Bên cạnh đó, Bến Tre cũng có số lượng vi khuẩn đa kháng thuốc tương
đương với Trà Vinh (2/8 chủng), nhưng tính đa kháng thuốc lại khác nhau (ở
Trà Vinh có 1 chủng kháng với SXT-TE, 1 chủng kháng với CHL-SM; ở Bến Tre 1 chủng kháng với DO-TE, một chủng kháng với SXT-SM) (Bảng 4.3)
Bảng 4.3 : Tính đa kháng thuốc vi khuẩn Aeromonas spp ở Bến Tre
Điều này cho thấy rằng, khả năng nhạy, trung bình hoặc kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn phụ thuộc vào nhiều yếu tố: thời gian, địa điểm thu mẫu, tình hình sử dụng thuốc kháng sinh ở địa điểm đó. Do vậy, mỗi vùng nuôi khác nhau thì hiệu quả sử dụng thuốc kháng sinh khác nhau dẫn đến sự
sai khác vềđộ nhạy của thuốc kháng sinh giữa các vùng là điều thiết yếu.
4.2.4 Kết quả kháng sinh đồ của vi khuẩn Vibrio spp ở Trà Vinh và Bến Tre Tre
Theo Frerichs et al., (1993) các loài Vibrio trừ V. cholerae và V. metschnikovii, rất cần Na+ để phát triển, trong khi đó Aeromonas spp không cần độ mặn và sống trong môi trường không có muối. Với đặc điểm như thế, nhóm Vibrio spp phần lớn được tìm thấy trong nước mặn và môi trường nước
ở cửa sông và phần lớn là mầm bệnh cho cá và các động vật khác sống trong vùng này. Aeromonas spp thì trái ngược lại, cơ bản nó là những sinh vật nước ngọt, vì vậy nó là mầm bệnh các động vật nước ngọt. Tuy nhiên, Sự khác biệt này không hoàn toàn, nhóm Aeromonas spp cũng lây nhiễm trên cá nước mặn và Vibrio spp cũng có thể nhiễm trên cá nước ngọt. Theo đó, mục đích của
Các loại thuốc Số lượng
DO, TE 1
nghiên cứu là nhằm kiểm tra mối tương tác của hai nhóm vi khuẩn này ở tại vùng nước mặn nhiễm ngọt (Trà Vinh, Bến Tre), đồng thời kiểm tra khả năng phát triển của một số nhóm vi khuẩn gây bệnh cũng như mục đích hạn chế
mầm bệnh, hạn chế phát sinh vi khuẩn đa kháng thuốc trên cá tra ở tại vùng này.
Kết quả tất cả chủng vi khuẩn Vibrio spp đều nhạy với các loại thuốc kháng sinh. Đối với kháng sinh TE, DO, SXT, CHL đều không thấy xuất hiện vi khuẩn kháng thuốc. Riêng kháng sinh AM có số vi khuẩn nhạy 10/11 chủng. Đặc biệt hơn, không có chủng vi khuẩn nào nhạy với SM, ngược lại số
vi khuẩn kháng lại kháng sinh này 9/11 chủng, kết quả này khá cao so với kết quả của vi khuẩn Aeromonas spp kháng lại thuốc kháng sinh SM ở tỉnh Trà Vinh (3/9 chủng), tỉnh Bến Tre (5/8 chủng) đồng thời không có vi khuẩn
Vibrio spp đa kháng thuốc. (Hình 4.6) 11 0 11 0 11 0 10 1 0 11 0 0 2 9 0 2 4 6 8 10 12 S ố c h ủ n g v i k h u ẩ n CHL SXT DO AM TE SM Tên thuốc S I R
Hình 4.6: Biểu đồđặc tính kháng thuốc của vi khuẩn Vibrio spp tại Trà Vinh, Bến Tre.
Phuong et al., (2005) đã kiểm tra độ nhạy của 5 loại kháng sinh trên 32 chủng Vibrio phát sáng phân lập từ hậu ấu trùng tôm sú ởĐBSCL cho thấy tất cả đều kháng với ampicilin và chỉ 1–3 chủng được kiểm tra là kháng với oxinilic acid, streptomycin, tetracycline, oxytetracycline và chloramphenicol.
