Chƣơng 1 LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU
2.1. ĐỊA ĐIỂM VÀ PHƢƠNG TIỆN THỰC HIỆN
2.1.1. Địa điểm làm luận văn
Tại phịng thí nghiệm Sinh Hóa (D214), Bộ Mơn Sinh Lý – Sinh Hóa, Khoa Nơng Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, Trƣờng Đại Học Cần Thơ từ tháng 01 đến tháng 05 năm 2010.
2.1.2. Phƣơng tiện thực hiện
Các hóa chất và thiết bị dùng trong thí nghiệm:
– Vitamin E chuẩn (Merck, Hình 2.1) – Methanol
– Benzene – Ethyl acetate
– Bản mỏng silicagel (Merck) – Máy quang phổ (Anh) – Pipet man
– Cuvette thạch anh – Cân phân tích
– Bình giải ly bản mỏng Hình 2.1 :Vitamin E chuẩn
– Thiết bị rửa dụng cụ vi sóng…
Hình 2.2 : Cuvette thạch anh và máy đo quang phổ 2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1. Đối tƣợng nghiên cứu
Thí nghiệm đƣợc thực hiện trên 08 loại thuốc khác nhau: Vitamin E 400, Toconat, Enpovid E 400 Natural, E Nat 400, Cadipherol, Vitamin E thiên nhiên 400 IU, Ampha E-400, Evipure complete.
2.2.2. Phƣơng pháp thực hiện
Định lƣợng vitamin E bằng phƣơng pháp đo quang dựa vào sự tách vitamin E ra khỏi mẫu nhờ vào sắc ký lớp mỏng.
Phƣơng pháp định lƣợng dựa vào việc chuyển tất cả chất từ lớp mỏng (thuộc vệt cần phân tích) vào bình và sau đó dùng phƣơng pháp đo quang để xác định hàm lƣợng chất. Phƣơng pháp này cho kết quả đáng tin cậy nhƣng tốn nhiều công sức.
Để lấy vệt chất khỏi lớp mỏng có thể dùng lƣỡi dao (hoặc lƣỡi lam) cạo tất cả bột ở sắc ký cho vào bình. Sau đó, dùng dung mơi thích hợp để hịa tan, lọc bỏ chất hấp thụ và định lƣợng chất trong nƣớc lọc (Đào Hữu Vinh và ctv, nxb Khoa học và Kỹ Thuật).
2.3. THỰC NGHIỆM
Cân 0,265 g vitamin E chuẩn hòa tan trong 100 mL methanol đƣợc dung dịch có nồng độ 2,65 mg/mL. Tiến hành đo độ hấp thu dung dịch này với các tỉ lệ pha loãng khác nhau: 5, 10, 15, 20, 25, 30 lần với methanol. Ta thu đƣợc kết quả với tỉ lệ pha loãng 30 lần (nồng độ 0,088 mg/mL), dung dịch này có độ hấp thu A = 0,538 ở bƣớc sóng 294 nm.
2.3.2. Tiến hành sắc ký lớp mỏng để định tính vitamin E trong các mẫu mẫu
Chuẩn bị tấm bản mỏng:
Từ tấm bản mỏng thƣơng mại 2020 cm, dùng kéo cắt các bản với kích thƣớc 105 cm. Dùng bút chì để vạch nhẹ các nét mức xuất phát của dung môi (cách mép dƣới của bản mỏng 1,5 cm) và mức cuối cùng của dung môi (cách mép trên của bản mỏng 1 cm).
Chuẩn bị dung môi khai triển sắc ký:
Tách vitamin E từ các mẫu bằng phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi khai triển là: Benzene : Ethyl acetate (96:4) cho kết quả tốt nhất (Võ Phùng Ngọc Yến, 2010).
Chuẩn bị dung dịch mẫu:
Chuẩn bị các mẫu cần phân tích và dung dịch vitamin E chuẩn. Các viên thuốc đƣợc cắt làm đôi, cho dịch thuốc chảy vào trong cốc và dùng methanol là dung mơi hịa tan để rửa sạch vỏ nang. Dung dịch vitamin E chuẩn cũng đƣợc pha với dung môi methanol. Tiến hành chấm các dung dịch mẫu và dung dịch vitamin E chuẩn lên bản mỏng. Một mẫu có thể chấm nhiều lần, nhƣng giữ cho vết chấm đừng lan rộng trên bản mỏng, vết này cách vết kia 1,5 cm và cách hai mép ngoài của bản là 1 cm. Lúc này kích thƣớc bản mỏng tùy thuộc vào số lƣợng các vết chấm.
