3.1. Phương pháp điều chế:
Alginate là tên gọi chung của họ muối axit alginic, chiết xuất từ tảo nâu.
Chuẩn bị (Theo Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ): Nghiên cứu sử dụng tảo nâu để làm thí nghiệm. Tảo nâu sau khi thu hoạch sẽ đem đi phơi khô dưới măjt trời khoảng 2 – 3 ngày và được đem đi bảo quản kỹ càng.
Tiến hành nghiên cứu (Theo Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ): Cắt nhỏ mẫu tảo, xử lý mẫu tảo sơ qua với hỗn hợp (96% EtOH: cloroform: H2O = 89: 1:10) theo tỷ lệ w / v = 1/10 trong 10 – 15 ngày để loại bỏ các hợp chất polyphenol, thuốc nhuộm và các phân đoạn có trọng lượng phân tử thấp (như mannitol). Sau đó, tảo được xử lý 3 lần bằng dung dịch HCl (pH 2 - 2,5), tỷ lệ tảo: chiết xuất là 1:20, nhiệt độ 60℃ trong 2 giờ với mỗi lần chiết theo bằng sáng chế số WO2005014657A1 của Michailovna et al. (2005), chiết xuất này được sử dụng để chiết xuất Fucoidan và Laminaran. Bã tảo còn lại được rửa nhiều lần bằng nước máy gia đình có giá trị pH trung tính (khoảng 6,5) để tiến hành chiết xuất alginate.
Trong q trình điều chế, người điều chế ln muốn tối ưu quá trình chiết alginate của mình. Hernándezcarmona và cộng sự. (1999) đã chỉ ra rằng hàm lượng và độ nhớt của alginate phụ thuộc vào các yếu tố nồng độ của dung dịch kiềm (chỉ số pH), nhiệt độ và thời gian xử lý trong giai đoạn nấu, trong đó mơ hình thực nghiệm mô tả như sau:
Alginate và ứng dụng trong lĩnh vực thực phẩm
26
Lập kế hoạch kiểm tra và tối ưu hóa tổng thể các yếu tố kỹ thuật trong quá trình chiết xuất bằng phương pháp Box-Behnken. Các yếu tố điều tra có mức độ biến động như sau: nồng độ kiềm (tính bằng giá trị pH): 8 ≤ U1 ≤ 12; Nhiệt độ chiết: 50℃ ≤ U2 ≤
80℃và thời gian chiết: 1h ≤ U3 ≤ 4h. Các hàm mục tiêu cần đạt được bao gồm hàm lượng alginate (Y1) và độ nhớt của dung dịch alginate 1% (Y2). Tối ưu hóa từng hàm mục tiêu của hàm lượng 9 (Y1) và độ nhớt (Y2) theo phương pháp. Sau đó, sử dụng phương pháp tối ưu hóa tích chập tuyến tính để tìm các giá trị thỏa mãn cả hai hàm mục tiêu.
Kết quả cho thấy điều kiện tốt nhất để chiết alginate từ Turbinaria ornata được xác định bằng dung dịch soda dùng để chiết, pH = 11, nhiệt độ sôi 59 ° C và thời gian sôi 1,5 giờ. hoặc 743 mPa.
3.2. Phương pháp kiểm nghiệm:
Phương pháp định lượng aglinate:
Theo Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, tảo khô được đun sôi và chiết trong điều kiện thí nghiệm, dịch chiết được tách ra bằng ly tâm và xử lý cặn lần thứ hai trong điều kiện tương tự, dịch chiết kết hợp được xử lý bằng dung dịch HCl 10% ở pH = 2. Kết tủa axit alginic được tạo thành và tách ra bằng cách ly tâm, trung hòa bằng dung dịch Na2CO3 10%, sau đó alginat được kết tủa bằng EtOH với thể tích gấp 4 lần phần chiết, ngâm và để yên kết tủa trong 4 giờ. Làm khô giấy lọc ở 70 ° C, cho vào bình hút ẩm và cân ở khối lượng không đổi. Lọc kết tủa bằng giấy lọc và rửa kết tủa. Hút chân không làm khô giấy lọc thêm và kết tủa ở 50 ° C trong 2,5 giờ. Alginate. Hàm lượng alginate được xác định bằng phương pháp trọng lượng của Hernándezcarmona et al. (1999) như sau:
Hàm lượng aglinate (%) = 𝑪−𝑩
𝑨 × 𝟏𝟎𝟎
Trong đó: A là khối lượng tảo khô (g); B là khối lượng của giấy lọc (g); C là khối lượng của giấy lọc và kết tủa alginate (g).
Phương pháp xác định độ nhớt
Alginate và ứng dụng trong lĩnh vực thực phẩm
27
Phương pháp thu thập và xử lý số liệu
Tất cả dữ liệu thu thập được là đại diện của ít nhất 3 thí nghiệm độc lập. Sự khác biệt về hệ số của các phương trình hồi quy được kiểm định theo tiêu chuẩn Student t với mức ý nghĩa α = 0,05 và bậc tự do là 2.