Đặng Thị Hoàng Oanh và ctv (2006) đã xác định khả năng kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn Vibrio phát sáng phân lập từ hậu ấu trùng tôm sú (Penaeus monodon). Kết quả kháng sinh đồ 26 trong 27 chủng vi khuẩn được phân lập với 6 loại thuốc kháng sinh thì có 100% chủng thử nghiệm kháng với AM và có khoãng từ (hoặc ít hơn) 15% kháng với SXT, TE, CHL. Phần lớn (77%) các chủng vi khuẩn chỉ kháng với một loại kháng sinh. Số chủng khác kháng với 2 loại kháng sinh (15%). Có một chủng kháng 4 loại và 1 chủng kháng với 6 loại kháng sinh thử nghiệm. Nhìn chung, kết quả nghiên cứu này có tỉ lệ vi khuẩn Vibrio kháng, đa thuốc cao hơn kết quả đang nghiên cứu.
Nhưng với kết quả nghiên cứu của Trần Thị Tuyết Hoa và ctv (2004) về tính kháng thuốc của 50 chủng vi khuẩn Vibrio được phân lập từ hệ thống ương tôm càng xanh (Macrobrachium rosenbergii) ở các trại sản xuất giống tại Cần Thơ thì có sự tương đồng (các chủng vi khuẩn này đều nhạy với kháng sinh TE và có 40/50 chủng vi khuẩn kháng lại SM).
Kết quả nghiên cứu Nguyễn Thị Tiên (2007) về khả năng kháng thuốc của vi khuẩn phân lập trên tôm sú Penaeus monodon bệnh phân trắng tại Bến Tre, Sóc Trăng là 26,3% kháng với AM, 21.05% kháng với SM, kháng với TE là 5,26%, và không có vi khuẩn kháng với CHL. Kết quả này cũng có sự khác biệt đáng kể so với kết quả nghiên cứu. Nhưng khi xét về mặt thời gian, không gian cho ta thấy những nghiên cứu này vào những năm khác nhau và tại những nơi khác nhau nên có kết quả khác nhau là điều tất yếu .
Song, nhìn chung tính kháng thuốc của Vibrio spp của các tác giả đã nghiên cứu cũng ở mức khá cao. Nhưng, với kết quả nghiên cứu được thì không có vi khuẩn kháng với các kháng sinh nghiên cứu ngoại trừ SM (8/11 chủng kháng) trong khi vi khuẩn Aeromonas spp từ môi trường ao nuôi của hai tỉnh này lại có 1/9 chủng kháng (tỉnh Trà Vinh) và 1/8 chủng kháng (tỉnh Bến Tre) với CHL, SXT, DO, TE. Sự khác biệt này được giải thích như sau: do đặc điểm của vùng khảo sát luôn có một mùa nước ngọt và một mùa nước mặn trong năm nên hệ vi khuẩn trong ao nuôi cũng thường xuyên biến đổi. Do vậy hệ vi khuẩn Vibrio spp tồn tại trong ao chỉ tiếp xúc với hệ vi khuẩn
Aeromonas spp và Vibrio spp khác trong thời gian ngắn nên ít bị ảnh hưởng, tương tác từ hệ vi khuẩn khác, từ đó đặc tính nhạy với kháng sinh của hệ vi khuẩn này được ổn định. Bên cạn đó, ở tất cả nghiên cứu đều có SM kháng cao với cả Aeromonas spp và Vibrio spp điều này cũng dể dàng nhận thấy
được bởi do SM có tính lờn thuốc xảy ra nhanh (Bùi Kim Tùng và ctv, 2001).
4.3 Kết quả nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của kháng sinh lên vi khuẩn
Sau khi lập kháng sinh đồ, trong số nhóm vi khuẩn Aeromonas spp ở
mỗi tỉnh chọn ra một chủng mang tính đa kháng thuốc và 1 chủng Vibrio spp
để xác định giá trị nồng độức chế tối thiểu đối với 3 loại thuốc: oxytetracyclin (OXT), chloramphenicol (CHL), streptomicin (SM). Kết quả giá trị MIC của chủng chuẩn E. coli (ATCC 25922) với cả 3 loại thuốc kháng sinh điều nằm trong khoãng cho phép theo tiêu chuẩn của Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 2006b.