Chuẩn bị bình giải ly bản mỏng:
Chuẩn bị bình có kích thƣớc lớn hơn kích thƣớc của tấm bản mỏng và có nắp đậy. Sau đó cho dung mơi triển khai sắc ký vào bình. Lƣu ý là dung mơi cho vào bình khơng đƣợc cao hơn mức (vạch) xuất phát của tấm bản mỏng.
Sau khi đã hoàn tất các khâu chuẩn bị cho việc tiến hành sắc ký, đặt tấm bản mỏng vào bình triển khai. Khoảng 30 phút sau là việc giải ly bản mỏng đã hoàn thành. Sau đó, đem bản mỏng soi dƣới đèn UV xem kết quả (Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007).
2.3.3. Xác định hàm lƣợng vitamin E trong từng mẫu thuốc
Tiến hành sắc ký, cũng chuẩn bị các khâu nhƣ trên nhƣng lúc này chấm mẫu thành vệt dài với thể tích mẫu là 100 l. Mỗi mẫu đƣợc chấm trên một bản mỏng riêng biệt với kích thƣớc 105 cm. Tiến hành giải ly khoảng 30 phút, sau đó đem bản mỏng soi dƣới đèn UV và dùng viết chì đánh dấu phần có chứa vệt vitamin E. Dùng lƣỡi lam cạo phần silicagel đó ra rồi hịa tan trong methanol. Sau đó dùng pipet hút phần trên cho vào cuvette thạch anh để đo độ hấp thu ở bƣớc sóng 294 nm. Từ đó chúng ta sẽ xác định đƣợc hàm lƣợng vitamin E trong các mẫu. Lặp lại các thí nghiệm trên, mỗi mẫu đƣợc lặp lại 3 lần.
Chƣơng 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. THÔNG TIN SẢN PHẨM
Các mẫu đƣợc chia đều ra làm 2 phần, 1 phần sẽ đƣợc bảo quản trong tối và 1 phần bảo quản ở ngoài sáng. Hàm lƣợng vitamin E trong thuốc sẽ đƣợc kiểm tra định kỳ sau 45 ngày (1,5 tháng). Ngày bắt đầu bảo quản và xác định hàm lƣợng vitamin E trong các mẫu thuốc là ngày 14/12/2010.
Dƣới đây là một số thông tin về các mẫu thuốc dùng trong thực nghiệm (Bảng 3.1).
Bảng 3.1: Thông tin của các mẫu thuốc
Tên sản phẩm Ngày sản xuất Hạn sử dụng Mã số mẫu Kiểm theo tiêu chuẩn Nhà sản xuất
Vitamin E 400 01/09/2010 09/20/2013 (36 tháng) 2113/2009/YT-
CNTC - Công ty cổ phần dƣợc VTYT
Hải Dƣơng
Toconat - 17/09/2011 (36 tháng) 8001 SĐK:VD
2271-06 TCNSX
Công ty TNHH PHIL INTER PHARMA
E Nat 400 - 01/04/2013 (36 tháng) 004023 TCNSX MEGA LIFESCIENCES LTD
Vitamin E thiên nhiên 400 IU - 12/04/2012 (24 tháng) 003704 TCCS Công ty cổ phần SX-TM DƢỢC PHẨM ĐÔNG NAM Enpovid E 400 Natural - 15/06/2013 (36 tháng) 1006011 TCCS Công ty cổ phần S.P.M Cadipherol 05/07/2009 22/07/2011 (24 tháng) - TCNSX CAGIPHARM Ampha E-400 - 07/11/2011 (24 tháng) J9014 SĐK- 0537-06 TCCS Công ty CPDPVN AMPHARCO Evipure
complete - 2012 (36 tháng) 90786 - Công ty Ampharco USA
Một số thông tin chi tiết về các sản phẩm do nhà sản xuất cung cấp:
* Mẫu 1: Vitamin E 400 (Hình 3.1)
Hình 3.1: Vitamin E 400
– Mỗi viên nang mềm chứa :
+ Hoạt chất chính là: α-tocopheryl acetate 400 MCG.
+ Tá dƣợc: Soy bean oil, Sevum Laurini, Soy bean phospholipids, Yellow beesvax, Gelatin, Methyl Parahydroxybenzoate, Propyl Parahydroxybenzoate, Ethyl Vanilin, Titanium Oxide, Yellow No.4, No.5.
