Ở khu vực Cà Mau, ốc mượn hồn là loại thức ăn duy nhất được sử dụng trong tổng số 18 trại được thu và tỉ lệ nhiễm WSSV là 59,26 % (48/81 mẫu) trong tổng số mẫu được phân tích khi được kiểm tra bằng PCR 2 bước. Tình hình nhiễm WSSV giữa các trại cũng khác nhau, 8 trại nhiễm toàn bộ 5 mẫu kiểm tra, 3 trại chỉ có 1/5 hoặc 2/5 mẫu nhiễm WSSV, 1 trại nhiễm 4/5 mẫu kiểm tra hay hoàn toàn cho kết quả âm tính trên các mẫu kiểm tra (4 trại). Theo S. K. Otta et al. (1999) cũng đã dùng kỉ thuật PCR phát hiện WSSV trên các loài giáp xác nuôi và tự nhiên ởẤn Độ. Nghiên cứu được tiến hành trên nhiều đối tượng khác nhau (tôm, cua, artemia…), cả trên đối tượng biểu hiện bệnh và không biểu hiện bệnh đốm trắng. Trên mẫu cua Scylla serrata không có dấu hiệu bệnh, tỉ lệ
nhiễm là 15 % (3/20 mẫu cua khỏe), tôm mẹ không có dấu hiệu của WSSV là 3/3 mẫu, tôm mẹ có dấu hiệu của WSSV là 7/7 mẫu, artemia khỏe là 1/1 mẫu. Một số mẫu cua khác được kiểm tra thì cho kết quả âm tính với WSSV. Theo Chu-Fang Lo et al. (1996), đối với các loài côn trùng thủy sinh, họ mười chân, cua tạp, tôm tạp hại có kích thước nhỏ thì kết quả nghiên cứu của nhóm tác giả
trên như sau: nhộng của côn trùng thủy sinh 19,04 %, họ mười chân 9,52 %, tôm tạp 28,57 % và cua tạp là 11,9 % mẫu dương tính với PCR bước 2.
Dù các mẫu được thu ngẫu nhiên từ hai tỉnh khác nhau (Bạc Liêu là 15 trại và Cà Mau là 18 trại) nhưng kết quả dương tính với WSSV lại chiếm tỉ lệ gần bằng
nhau (Bạc Liêu là 54,34 % và Cà Mau là 59,26 %).
Tóm lại, tỉ lệ nhiễm WSSV trong mẫu thức ăn tươi sống thu từ các trại sản xuất giống tôm sú ở Cà Mau (59 %) là cao hơn Bạc Liêu (54 %) nhưng thành phần thức ăn có nguồn gốc thủy sản thì ở Bạc Liêu là đa dạng hơn ở Cà Mau.
PHẦN V
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận
- WSSV đã được phát hiện trên thức ăn tươi sống (ốc mượn hồn, mực, tôm tít) sử dụng nuôi vỗ tôm sú bố mẹ tại các trại sản xuất tôm sú giống ở khu vực Bạc Liêu và Cà Mau.
- Tỉ lệ nhiễm WSSV trong các loại thức ăn tươi sống ở Bạc Liêu là 54 %. - Tỉ lệ nhiễm WSSV trong các loại thức ăn tươi sống ở Cà Mau là 59 % .
- Phát hiện những thể vùi WSSV trong tế bào của mô liên kết trên ốc mượn hồn khi bị WSSV xâm nhập.
5.2 Đề xuất
- Tiếp tục nghiên cứu và phát hiện WSSV trên các mẫu thức ăn tươi sống dùng trong các trại sản xuất giống.
- Nghiên cứu và tối ưu qui trình cắt mô trên nhiều đối tượng khác nhau để có thể
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Bùi Quang Tề, 2006. Bệnh học Thủy sản. Nhà xuất bản Nông Nghiệp
2. C M Escobedo-Bonilla, V Alday-Sanz, M Wille, P Sorgeloos, M B Pensaert
and H J Nauwynck, 2008. A review on the morphology, molecular characterization, morphogenesis and pathogenesis of white spot syndrome virus. Journal of Fish Diseases 31: 1-18.
3. CSIRO, 2008. Phương pháp PCR phát hiện ADN của giáp xác mười chân theo OIE, sử dụng mồi của CSIRO. Hội thảo về PCR phát hiện WSSV, Việt Nam, trang 18.