Hình 4.7: Kết quả MIC của chủng Aeromonas spp ACT097 với nồng độ là 64 ppm
Giá trị MIC của các chủng khảo sát như sau:
Bảng 4.4 : Giá trị nồng độức chế tối thiểu (MIC)
Giá trị MIC (µg/ml) Vi khuẩn OXT CHL SM Aeromonas spp ATV0811 64 32 16 Aeromonas spp ABT099 32 1 32 Aeromonas spp ACT097 32 32 64 Vibrio spp VBT0930 0.125 4 32
Giá trị MIC của các loài vi khuẩn với SM ít biến động và có giá trị khá cao (16-64 µg/ml) trong khi đó giá trị MIC trên OXT và CHL lại biến động khá lớn (OXT: 0,125-64 µg/ml; CHL: 1-32 µg/ml) so với nghiên cứu của Nguyễn Thị Tiên (2007) giá trị MIC của CHL trên một số loài vi khuẩn Vibrio
gây bệnh phân trắng trên tôm sú là 2-256 µg/ml, điều đó cho thấy hệ vi khuẩn
Vibrio trên tôm sú có tính kháng thuốc cao trong khi giá trị MIC của Vibrio
khảo sát lại tương đối thấp hơn (4 µg/ml)
Mặc khác, theo nghiên cứu của Châu Hồng Thuý, (2008) đã xác định giá trị MIC của 16 chủng vi khuẩn E. ictaluri từ cá tra bệnh mủ gan tại Trà Vinh cho thấy giá trị MIC với CHL từ 0,5-4 µg/ml, mặc dù được khảo sát trên cùng địa điểm và thời gian nhưng giá trị MIC của ATV0811 với CHL là 32 µg/ml. Kết quả khác biệt này có thể là do hai loài vi khuẩn này khác nhau nên tính kháng thuốc của nó cũng khác nhau.
Tuy nhiên, đối với OXT thì thí nghiệm cho kết quả MIC từ 0,125-64 µg/ml tương đương với nghiên cứu của Dung et al., (2008) trên vi khuẩn gây bệnh mủ gang (Edwardsiella ictaluri) ở ĐBSCL với giá trị MIC: 0,125-64
µg/ml, qua đó ta thấy các vi khuẩn đang tồn tại trong môi trường mang đặc tính kháng cũng tương đương với vi khuẩn gây bệnh trên cá.
Qua kết quả nghiên cứu thấy, việc dùng thuốc kháng sinh trong thuỷ
sản đã gây tác động lớn đến môi trường. Khi thuốc kháng sinh được sử dụng với số lượng lớn hoặc trong thời giàn dài sẽđể lại sự tồn lưu trong môi trường,
điều này dễ làm phát sinh nhiều chủng vi khuẩn kháng thuốc. Khi vi khuẩn có yếu tố kháng thuốc nó không chỉ truyền cho vi khuẩn cùng loài mà còn truyền giữa các loài với nhau, chính lý do đó đã làm cho nhiều loại thuốc kháng sinh trở nên vô tác dụng. Vì vậy, để bảo vệ sức khoẻ vật nuôi nói riêng và lợi ích cộng đồng nói chung thì việc hạn chế sử dụng thuốc kháng sinh, bảo vệ môi trường sinh thái là rất cần thiết.
PHẦN V
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1. Kết luận
Qua kết quả nghiên cứu tính kháng của từng nhóm vi khuẩn tại các vùng khác nhau cho thấy vi khuẩn ở Cần Thơ có tính kháng thuốc cao nhất với 3/9 chủng vi khuẩn đa kháng thuốc, vi khuẩn kháng với SM, TE, SXT là 3/9 chủng, kháng với DO 2/9 chủng, không có vi khuẩn kháng với CHL.
Vi khuẩn tại Trà Vinh và Bến Tre có tính kháng thuốc tương đương nhau. Trong đó, Trà Vinh với vi khuẩn đa kháng thuốc là 2/9 chủng và kháng với từng loại thuốc CHL, SXT, DO, TE 1/9 chủng, riêng SM 3/9 chủng kháng. Bến Tre vi khuẩn đa kháng thuốc 2/8 chủng, 1/8 chủng kháng với SXT, DO, TE, riêng SM có 5/8 chủng kháng và không có vi khuẩn kháng với CHL. Tính nhạy cảm của vi khuẩn Vibrio rất cao, không có chủng nào kháng với từng loại kháng sinh (CHL, SXT, DO, AM), riêng SM có 9/11 chủng kháng.
