2.4 Phương pháp nghiên cứu
2.4.3 Thí nghiệm xác định ký chủ thích hợp nhân ni sâu đục thân bốn vạch Chilo
Chilo tumidicostalis
Phương pháp thực hiện
Chọn nuôi 100 sâu non 1 ngày tuổi trong hộp nhựa có để sẵn nguồn thức ăn cho sâu non C. tumidicostalis: lóng mía non, lóng mía già; trái bắp non, trái bắp già, thân bắp, cỏ voi, cao lương. Sau đó tiếp tục nhân ni bên trong hộp nhựa. 5 ngày thay thức ăn một lần, theo dõi đến khi kết thúc vòng đời. Quan sát và ghi lại chỉ tiêu theo dõi.
Hình 3.4 Ký chủ nhân ni sâu C. tumidicostalis
Chỉ tiêu theo dõi:
Tỷ lệ hồn thành vịng đời trên mỗi kí chủ của (%) = (số lượng sâu hồn thành vịng đời/tổng số sâu tham gia thí nghiệm) x 100
Thời gian hồn thành vịng đời (ngày)
Tỷ lệ sâu non ăn phá trên mỗi ký chủ (%) = (số lượng sâu non trên ký chủ/tổng số sâu tham gia thí nghiệm) x 100
2.4.4 Thí nghiệm đánh giá khả năng phát triển sâu đục thân Chilo tumidicostalis trên lóng mía và trên bắp
Phương pháp thực hiện:
Mỗi nghiệm thức chọn nuôi riêng 50 sâu non mới nở 1 ngày tuổi và trong hộp nhựa có chứa thức ăn là trái bắp. Tiếp tục nhân nuôi bên trong hộp nhựa cho tới khi sâu non đẩy sức hóa nhộng tiến hành phân chia nhộng đực và nhộng cái sau đó chuyển nhộng sang hộp hình trụ (đường kính 11cm, chiều cao 7cm) có nắp lưới, dưới đáy hộp có giấy ẩm để giữ cho nhộng đủ ẩm cho tới khi vũ hóa. Tiến hành thu ngài sau 24h vũ hóa cho bắt cặp giao phối trong lồng lưới (30x25x20 cm), bên trong lồng lưới có 2 đĩa nhựa đựng giấy ẩm và 2 đĩa nhựa đựng giấy thắm mật ong 50% cho ngài ăn thêm và có lá mía cắm trên mút ẩm để cho ngài đẻ trứng. Tiến hành thu trứng và thay thức ăn cho ngài. Thức ăn cho sâu là trái bắp (đường kính 5-7cm), 5 ngày thay thức ăn cho sâu một lần. Thức ăn cho ngài trưởng thành là mật ong 60 %. Ghi lại chỉ tiêu theo dõi.
Hình 3.5 Bố trí thí nghiệm đánh giá trên bắp và long mía Bố trí thí nghiệm:
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu đơn yếu tố với 4 nghiệm thức và 10 lần lặp lại được thực hiện với nguồn thức ăn là trái bắp
Nghiệm thức 1: Thức ăn là trái bắp non Nghiệm thức 2: Trái bắp chín sữa Nghiệm thức 3: Lóng mía non
Chỉ tiêu theo dõi:
Tỷ lệ hóa nhộng (%) = (Tổng số nhộng/tổng số sâu) x 100 Tỷ lệ nhộng cái (%) = (Tổng số nhộng cái/tổng số nhộng) x 100 Tỷ lệ vũ hóa (%) = (Tổng số ngài trưởng thành/tổng số nhộng) x 100 Tỷ lệ ngài cái (%) = (Tổng số ngài cái/tổng số ngài trưởng thành) x 100. Kích thước chiều dài sải cánh (mm)
Tổng số lượng trứng đẻ được của ngài cái trong chu kỳ
2.4.5 Nghiên cứu tiềm năng phát triển quần thể của sâu đục thân Chilo tumidicostalis trên trái bắp non
Nghiên cứu khả năng phát triển quần thể của sâu đục thân Chilo tumidicostalis đuợc thực hiện nhằm tính chỉ số tăng tự nhiên (r) của sâu đục thân Chilo tumidicostali trong điều kiện phịng thí nghiệm.