– Tính chất: Vitamin E có tác dụng chống oxy hóa (ngăn cản oxy hóa các thành phần thiết yếu trong tế bào, ngăn cản tạo thành các sản phẩm oxy hóa độc hại), bảo vệ màng tế bào khỏi sự tấn công của các gốc tự do, nhờ đó bảo vệ đƣợc tính tồn vẹn của màng tế bào. Tăng cƣờng quá trình hấp thu vitamin A qua ruột, bảo vệ vitamin A khỏi bị oxy hóa, làm bền vững vitamin A. Đồng thời vitamin E cũng bảo vệ chống lại tác dụng của chứng thừa vitamin A.
– Công dụng: Vitamin E phối hợp với selenium và vitamin C làm thuốc chống oxy hóa tế bào nhƣ các bệnh khơ da, nám da. Các chỉ định khác nhƣ sẩy thai tái diễn, vô sinh, nhiễm độc thai nghén, xơ vữa động mạch, bệnh mạch vành… Phòng thiếu vitamin E trong các trƣờng hợp bệnh thần kinh cơ nhƣ giảm phản xạ, liệt cơ mắt, bệnh võng mạc nhiễm sắc tố, thối hóa sợi trục thần kinh, trẻ em thiếu vitamin E có thể dẫn đến xơ nang tuyến tụy hoặc kém hấp thu mỡ do teo đƣờng dẫn mật hoặc thiếu betaliypoprotein huyết, trẻ sơ sinh thiếu tháng rất nhẹ cân khi đẻ.
– Liều lƣợng và cách dùng: Ngƣời lớn và trẻ em trên 12 tuổi uống 1 viên
3 lần/ngày, uống trong bữa ăn.
– Bảo quản: Giữ ở nhiệt độ phòng (dƣới 30ºC). Tránh ánh nắng trực tiếp và nơi ẩm ƣớt.
* Mẫu 2: Toconat (Hình 3.2)
Hình 3.2: Toconat
– Thành phần: Mỗi viên nang mềm chứa: + Hoạt chất: d-α-tocopherol 400 IU
+ Tá dƣợc: Dầu đậu nành, Gelatin, Glycerin, Ethyl vanillin, Methyl parahydroxybenzoat, Propyl parahydroxybenzoat.
– Tính chất: Vitamin E tác động nhƣ một chất chống oxy hóa, bảo vệ màng tế bào và những chất dễ bị oxy hóa khác nhƣ vitamin A và vitamin C, Coenzym Q, Selen, chất chống oxy hóa tổng hợp và một số sulfua chứa amino acid.
– Liều lƣợng và cách sử dụng:
+ Ngƣời lớn: Liều thông thƣờng là 1 viên/ngày.
+ Phụ nữ có thai: Ở ngƣời mẹ đƣợc dinh dƣỡng tốt, lƣợng vitamin E có trong thức ăn là đủ và không cần bổ sung. Nếu chế độ ăn kém nên bổ sung đủ cho nhu cầu hàng ngày theo chỉ định của bác sĩ.
+ Phụ nữ cho con bú: Vitamin E vào sữa, sữa ngƣời có nồng độ vitamin E cao gấp 5 lần sữa bị và có hiệu quả hơn trong việc duy trì đủ lƣợng vitamin E trong huyết thanh cho trẻ đến 1 tuổi. Nhu cầu vitamin E hàng ngày trong khi cho con bú là 12 mg. Chỉ cần bổ sung cho mẹ khi thực đơn không cung cấp đủ lƣợng vitamin E cần cho nhu cầu hàng ngày.
+ Trẻ em nên dùng dạng bào chế có hàm lƣợng nhỏ hơn (100 IU/viên): Trẻ em bị xơ nang tuyến tụy: 100-200 IU d-α-tocopherol/ngày. Trẻ em bị thiếu
betalipoprotein máu: 50-100 IU d-α-tocopherol/kg/ngày. – Thận trọng:
+ Vitamin E có thể làm tăng tác dụng của các thuốc chống đông máu, warfarin.
– Chỉ định:
+ Điều trị tình trạng thiếu vitamin E.
+ Vitamin E có tác dụng chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào, duy trì vẻ đẹp của da.
– Chống chỉ định: Khơng dùng cho bệnh nhân mẫn cảm với bất kỳ thành phần nào của thuốc.
– Tác dụng phụ: Vitamin E thƣờng đƣợc dung nạp tốt. Liều cao có thể gây tiêu chảy, đau bụng, các rối loạn tiêu hóa khác và cũng có thể gây mệt mỏi, yếu.