Giá trị MIC của 3 chủng Aeromonas spp ở 3 vùng và chủng Vibrio spp VBT0930 khá cao và có sự biến động lớn CHL: 1-32 µg/ml, OXT: 0,125-64 µg/ml, riêng với SM thì giá trị MIC cao và ít biến đông (16-64 µg/ml). Qua đó ta thấy, nồng độ ức chế tối thiểu của thuốc kháng sinh ở các vi khuẩn trong môi trường nước và bùn đối với loại kháng sinh này rất cao.
5.2 Đề xuất
Do thời gian thực hiện đề tài có hạn vì thế các thí nghiệm tiếp theo cần khảo sát thêm nhiều vùng nuôi thuỷ sản khác nhau ở ĐBSCL để nghiên cứu trên phạm vi rộng hơn.
Cần thử nghiệm trên nhiều loại thuốc kháng sinh để khảo sát tính kháng thuốc một cách khá toàn diện của vi khuẩn trên nhiều loại thuốc khác nhau.
Tiếp tục nghiên cứu các chủng vi khuẩn còn lại có trong môi trường ao nuôi cá tra (Pangasianodon hypophthalmus).
Ứng dụng sinh kỹ thuật sinh học phân tửđể nghiên cứu cơ sở di truyền về sự kháng thuốc của vi khuẩn.
PHẦN VI
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Bùi Kim Tùng, Bùi Kim Hoàng và Bùi Kim Tân, 2001. Thuốc kháng sinh. Sở khoa học công nghệ và môi trường tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu. 255 trang.
2. Bùi Quang Tề, 2003. Bệnh của tôm nuôi và biện pháp phòng trị. Nhà xuất bản nông nghiệp Hà Nội. 112 trang.
3. Bùi Thị Tho, 2003.Thuốc kháng sinh và nguyên tắc sử dụng trong chăn nuôi, nhà xuất bản Hà Nội. 323 trang.
4. Châu Hồng Thuý, 2008. Khảo sát tình hình xuất hiện bệnh mủ gan do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri trên cá tra nuôi thâm canh ở tỉnh Trà Vinh. Luận văn cao học. Khoa thuỷ sản. Trường Đại Học Cần Thơ, 75 trang. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), 2006. Methods for
broth dilution susceptibility testing of bacteria isolated from aquatic animals: informational supplement. M49-A. Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, USA.
6. Đặng Thị Hoàng Oanh, Đoàn Nhật Phương, Nguyễn Thị Thu Hằng và Nguyễn Thanh Phương, 2006. Xác định vị trí phân loại và khả năng kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn Vibrio phat sáng phân lập từ hậu ấu trùng tôm sú (Penaeus monodon). Tạp chí nghiên cứu khoa học: 42-52. 300 trang.
7. Đỗ Thị Hoà, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng và Nguyễn Thị Muội. 2004. Giáo trình bệnh học thuỷ sản. Khoa nuôi trồng thuỷ sản - Đại Học Thuỷ Sản Nha Trang. 346 trang.
8. Dung, T.T., F. Haesebrouck, N.A. Tuan, P. Sorgeloose, M. Baele and A. Decosrere, 2008. Antimicrobial susceptibility pattern of Edwardsiella ictaluri isolates from natural outbreak of bacillary necrosis of
Pangasianodon hypophthalmus in Viet Nam. Microb Drug Resist: 14(4): 311-6.
9. Durborow, R. M. and R. F. Floyd, 1996.Medicated feed for food fish. Souhern Regional Aquaculture Center (SRAC) publicction no. 743pp. 10.Frerichs, G. N. and S. d. Millar. 1993. Mannual for the isolate and
indentification of fish bacterial pathogent. Institute of aquqculture, University of Stirling, Scotland. 107pp.
11.Huỳnh Thị Phượng Quyên, 2008. Tiêu chuẩn hoá phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc kháng sinh lên vi khuẩn
Edwardsiella ictaluri và Aeromonas hydrophila tại khoa Thuỷ Sản. Luận văn tốt nghiệp khoa Thuỷ Sản- Trường Đại Học Cần Thơ. 38 trang. 12.Inglis, V, R. J. Roberts and N. R. Bromage, 1993. Bacterial diseases of
fish. Institte of aquaculture, University Press, Cambridge. 312 pp.