Bố trí thí nghiệm
Chọn ngẫu nhiên 30 trứng sâu đục thân C. tumidicostalis cùng ngày tuổi theo dõi cho đến khi trứng nở thành sâu non, nhân ni trên trái bắp non. Đồng thời có nhân nuôi thêm trứng ngày tuổi để bổ sung thêm vào thí nghiệm khi cần thiết. Ngày tuổi x được xác định sâu non 1 ngày tuổi cho đến khi ngài chết.
Sau khi sâu hóa nhộng, vũ hóa thành ngài bổ sung 1 ngài đực cùng ngày tuổi để cho bắt cặp và giao phối. Để riêng từng cặp ngài bố mẹ được trong trong lồng lưới riêng có để sẵn lá mía và bổ sung thêm 1 đĩa nhựa đựng giấy ẩm và đĩa nhựa đựng giấy thấm mật ong 60%. Sau 24h thay mật ong mới cho ngài ăn. Tiến hành thu trứng cho tới khi cặp ngài chết.
Ðể riêng số trứng / ngài cái / ngày, có ghi đầy đủ các thơng tin: số thứ tự theo số đuợc đánh dấu ở mỗi ngài mẹ / ngày thu trứng. Theo dõi số trứng trên cho đến khi nở thành sâu non, nhân nuôi trên bắp non cho đến khi hóa nhộng và vũ hóa thành ngài. Để xác định số ngài cái con sống sót của một ngài mẹ trong từng ngày và tổng số ngài cái con sống sót do một ngài mẹ đẻ ra.
Thí nghiệm đuợc thực hiện với ba lần lặp lại.
Hình 3.6 Bố trí thí nghiệm tiềm năng nhân ni trên bắp non.
Các chỉ tiêu theo dõi
Các chỉ tiêu theo dõi và cơng thức tính tốn tốn trong nghiên cứu sử dụng theo phương pháp của Brich (1948)
Tỷ lệ sống (lx) = (Số ngài vũ hóa) / (Tổng số sâu nở)
Số trứng của ngài cái đẻ (trứng) / ngài cái / ngày và tổng số con cái đẻ được trong từng ngày để tính sức sinh sản (mx).
Sức sinh sản (mx) = (Tổng số trứng đẻ ở ngày x) / (Tổng số ngài cái ở ngày x) Trung bình ngày tuổi (x).
Tính hệ số nhân của một thế hệ bằng công thức: Ro = ∑lx.mx
Tính chỉ số tăng tự nhiên r (hệ số nhân quần thể): r = (ln∑Ro) / lne. x Trong đó:
r: chỉ số tăng tự nhiên
R0: hệ số nhân của một thế hệ x: trung bình ngày tuổi e:cơ số logarit tự nhiên
Các chỉ tiêu trên đuợc ghi nhận và tính trong 3 lần lặp lại.
Ðánh giá sự phát triển quần thể
Chỉ số tăng tự nhiên (r) là số luợng trứng của ngài cái đẻ trong một đơn vị thời gian. Khi chỉ số r < 0, nghĩa là quần thể đang suy giảm; r = 0, quần thể đang ổn dịnh; r >0, quần thể đang gia tăng. Chỉ số tăng tự nhiên đuợc dùng để đánh giá khả năng phát triển của mỗi loài, đây là thế năng sinh học tổng hợp cả tốc độ sinh sản, tốc độ phát triển, tỷ lệ giới tính và tỷ lệ sống tự nhiên của mỗi loài (Brich, 1948).
Hệ số nhân của một thế hệ (Ro) là tổng số trứng do 1 ngài mẹ đẻ ra trong một thế hệ, với Ro = ∑lx . mx (Brich, 1948). Nếu Ro = 0 quần thể đang ổn định; Ro < 0, quần thể đang suy giảm; Ro > 0, quần thể đang phát triển và tăng về số luợng.
2.4.6 Phương pháp xử lí số liệu
Số liệu được nhập, xử lí và vẽ đồ thị dựa vào phần mềm Excel (2007). Xử lý thống kê theo Anova bằng phần mềm SAS 9.1.
