Để thực hiện việc chuyển gen nhờ vi khuẩn người ta sử dụng kỹ thuật đĩa lá. Tạo các đĩa lá của thực vật cần chuyển gen sau đó xử lý các đĩa lá trong dung dịch vi khuẩn A.tumefaciens mang các plasmid chứa gen mong muốn đã được thiết kế lại trong vài chục phút, trong dung dịch có bổ sung acetosyringone để tăng cường khả năng hoạt hoá gen vùng vir qua đó thúc đẩy thêm quá trình chuyển gen. Sau giai đoạn này rửa sạch lá bằng dung dịch kháng sinh cefotaime để diệt hết khuẩn. Nuôi cấy đĩa lá trên môi trường tái sinh và tạo cây. Chọn lọc các cây mang gen chuyển vào qua sự phát hiện các gen bị chỉ thị. Phát hiện các gen chuyển vào qua phân tích ADN và đánh giá sự thể hiện của gen qua biotest.
Quy trình chuyển gen vào thực vật bằng kỹ thuật đĩa lá nhờ vi khuẩn A.tumefaciens
Quy trình chuyển gen nhờ vi khuẩn A.tumefaciens
1- Thiết kế vector mang gen
2- Nhân dòng vector nhờ vi khuẩn E.coli.
3- Chuyển vector mang gen biến nạp từ E.coli sang A.tumefaciens.
4- Lây nhiễm A.tumefaciens chứa gen biến nạp với tế bào, mô thực vật để tiến hành quá trình chuyển gen sang mô, tế bào đích.
5- Chọn lọc các mô, tế bào được biến nạp thành công.
6- Tái sinh mô, tế bào biến nạp thành cây biến nạp hoàn chỉnh.
Sau đó, từ những cây chuyển gen thu được, cần đánh giá sự ổn định di truyền qua các thế hệ, sử dụng phương pháp lai hữu tính để thu được con cái mang gen mong muốn. Đồng thời đánh giá tác động của môi trường đối với cây chuyển gen để đưa ra sản xuất và cung cấp cho thị trường.
Các bước nuôi cấy và Chuyển gen nhờ và chọn lọc cây chuyển gen Agrobacterium