13.Kiêm Liên, Nguyễn Quốc Thịnh, Nguyễn Thị Như Ngọc và Phạm Thanh Liêm, 2007. Thuốc và hoá chất trong nuôi trồng thuỷ sản. Khoa thuỷ sản. Trường Đại Học Cần Thơ. 79 trang.
14.Kruse, H, and H. Sorum, 1994. Transfer of Multiple Drug Resistance Plasmids between bacteria of Diverse Origins in Natural
Microenviroments. Applied and environmental microbiology, 60: 4015- 4021.
15.Lê Thị Barrow, G.I. and R. K. A. Feltham, 1993. Cowan and Steel’s manual for the indentification of medical bacteria, 3rd edn. Cambridge Univesity Press, Cambridge. 262pp.
16.Le, T. X, Y. Munekage and S. Kato, 2005. Antibiotic resistance in bacteria from shrimp farming in mangrove areas. Science of the Total Environment 349 95-105.
17.Neela, F. A, L.Nonaka. and S. Suzuki, 2006. The diversity of multi-drug resistace profiles in tetracycline-resistant Vibrio species isolated from coastal seawater. The Journal of Microbiology, 45: 64-68.
18.Nguyễn Chính, 2005. Đánh giá tình hình sử dụng thuốc thú y thuỷ sản trong nuôi cá tra (Pangasius hypophthalmus) thâm canh ở An Giang và Cần Thơ. Luận văn cao học. Khoa thuỷ sản. Trường Đại Học Cần Thơ, 80 trang.
19.Nguyễn Hà Giang, 2008. Tiêu chuẩn hoá phương pháp xác định các chỉ
tiêu sinh hoá của vi khuẩn Aeromonas hydrophila tại khoa thuỷ sản. Luận văn tốt nghiệp đại học, Khoa Thuỷ Sản-Trường Đại Học Cần Thơ. 42 trang.
20.Nguyễn Mạnh Hùng, 2008. Khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước và vi khuẩn Coliforms trong cơ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) trong nuôi ao. Luận văn tốt nghiệp đại học, khoa Thuỷ
Sản-Trường Đại Học Cần Thơ. 47 trang.
21.Nguyễn Phước Tương và Trần Diễm Quyên, 2000. Sử dụng thuốc và biện dược thú y. Nhà xuất bản Nông Nghiệp. 314 trang.
22.Nguyễn Thị Thuý Hằng, 2008. Tiêu chuẩn hoá phương pháp lập kháng sinh đồ trên vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và Aeromonas hydrophila tại khoa thuỷ sản. Luận văn tốt nghiệp đại học khoa Thuỷ Sản- Trường Đại Học Cần Thơ. 56 trang.
23.Nguyễn Thị Tiên, 2007. Xác định đặc điểm sinh hoá của mầm bệnh vi khuẩn phân lập trên tôm sú (Penaeus monodon) bệnh phân trắng. Luận văn tốt nghiệp đại học khoa Thuỷ Sản- Trường Đại Học Cần Thơ. 48 trang.
24.Petersen, A., J. S. Andersen, T.Kaewmak, T. Somsiri, and A. Dalsgaard, 2002. Impact of Integrated Fish Farming on Antimicrobial Resistance in a Pond Environment. Applied and enviromental microbiology,68: 6036- 6042.
25.Prescot, J. F, J. D. Baggot and R. D. Walker, 2000. Antimicrobial therapy in veterinary medicine. Iowa State University Press/Ames. 795 pp.
26.Saavedra, M.J, S. G. Novais, A. Alves, P. Rema, M. Tacao, A. Correia and A. M. Murcia, 2004. Resistance to β-lactam antibiotics in Aeromonas hydrophila isolated from rainbow trout (oncorhynchus mykiss). International Microbiology 7:207-211.
27.Sarter,S, H. N. K. Nguyen, L.T. Hung, J. Lazard and D. Montet, 2006. Antibiotic resistance in Gram-negative bacteria isolated from farmed catfish. Food Control 18 (2007) 1391-1396.
28.Tô Công Tâm, 2002. Khảo sát sự biến động các yếu tố thuỷ lý hoá của nước và các nhóm vi khuẩn gây bệnh trong ao nuôi cá tra mùa lũ. Luận văn tốt nghiệp đại học, Khoa Thuỷ Sản, Trường Đại Học Cần Thơ. 27