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1.1 Ảnh hưởng của mật ong đến khả năng đẻ trứng ngài cái sâu đục thân Chilo
tumidicostalis.
Kết quả nghiên cứu về ảnh hưởng của thức ăn thêm đến khả năng đẻ trứng của ngài trưởng thành sâu đục thân C. tumidicostalis trong điều kiện nhiệt độ trung bình 28 ± 2oC, ẩm độ 75 ± 5% kết quả được trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1 Ảnh hưởng mật ong đến khả năng đẻ trứng của ngài trưởng thành C.
tumidicostalis
Khả năng đẻ trứng của ngài
MO 50% MO 60% MO 70% MO 80% MO 90% MO 100% CV (%)
Ghi chú: TB: trung bình, SD: độ lệch chuẩn, NT: nghiệm thức, MO: mật ong, Nhiệt độ 28 ± 2oC, ẩm độ: 75 ± 5%. Trong cùng một cột, các nghiệm thức có cùng ký tự theo thì sự khác biệt khơng có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức 99%. Cột thực tế số liệu chuyển về dạng căn bậc 2; số liệu cột lý thuyết chuyển về dạng log(x+1); số liệu cột hiệu xuất chuyển về dạng arcsin căn bậc 2. Cột tuổi thọ ngài cái số liệu chuyển về dạng log (x+1).
Trong q trình xử lý thống kê nhận thấy có sự khác biệt về khả năng đẻ trứng của ngài cái khi cho ăn thêm nguồn thức ăn là mật ong với các nồng độ mật ong khác nhau. Qua bảng 3.1 cho thấy nồng độ mật ong 60% là nguồn thức ăn tốt nhất cho ngài cái và khác biệt rất có ý nghĩa trong thống kê với các nghiệm thức mật ong còn lại, với số lượng trứng đẻ thực tế và hiệu xuất đẻ trứng lần lượt là: Nghiệm thức 60% với số trứng thực tế biến động từ 389 – 471 trứng, trung bình 400,5 ± 25,8 trứng và hiệu xuất biến động trong khoảng 88,5 – 96,4% , trung bình 92,6 ± 2,2%. Nghiệm thức mật ong 50% số trứng thực tế biến động 256 – 239 trứng và hiệu xuất biến động từ 73,8 - 93,3 trứng, trung bình 84,4 ± 6,5%. Nồng độ mật ong 100% khả năng đẻ trứng thực tế biến động từ 0- 78 trứng, trung bình 26,2 ± 28,1% thấp nhất.
Hình 3.7 Trứng sâu đục thân C. tumidicostalis
(a): trứng sâu ở nghiệm thức mật ong 60%; (b) trứng sâu ở nghiệm thức mật ong 100%
Thời gian hồn thành vịng đời của nghiệm thức mật ong 50% là cao nhất trung bình 5,5 ± 1,1 ngày khác biệt rất có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại. Thấp nhất ở nghiệm thức mật ong 100% trung bình 3 ± 0,7 ngày.
Trong điều kiện thí ngiệm với thức ăn thêm là các nồng độ mật ong 50%, 60%, 70%, 80%, 90% và mật ong 100% khả năng đẻ trứng và tuổi thọ ngài cái chênh lệch đáng kể. Kết quả này có sự khác biệt so với nghiên cứu của Huỳnh Vũ Linh (2015). Ở mức mật ong 50% khả năng đẻ trứng của ngài cái trung bình 84,4 ± 6,5% trứng thấp hơn so với kết quả của Huỳnh Vũ Linh (2015) là 95 ± 3,96% trứng. Kết quả thí nghiệm có sự khác biệt này là do chênh lệch về ẩm độ trong phịng thí nghiệm .
Kết quả thí nghiệm cho thấy cho ong ăn thêm thức ăn là mật ong ở nồng độ 60% là tốt nhất. Mật ong làm tăng khả năng sinh sản của ngài cái, số lượng trứng đẻ và tăng hiệu xuất đẻ trứng của ngài cái. Đồng thời khi tăng nồng độ mật ong lên cao thì khả năng sinh sản và tuổi thọ của ngài cái giảm dần. Như vậy thức ăn thêm là mật ong có ảnh hưởng tới khả năng đẻ trứng và tuổi thọ của ngài trưởng thành C. tumidicostalis.
