnh hưởng trực tiếp bởi lượng glucose ban đầu

Glucose + O2 + H2O GOD

→ Gluconolactone + H2O2

2H2O2 + 4-aminophenazone + Phenol POD

→ 4-(p-Benzo-chinonemonoimino)-phenazone +4H2O

3. Nồng độộ̣ của các dung dịch được sử dụng:

Dung dịch đệm phosphate (pH=7.5) 0.1 mol/l

4-aminophenazne 0.3 mmol/l

Phenol 1 mmol/l

Glucose oxidase > 20.0 KU/L

Peroxidase > 1.5 KU/l

Dung dịch chuẩn 100 mg/dl

Định lượng Billirubin trực tiếp:

Phân tích nước tiểu 10 thơng số