– Bảo quản: Trong bao gói kín, ở nhiệt độ phịng.
* Mẫu 3: E Nat 400 (Hình 3.3)
Hình 3.3: E Nat 400
– Thành phần: Mỗi viên nang mềm chứa: Vitamin E (dạng d-α-tocopheryl acetate) Ph.Eur 400 IU. Tá dƣợc: dầu đậu tƣơng.
– Chỉ định: Điều trị và dự phịng tình trạng thiếu vitamin E. Vitamin E thiên nhiên giúp duy trì vẻ đẹp của da, làm giảm tiến trình lão hóa của da và giúp ngăn ngừa xuất hiện nếp nhăn trên da. Đồng thời vitamin E cịn có tác dụng nhƣ là một chất chống oxy hóa, giúp cho q trình bảo vệ các tế bào bị tổn thƣơng gây ra bởi quá trình oxy hóa của các gốc tự do.
– Liều lƣợng: Một viên nang một lần mỗi ngày hoặc theo chỉ dẫn của bác sĩ.
– Chống chỉ định: Giảm thrombinemia do thiếu hụt vitamin K.
– Thận trọng/Cảnh báo: Vitamin E có thể làm tăng tác dụng của thuốc chống đơng Warfarin hoặc các thuốc làm lỗng máu. Vitamin E cũng có thể làm tăng tác dụng ngăn cản sự ngƣng kết tiểu cầu của Aspirin. Nên tham khảo ý kiến bác sĩ khi dùng đồng thời vitamin E với bất kỳ loại thuốc nào khác.
– Tác dụng phụ: Vitamin E không gây tác dụng phụ nào khi dùng ở liều thông thƣờng. Tuy nhiên, khi dùng vitamin E ở liều cao có thể gây buồn nơn, khó chịu ở dạ dày hoặc tiêu chảy, nứt lƣỡi, viêm thanh quản hoặc lảo đảo chóng mặt. Những dấu hiệu này thƣờng hiếm gặp nhƣng khi có tác dụng phụ thì chủ yếu là những dấu hiệu về tiêu hóa.
– Bảo quản: Bảo quản ở nơi khô và mát, dƣới 25ºC.
* Mẫu 4: Vitamin E thiên nhiên 400 IU (Hình 3.4)
Hình 3.4: Vitamin E thiên nhiên 400 IU
– Thành phần: Mỗi viên nang mềm chứa: Vitamin E thiên nhiên 400 IU (dạng d-α-tocopheryl acetate).
– Chỉ định: Phòng ngừa sự thiếu hụt và đáp ứng nhu cầu gia tăng sử dụng vitamin E. Vitamin E thiên nhiên làm giảm q trình lão hóa của tế bào da. Điều trị phối hợp trong các bệnh tim mạch và các bệnh khác ở ngƣời lớn tuổi.
– Chống chỉ định: Dị ứng với bất cứ thành phần nào của thuốc. Giảm prothrombin máu do thiếu hụt vitamin E.
– Liều lƣợng và cách dùng:
+ Cách dùng: Vitamin E thƣờng dùng qua đƣờng uống.
+ Liều lƣợng: Uống 1 viên/ngày, hoặc theo sự chỉ dẫn của bác sĩ.
Trong hội chứng thiếu hụt vitamin E: Uống từ 40 đến 50mg (55-70 IU)
d-α-tocopherol/ngày.
Xơ nang tuyến tụy: 100-200 mg (135-270 IU) dl-α-tocopheryl acetate/kg hoặc khoảng 67 đến 135 mg (90-180 IU) d-α-tocopherol/kg.
Bệnh thiếu betalipoprotein – máu: 50-100 mg (70-135 IU) d-α-
tocopheryl acetate/kg hoặc 33 đến 67 mg (45- 90 IU) d-α-tocopherol/kg.
Dự phòng bệnh võng mạc do đẻ thiếu tháng: 15-30 IU/kg (10-20 mg α- tocopherol tƣơng đƣơng/kg) mỗi ngày để duy trì nồng độ Tocopherol huyết tƣơng giữa 1,5- 2 g/mL.
– Tác dụng phụ: Vitamin E không gây tác dụng phụ nào khi dùng ở liều thông thƣờng. Tuy nhiên, dùng vitamin E ở liều cao có thể gây buồn nơn, khó chịu ở dạ dày hoặc tiêu chảy, nứt lƣỡi, viêm thanh quản hoặc lảo đảo chóng mặt. Những dấu hiệu này thƣờng hiếm gặp nhƣng khi có tác dụng phụ thì chủ yếu là những dấu hiệu về tiêu hóa.
