CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM
2.2. Thực nghiệm
2.2.1.2. Nghiên cứu quá trình chiết tách và tinh chế resveratrol từ rễ cốt khí
Hình 2.3 là sơ đồ khối quy trình chiết tách và tinh chế resveratrol từ rễ cây cốt khí củ. Dạng miếng Bộtngunliệu Dung dịch cốtkhícủ Sấy, cắtlát Nghiền thơ
Ngâmchiết siêu âm trong 1 giờ
(lặp lại 3 lần)
Tỷ lệ bột/dung dichcồn là 1/3
Cấtquay thuhồi cồn, cịnlại1/3 thểtích
Chiết bằngn-hexan Pha hexan
(loại bỏ) (resveratrol, picid)Phanước DịchEtOAc Chiết bằng EtOAc Chủngpenicillium Rễ cốtkhícủ Hỗn dịch tổng Lên men Cặn rắn chứaresveratrol Hỗn hợp
Hòa tan trong cồntinhkhiết Tinhchế bằng cộtSephadex Resveratrol tinhkhiết Cấtquay loại dung mơi Sấy60oC Cắtlát
Hình 2.3. Sơ đồ khối quy trình chiết tách và tinh chế resveratrol
Diễn giải chi tiết quy trình: 1 kg rễ cốt khí củ tươi được cắt lát và sau đó cho vào hệ thống máy sấy. Quá trình sấy kết thúc khi độ ẩm của mẫu cốt khí củ khơng
đổi, hoặc thay đổi rất chậm. Tiếp tục nghiền thô các miếng rễ cây cốt khí và thu được 300 g bột nguyên liệu.
300 g mẫu được ngâm chiết trong 1 lít hỗn hợp dung mơi ethanol và nước cất (tỷ lệ thể tích ethanol/nước cất là 8/2). Hỗn hợp được chiết siêu âm trong 1 giờ. Quá
trình chiết được tiến hành lặp lại 3 lần, để thu được dịch chiết tổng. Dịch chiết sau
đó được cất quay chân khơng, thu hồi cồn, cịn lại 1/3 thể tích. Hỗn hợp dịch tổng
được lên men bằng chủng penicillium. Sau đó chiết bằng n-hexane để loại bỏ tạp
chất kém phân cực. Pha n-hexane sau đó loại bỏ, cịn pha nước có chứa resveratrol sẽ tiếp tục được chiết bằng dung môi ethyl acetate để thu được dịch chiết ethyl
acetate, loại bỏ pha nước. Dịch EtOAc có chứa resveratrol và tạp chất sẽ được cất quay chân không để thu được cặn rắn. Hịa tan cặn thu được bằng cồn 98o sau đó tinh chế bằng cột Sephadex để thu được resveratrol tinh khiết. Lượng resveratrol
tinh khiết cuối cùng thu được sau quá trình chiết tách và tinh chế là 3,0-4,5 g.