4. Chu- Fang Lo, Jiann-Horng Leu, Ching-Hui Ho, Chau-Huei Chen, Shao-En
Peng, You-Tzung Chen, Chih-Ming Chou, Pei Yan Yeh, Chang-Jen Huang, Hsin-Yiu Chou, Chung-Hsiung Wang, Guang-Hsiung Kou, 1996b. Detection of baculovirus associated with white spot syndrome (WSSV) in penaeid shrimps using polymerase chain reaction. Diseases of Aquatic Organisms 25: 133-141.
5. Chu-Fang Lo, Ching-Hui Ho, Shao-En Peng, Chau-Huei Chen, Hui-Chen
Hsu, Ya-Lin Chiu, Chen-Fang Chang, Kuan-Fu Liu, Mao-Sen Su, Chung- Hsiung Wang, Guang-Hsiung Kou, 1996a. White spot syndrome baculovirus (WSSV) detected in cultured and captured shrimp, crabs and other arthropods. Diseases of Aquatic Organisms 27: 215-225.
6. Chưng Thị Nghiễm, 2009. Ứng dụng phương pháp PCR – Genotyping trong nghiên cứu tác nhân gây bệnh đốm trắng (WSSV) trên tôm sú. Luận văn tốt nghiệp đại học.
7. Đặng Thị Hoàng Oanh, 2007. Bài giảng Nguyên lý và kỹ thuật chẩn đoán bệnh. Khoa thủy sản trường Đại học Cần Thơ.
8. Đỗ Thị Hòa, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng và Nguyễn Thị Muội, 2004. Giáo trình Bệnh học thủy sản. Khoa Nuôi Trồng Thủy Sản, trường Đại học thủy sản Nha Trang.
9. Franklin Pérez, Filip A.M. Volckaert, Jorge Calderón, 2005. Pathogenicity of white spot syndrome virus on postlarvae and juveniles of Penaeus (Litopenaeus) vannamei. Aquaculture,205,586-591.
10. Http://www.vasep.com.vn/vasep/dailynews./87abdd0d40924a7547257142
0323ea3/ADD567A73BB5E6B947257508004CF07E?OpenDocument&Start =6.8
11. Http://www.khoahocthuysan.org/modules.php?name=News&op=viewst&
si=123. Ngày truy cập 01/01/2009. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
12. Http://thuysan.kiengiang.gov.vn/index2.jsp?menuId=455&articleId=2243 Ngày truy cập 01/01/2009 13. Http://www.khuyennongvn.gov.vn/g-ttdh/ca-mau-xuat-hien-tinh-trang-tom- the-chan-trang-nhiem-benh-va-chet/view. Cập nhật ngày 01/01/2009 14. Http://www.nongthon.net/apm/modules.php?name=News&file=article&sid =3436. Ngày truy cập 02/01/2009
15. Http://nhanong.net/?nn=view&action=showid&id=1343. Ngày truy cập 02/ 01/2009.
16. Jeroen Witteveldt, Carolina C. Cifuentes, Just M. Vlak, and Marie¨lle C. W. van Hulten. Protection of Penaeus monodon against White Spot Syndrome Virus by Oral Vaccination, 2004. Journal of Virology, p. 2057–2061 Vol. 78, No. 4
17. Lê Xuân Sinh, 2003. A Bio-economic Model of a shrimp hatchery in the Mekong River Delta of Vietnam. Luận án tiến sĩ Kinh tế nông nghiệp- Đại học Sydney, Australia.
18. Lightner D.V, 1996.A handbook of shrimp patholgy and diagnostic
procedures for disease of cultured penaeid shrimp. The world aquaculture society.
19.Lo. C. F, Ho. C. H, Chen. C. H and Chui. Y. L, 1997. Detection and tissue tropism of white spot syndrome baculovirus (WSSV) in captured brooders of Penaeus monodon with a special emphasis on reproduction organs. In Dis Aquat Org 30: 53-72.
20. Lê Như Nguyệt, 2004. Ứng dụng và so sánh các phương pháp phát hiện virus đốm trắng (WSSV) trên tôm sú (Penaeus monodon) bằng kỹ thuật PCR. Luận văn tốt nghiệp đại học
21. Lý Ngọc Hà, 2008. Tìm hiểu sự biến đổi của vùng lặp lại thuộc ORF94 và ORF125 của WSSV (White spot syndrome virus) trên tôm nuôi tại Bạc Liêu. Luận văn tốt nghiệp đại học.
22. Md. Shahadat Hossain, Anirban Chakraborty, Biju Joseph, S.K. Otta,
Indrani Karunasagar and Iddya Karunasagar, 2001. Detection of new hosts for white spot syndrome virus of shrimp using nested polymerase chain reaction. Aquaculture 198: 1-11.
