Quy trình chuyển gen lấy từ website http://saigonbiotech.com
Cây Hồng ( Paulownia fortunei ) là cây có tiềm năng kinh tế lớn, tăng trưởng rất nhanh, cây thay lá hàng năm và có bộ rễ đâm sâu.Tuy nhiên, ngoài dịch sâu hại chính do bọ cánh cứng, nhận thấy sâu hại thuộc bộ Cánh phấn cũng là vấn đề nhất là cây ở giai đoạn còn nhỏ do một số tác nhân như Agrotis ypsilon , Agrotis toxionis ,
Heliothis , Euxoa segetum … Vì vậy các tác giả Lê Tấn Đức, Phan Tường Lộc, Phạm
Thị Hạnh, Nguyễn Hữu Hổ, Nguyễn Văn Uyển - Viện Sinh học Nhiệt đới đã nghiên cứu và chuyển gen cry IA(c) kháng sâu với đối tượng cây trồng này.
Chủng vi khuẩn sử dụng: Sử dụng chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens EHA 105 chứa plasmid ITB mang gen cryIA(c) (gen kháng sâu). Môi trường giữ giống là LB có kháng sinh Kanamycin 100 mg/l. Để nhân giống phục vụ nghiên cứu chuyển gen, vi khuẩn được nuôi cấy lắc qua đêm trong môi trường AB (Chilton và cộng sự, 1974)].
Quy trình chuyển gen: Sử dụng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens được lắc qua đêm để gây nhiễm mảnh lá, sau đó các mảnh lá được nuôi cấy trên môi trường tái sinh tạo chồi (môi trường MS có 0,1 mg/l NAA và 10 mg/l BA) có bổ sung chất Acetosyringone nồng độ 100 µM trong hai ngày. Sau đó rửa và diệt vi khuẩn bằng dung dịch kháng sinh Cefotaxime 500 mg/l trong thời gian 30 phút, chuyển các mảnh lá sang môi trường tái sinh tạo chồi có chứa 4 mg/l chất chọn lọc là
Phosphinothricin (PPT) và 500 mg/l Cefotaxime. Cấy truyền 2 tuần/ lần trên cùng loại môi trường. Sau 6 tuần, mẫu lá có chồi tái sinh được cấy truyền sang môi trường cho ra rễ có chứa 4 mg/l PPT. Một số cây ra rễ tốt được đưa ra trồng ở vườn ươm.
Môi trường nuôi cấy: Môi trường nuôi cấy tái sinh là môi trường MS (1962) chứa 30 g/l đường, 9 g/l Agar với chất kích thích sinh trưởng BA (1, 5, 10 mg/l) tổ hợp với NAA (0,1 - 0,5 - 1 mg/l). Mỗi bình tam giác chứa khoảng 6 - 8 mẫu và mỗi nghiệm thức có trung bình 30 mẫu. Các mẫu được đặt trong điều kiện 9 giờ chiếu sáng/ngày, nhiệt độ 27 - 28 C. Sau 3 tuần cấy truyền một lần.
Một số thành tựu trong chuyển gen kháng sâu vào cây trồng:
Cây trồng Gen ngoại Phương pháp chuyển gen Tính trạng biểu hiện Cà chua Bt Qua Agrobacterium Chống côn trùng bộ Lepidoptera
Bông Bt Qua Agrobacterium Chống sâu đục quả (Heliothis zea) Ngô Bt Bắn gen vào phôi non Chống sâu đục thân ngô châu Âu
Lúa Bt Xung điện nạp gen vào protoplast Chống sâu đục thân 5 vạch, sâu cuốn lá Thuốc lá p-lec (pea lectin) Qua Agrobacterium Chống sâu đục quả Heliothis virescens Thuốc lá CpTi Qua Agrobacterium Chống côn trùng cánh vảy Lepidoptera