70 60 50 40 30 20 10 0 1 ngày 2 ngày
Biểu đồ 3.1 Nhịp điệu đẻ trứng của C. tumidicostalis
Nhịp điệu đẻ trứng của ngài trưởng thành sâu đục thân C. tumidicostalis được thể hiện ở biểu đồ 3.1
Qua Biểu đồ 3.1 nhận thấy ngài trưởng thành bắt đầu đẻ trứng từ ngày thứ 2, tập trung vào ngày thứ 2 và ngày thứ 3, tỷ lệ đẻ trứng cao nhất vào thứ 2 và giảm nhanh từ các ngày tiếp theo. Ngài cái đẻ cao nhất Ở nồng độ mật ong 60 % với số trứng đẻ trung bình 273,7 ± 49 trứng ở ngày thứ 2, thấp nhất ở nồng độ mật ong
100%. Ở nồng độ mật ong 60 % ngày cái đẻ tập trung vào ngày thứ 2 với số trứng trung bình là 19,7 ± 19 trứng
Biểu đồ cho biết tuổi thọ ngài cái tỷ lệ thuận với khả năng đẻ trứng khi tăng nồng độ mật ong. Tuổi thọ ngài cái cao nhất ở nồng độ mật ong 50% và thấp nhất ở nồng độ 100%.
Nắm bắt được nhịp điệu đẻ trứng và thức ăn thêm là nồng độ mật ong 60% thích hợp nhân ni của ngài trưởng thành C. tumidicostalisrất có ý nghĩa trong nhân ni phục vụ mục đích nghiên cứu và làm kí chủ nhân ni các lồi thiên địch. Ứng dụng nguồn mật ong 60% cho ngaì cái ăn thêm gia tăng khả năng đẻ trứng, tăng mật số sâu non phục vụ cho q trình nghiên cứu các lồi ong ký sinh trứng, ký sinh sâu non để tiêu diệt sâu hại ngoài tự nhiên.
3.1.2 Khả năng lựa chọn ký chủ của Chilo tumidicostalis
Trong điều kiện phịng thí nghiệm với nhiệt độ trung bình 28 ± 2oC, ẩm độ 75 ± 5% thu được kết quả đánh giá khả năng lựa chọn ký chủ của sâu đục thân C.
Bảng 3.2 Kêt qua chon lưa ký chu cua C. tumidicostalis NT Mía non Bắp non Bắp chín sữa Mía già Bo bo Thân bắp Cỏ voi CV (%)
Ghi chú: TB: trung bình, SD: độ lệch chuẩn, NT: nghiệm thức, Nhiệt độ 28 ± 2oC, ẩm độ: 75 ± 5%. Trong cùng một cột, các nghiệm thức có cùng ký tự theo thì sự khác biệt khơng có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức 99%. Cột tỷ lệ sâu non ăn phá số liệu chuyển về dạng arcsin căn bậc 2. Cột tỷ lệ hồn thành vịng đời số liệu chuyển về dạng arcsin. Cột vòng đời số liệu chuyển về dạng log(x).
Sâu đục thân C. tumidicostalis có khả năng sinh sản nhiều, ăn phá mạnh. Tuy nhiên ở điều kiện phịng thí nghiệm khả năng nhân ni sâu đánh giá hiệu quả nhân nuôi tiến hành nhân nuôi trên một số loại thức ăn có cùng họ với nhau. Kết quả thí nghiệm thể hiên ở bảng 3.2.
Số liệu bảng 3.2 cho thấy trong điều kiện thí nghiệm với các nguồn thức ăn khác nhau sâu non sâu đục thân C. Tumidicostalis có tỷ lệ ăn phá và lựa chọn ký chủ khác nhau. Sâu non ăn phá tất cả các loại thức ăn, sâu non chủ yếu ăn phá trên lóng mía non trung bình 31,7 ± 2,1 con, biến động 30 – 34; bắp non trung bình 23,3 ± 2,5 con, biến động 21 – 26; bắp chín sữa trung bình 14 ± 1con, biến động 13 – 15 con. Tùy thuộc vào mỗi loại thức ăn khác nhau, nguồn dinh dưỡng khác nhau thời gian hồn thành vịng đời của sâu khác biệt nhau và có ý nghĩa trong thống kê. Thời gian hồn
thành vịng đời ngắn nhất trên bắp non biến động từ 51 – 54 ngày thấp hơn so với thời gian hoàn thành vịng đời trên mía mon biến động từ 63 – 67 ngày và thấp hơn so với thời gian hồn thành vịng đời trên cỏ voi 71 – 74 ngày, khác biệt rất có ý nghĩa trong thống kê.
