2. Mục tiêu đề tài
1.6. Phương pháp thử hoạt tính sinh học
Phép thử tiêu chuẩn MTT là một phép đo màu bằng đầu dò UV-Vis cực nhạy để xác định số lượng các tế bào đã bị chết trong việc xét nghiệm độc tính tế bào. Giải pháp được bổ sung trực tiếp vào tế bào và không cần phải trộn trước các thành phần. Phương pháp MTT sử dụng muối tetrazolium Dojindo, WST-8 [2- (2-metoxy-4-nitrophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5- (2,4- disul-fophenyl) -2H-tetrazolium, muối monosodium], Tạo ra một formazan
39
hòa tan trong nước khi giảm sự hiện diện của một tàu sân bay điện tử. Số lượng formazan vàng được sản xuất trong tế bào là tỷ lệ thuận với số tế bào sống. Tóm lại, vào cuối giai đoạn nuôi cấy, 10 μL dung dịch MTT đã
được thêm vào mỗi giếng của đĩa nuôi cấy. Sau 2-4 giờ ủ, hấp thụ ở bước sóng 450 nm được đo bằng phổ kế (Biotek Instruments, Công ty Gene, Winooski, VT). Hiệu quả gây độc tế bào được chỉ ra như một tỷ lệ phần trăm tế bào sống sót (tỷ lệ tế bào sống sót sau khi điều trị và không điều trị) bằng cơng thức sau:
x 100%.
[92]
Hình 1.5: Đường cong sống điển Hình 1.6: Ví dụ về sự sắp xếp mảng và hình của tế bào. sự phát triển của màu.
Với WST-8 tạo ra formazan màu cam thơng qua hịa gi ải điện tử bởi 1- Methoxy PMS thông qua quá trình NADH và ho ạt động NADPH được tạo ra bởi các hoạt động tế bào như được chỉ ra trong hình. 1.7. Lượng WST-8 formazen phụ thuộc vào hoạt động của dehydrogenase tế bào, do đó hệ thống WST-8/1-Methoxy PMS có th ể được sử dụng để xác định số tế bào sống và khả năng sống sót của tế bào.
40
Hình 1.7: Cơ chế phát hiện tế bào di động với MTT
Hinh 1.8: Một tấm microtiter sau một bài kiểm tra MTT. Số lượng tế bào tăng lên dẫn đến tăng màu tím.
41