– Thận trọng khi dùng: Vitamin E có thể làm tăng tác dụng của thuốc chống đơng Warfarin hoặc các thuốc làm lỗng máu. Vitamin E cũng có thể làm tăng tác dụng ngăn cản sự ngƣng kết tiểu cầu của Aspirin.
– Tƣơng tác thuốc: Vitamin E đối kháng với tác dụng của vitamin K nên làm tăng thời gian đông máu. Nồng độ vitamin E thấp ở ngƣời bị kém hấp thu do thuốc (nhƣ kém hấp thu khi dùng cholestyramin).
– Bảo quản: Nơi khô mát (dƣới 25ºC), tránh ẩm, tránh ánh sáng.
* Mẫu 5: Enpovid E 400 Natural (Hình 3.5)
Hình 3.5: Enpovid E 400 Natural
– Mỗi viên nang mềm chứa: Vitamin E d-α-tocopheryl acetate 400 IU. Tá dƣợc vừa đủ 1 viên (Glycerin, dầu đậu nành, sorbitol, ethyl vanillin, methyl paraben, propyl paraben, gelatin, cồn 96º.
– Tính chất:
+ Enpovid E 400 Natural đƣợc bào chế dƣới dạng viên nang mềm có chứa 400 IU d-α-tocopheryl acetat.
+ Vitamin E là thành phần thiết yếu tham gia vào q trình chuyển hóa tế bào, đặc biệt đối với tế bào thần kinh.
+ Vitamin E tham gia vào q trình oxy hóa các chất béo bằng cách tấn công vào các gốc tự do để bảo vệ màng tế bào và làm giảm q trình lão hóa.
+ Vitamin E cũng ảnh hƣởng đến việc tổng hợp prostaglandin và ngăn cản việc tập kết tiểu cầu (ngăn ngừa chứng huyết khối), chống lại việc oxy hóa LDL- cholesterol và bệnh xơ vữa động mạch.
– Liều dùng và cách dùng:
+ Ngƣời lớn: Uống 1 viên/ngày. + Trẻ em: Theo chỉ dẫn của bác sĩ. – Thân trọng:
+ Vitamin E có thể làm tăng tác dụng của thuốc chống đông, warfarin. + Vitamin E cũng có thể làm tăng tác dụng ngăn cản sự ngƣng kết tiểu cầu của aspirin.
– Tác dụng phụ: Khi dùng liều cao, vitamin E có thể gây khó chịu ở dạ dày, buồn nơn, nơn, chóng mặt, chống váng.
– Chỉ định:
+ Ngăn ngừa các vết nhăn ở da do lão hóa tế bào . + Dùng điều trị và dự phịng tình trạng thiếu vitamin E. + Điều trị hỗ trợ bệnh tăng lipid máu.
+ Chống lão hóa tế bào. – Chống chỉ định:
+ Dị ứng với bất cứ thành phần nào của thuốc. + Bệnh nhân mắc chứng giảm prothrombin máu. – Bảo quản: Nơi khô mát, tránh ánh sáng.
* Mẫu 6: Cadipherol (Hình 3.6)
Hình 3.6: Cadipherol
– Thành phần: Mỗi viên nang mềm chứa: Vitamin E 400 IU (Tƣơng đƣơng 294,12 mg d-α-tocopheryl acetat). Tá dƣợc: Dầu đậu nành, Gelatin, Sorbitol
70%, Glycerin, Methyl paraben, Propyl paraben, Ethanol 96º và nƣớc RO.
– Cơ chế tác dụng: Cadipherol có tác động chống oxy hóa theo cơ chế cắt đứt chuỗi phản ứng oxy hóa và là chất thanh trừ gốc pyroxyl, nhờ đó nó bảo vệ các lipoprotein tỷ trọng thấp (LDL) và các acid béo chƣa no trên màng tế bào khỏi bị tác động oxy hóa, nhất là sự oxy hóa do các gốc tự do gây ra. Cadipherol ức chế tổng hợp các prostaglandin gây viêm, ức chế hoạt động của protein kinase C và phospholipase A2.
– Dƣợc động học:
+ Vitamin E là một vitamin tan trong dầu nên cần phải có các tác nhân hỗ trợ tạo hạt dƣỡng trấp tại ruột mới hấp thu tốt. Vì vậy, nó đƣợc hấp thu tốt khi sự bài tiết mật và hoạt động của tuyến tụy bình thƣờng. Trung bình, vitamin E từ thức ăn