Hình 3.8 Triệu chứng ăn phá của sâu C. tumidicostalis trên một số ký chủ
(a): triệu chứng ăn phá trên bắp non; (b) triệu chứng ăn phá trên lóng mía già; (c) triệu chứng ăn phá trên thân bắp; (d) triệu chứng ăn phá trên bắp chín sữa; € triệu chứng ăn phá trên cỏ voi; (f) triệu chứng ăn phá trên bo bo.
Với tỷ lệ ăn phá trên mía của sâu non cao nhất tuy nhiên tỷ lệ hồn thành vịng đời của sâu non trên lóng mía 75,8 ± 7,2 khơng khác biệt với nguồn sâu non nhân nuôi trên bắp non 78,9 ± 6,1. Ngược lại trên mía già tỷ lệ hồn thành vịng đời của sâu đục thân rất thấp trung bình 8,3 ± 14,4 biến động 0,0 – 25,0%.
Qua đánh giá thấy sâu non ăn phá, hồn thành vịng đời ở tất cả các loài ký chủ. Tuy nhiên tỷ lệ sâu non ăn phá, thời gian hồn thành vịng đời ở mỗi loại ký chủ là khác nhau. Sâu gậy hại trên mía chủ yếu ở phần ngọn mía non, gây hại ít ở phân lóng mía già, có sự khác biệt này do độ cứng của mía già lớn sâu khó có thể cạp lớp vỏ đục sâu vào bên trong cây được.ngoài việc sâu đục thân C. Tumidicostalis là dịch hại chính gây hại nặng nề trên cây mía sâu cũng có thể chuyển qua gây hại trên cây bắp sâu cũng gây hại mạnh gây hại chủ yếu ở giai đoạn bắp non, gây hại vừa khi bắp chuyển sang giai đoạn chín sữa. Thân bắp sâu gây hại thấp. Điều này có thể giải thích do sâu là dịch hại chính với mía. Và yếu tố mùi vị, dinh dưỡng trong mỗi loại thức ăn khác nhau dẫn đến số sâu non ăn phá khác nhau, thời gian phát dục các pha cơ thể khác nhau.
3.1.3 Thí nghiệm đánh giá khả năng phát triển sâu đục thân Chilo tumidicostalis trên lóng mía và trên bắp
Sâu đục thân C. Tumidicostalis là đối tượng gây hại và là dịch hại chính nguy hiểm trên mía trong thời gian gần đây. Khả năng ăn phá mạnh ngồi tự nhiên rất cao, có thể gây thiệt hại đến 100%. Tuy nhiên qua quá trình thử nghiệm tại phịng thí nghiệm đánh giá trên một số loại thức ăn thể hiện ở bảng 3.8 cho thấy sâu gây hại trên một số loại ký chủ như bắp non , bắp chín sữa, lóng mía, cỏ voi,… và để đánh giá lại mức độ gây hại của sâu C. Tumidicostalis trên một số loại cây trồng. Kết quả đánh giá thể hiện ở bảng 3.4; 3.5; 3.6; và 3.7.
Bảng 3.3 Tỷ lệ hóa nhộng của sâu C. Tumidicostalis
STT
2 Bắp chín sữa
3 Mía non
CV %
Ghi chú: TB: trung bình, SD: độ lệch chuẩn, NT: nghiệm thức,STT: số thứ tự, Nhiệt độ 28 ± 2oC, ẩm độ: 75 ± 5%. Trong cùng một cột, các nghiệm thức có cùng ký tự theo thì sự khác biệt khơng có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức 99%. Số liệu được chuyển đổi bằng arcsin.