23. Nguyễn Văn Hảo,2003. Tình hình dịch bệnh ở tôm sú nuôi trên thế giới và tại Việt Nam- Viện NXNTTS II
24. Nguyễn Minh Hậu, 2002. Xác định tỉ lệ cảm nhiễm WSSV và MBV trên tôm sú (P. monodon) giống ở các tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long. Luận văn tốt nghiệp đại học.
25. Nguyễn Trường Quang, 2004. Khảo sát tình hình bệnh đốm trắng trên tôm sú (P. monodon) ở tỉnh Sóc Trăng. Luận văn tốt nghiệp đại học.
26. Phạm Trần Nguyên Thảo, 2003. Ứng dụng kỹ thuật mô bệnh học trong chẩn
đoán bệnh đốm trắng ở tôm sú (P. monodon). Luận văn tốt nghiệp đại học. 27. S.K. Otta, Indrani Karunasagar, Iddya Karunasagar, 2003. Detection of
monodon baculovirus and whitespot syndrome virus in apparently healthy Penaeus monodon postlarvae from India by polymerase chain reaction. Aquacuture 220: 59-67.
28. Syed Musthaq, R. Sudhakaran, V.P. Ishaq Ahmed, G. Blasubramanian, 2006. Variability in the tadem repetitive DNA sequences of white spot syndrome virus (WSSV) genome and suitability of VP28 gene to detect different isolates of WSSV from India, 256, 34-41.
29.Trần Thị Tuyết Hoa, 2006. Bài giảng Bệnh virút trên động vật thuỷ sản. Khoa thủy sản trường Đại học Cần Thơ.
30. Trần Thị Phương Trang, 2009. Ứng dụng kỹ thuật PCR phát hiện WSSV trong mẫu tôm sú (Penaeus monodon). Luận văn tốt nghiệp đại học.
31.Van Hulten C. W. Marielle, Rob W. Goldbach and Just M. Vlak. (2000). Three functionally diverged major structural proteins of white spot syndrome virus evolved by gene duplication. Journal of General Virology, 81, 2525- 2529.
32. Wongteerasupaya. C, Pungchai. P, Withyachumnarnkul. B and Boonsaeng.
V, 2003. High variation in repetitive DNA fragment length for white spot syndrome virus (WSSV) isolates in Thailand. Dis Aquat org 54: 253-257.
PHỤ LỤC A
BẢNG CÂU HỎI ĐIỀU TRA THÔNG TIN TRẠI GIỐNG
Số tt………. 1. Tên trại……….. 2. Ngày thu………. 3. Sốđiện thoại………. địa chỉ……..……… 4. Nguồn gốc thức ăn………. 5. Cách bảo quản……… 6. Cách xử lý………... 7. Cách sử dụng………...
8. Lượng……….., hoàn toàn………..hay phối hợp………
PHỤ LỤC B
Bảng B.1 Thành phần hóa chất sử dụng trong qui trình PCR của Kimura et al (1996) được tối ưu bởi Trần Thị Phương Trang (2009).
Bước 1/(2): tổng thể tích 20µl Hóa chất Nồng độ Thể tích 1 mẫu (µl) PCR buffer 1 X 4 MgCl2 1,5/(1) mM 1,2/(0,8) dNTP (10M mol) 200 µM 0,4 P1/(3) (mồi xuôi) 20 pmol 1 P2/(4) (mồi ngược) 20 pmol 1 Taq DNA 1,5 U 0,3 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Nước cất tiệt trùng 10,1/(10,5) ADN (Mẫu) 1
PHỤ LỤC C CÁCH PHA CÁC LOẠI DUNG DỊCH Bảng C.1 Dung dịch cốđịnh Davidson/AFA Thành phần Thể tích (ml) Ethyl alcohol 95 % 330 Formalin 220 Acid acetic 115 Nước cất 335
Bảng C.2 Dung dịch nhuộm Haematoxylin
Thành phần Thể tích/Khối lượng
Nước cất đun sôi 2000 ml
Haematoxylin 2 g
Sodium iodate 0.4 g
Potassium aluminium sunfate 180 g
Acid citric 2 g
Bảng C.3 Dung dịch Eosin/Phloxine
Thành phần Thể tích (ml)
Stock Eosin (1 % Eosin Y trong nước) 100
Stock Phloxine (1 % Phloxine B trong nước 10
Cồn 95 % 780
Acid glacial acetic 4
Dung dịch Gelatin Gelatin 1 %
Potassium dichromate 1 %
Trộn đều nhau theo tỉ lệ 1 : 1. Cho dung dịch này vào chậu nước ấm để