2.3. Tình hình nghiên cứu trong và ngồi nước
2.3.1. Tình hình nghiên cứu trong nước
Ở nước ta bệnh sán lá gan là một bệnh khá phổ biến và là một trong những bệnh gây ảnh hưởng rất lớn đến sức khoẻ đàn trâu, bị. Chính vì vậy mà đã từ lâu đã có nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu.
* Nghiên cứu tình hình nhiễm sán lá gan lớn ở trâu, bò
Trước đây, ở nước ta có nhiều cuộc điều tra về tỷ lệ nhiễm sán lá gan. Nguyễn Trọng Kim, Phạm Ngọc Vĩnh (1997) [5] công bố tỷ lệ nhiễm sán lá gan ở trâu ở Hà Bắc (cũ) là 49,95%; ở Nghệ An từ 25,27 - 32,65%; tỷ lệ nhiễm sán lá gan chung ở miền Bắc Việt Nam là 43,56%.
Kết quả nghiên cứu của Lê Hữu Khương và cs, (2001) [2] cho thấy, tỷ lệ nhiễm sán lá gan trung bình trên cả nước ở trâu là 46,23%, dao động từ 8,74 - 61,09%, tỷ lệ này tăng dần từ Nam ra Bắc.
Phạm Văn Lực, Phạm Ngọc Doanh (2006) [11] và các cán bộ Phòng ký sinh trùng, Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật đã tiến hành điều tra, nghiên
cứu hiện trạng các bệnh ký sinh trùng lây truyền giữa người và động vật ở Gia Lai và Đắk Lắk. Kết quả điều tra cho thấy, tỷ lệ nhiễm sán lá gan lớn ở trâu, bò khá cao (35 - 65%).
* Nghiên cứu về triệu chứng lâm sàng
Phan Địch Lân (2004) [10] đã theo dõi 37 trâu bị bệnh sán lá gan nặng, thấy các triệu chứng thường lặp đi lặp lại như: gầy rạc, suy nhược cơ thể (37/37); phân nhão khơng thành khn, có lúc ỉa lỏng (32/37); niêm mạc mắt nhợt nhạt, thiếu máu kéo dài (27/37); lông xù, da mốc, lông dễ rụng (26/37); phân đen, thối khắm (22/37); mắt sâu, có dử (18/37); bụng ỏng, ỉa chảy kéo dài (13/37); thuỷ thũng ở nách, hai chân trước, gan to (11/37); thuỷ thũng ở ngực, ức liên tục (9/37).
* Nghiên cứu đặc điểm sinh học và vòng đời của sán lá gan
Ở Việt Nam có ít tài liệu về ốc Lymnaea. Duy nhất trong cuốn sách “Định loại động vật không xương sống nước ngọt Bắc Việt Nam” của Đặng Ngọc Thanh và cs (1980) [13] mơ tả 2 lồi L. viridis và L. swinhoei ở miền Bắc Việt Nam.
Theo Phan Địch Lân (1985) [9], cả 2 lồi ốc L. viridis và L. swinhoei đều đóng vai trị là vật chủ trung gian của sán lá gan. Qua 3 đợt theo dõi tỷ lệ nhiễm ấu trùng sán lá gan ở 2 lồi ốc này thì kết quả như sau: ốc L. viridis nhiễm trung bình khoảng 19,61%, cịn L. swinhoei nhiễm trung bình khoảng 20,85%.
Kết quả điều tra của Phạm Ngọc Doanh, Nguyễn Thị Lê (2005) [1] cho thấy, chỉ 0,06% và 1% ốc L. viridis ở Đông Anh và Phú Xuyên, Hà Nội bị
nhiễm ấu trùng sán lá gan.
2.3.2. Tình hình nghiên cứu ở nước ngồi
F. hepatica được Linnaeus mô tả năm 1758, còn F. gigantica được
Cobbol mô tả năm 1855 và được Kendall phân loại năm 1965.
Trong tổng kết về bệnh sán lá gan, Kendall (1965) [26] kết luận rằng
lồi ốc khơng dễ dàng phân biệt về mặt hình thái hoặc sinh thái. Tác giả cho rằng, các loài vật chủ trung gian chính ở Nam, Tây và Đông châu Phi là L. natalensis, ở Ấn Độ, Bangladesh và Pakistan là L. rufescens. Các dòng L. auricularia đóng vai trị là vật chủ trung gian của F. gigantica là ốc nước ngọt
vùng nhiệt đới sống ở nước chảy chậm hoặc tĩnh, trong, với nồng độ oxy cao và thực vật thuỷ sinh nhiều.
Về vật chủ chính, F. hepatica và F. gigantica có chung nhiều lồi vật chủ ăn cỏ và ăn tạp (Mas - Coma, 1995) [27].
Mas - Coma và cs (2005) [28] cho biết, sán lá gan lớn (Fasciola spp.)
và ký chủ trung gian của chúng ở các nước nhiệt đới phát triển quanh năm. Trâu, bò bị nhiễm sán gầy yếu, tăng trọng chậm, sản lượng thịt, sữa thấp, rất nhiều buồng gan không sử dụng được do sán làm viêm, xơ cứng.
Theo Jorgen Hansen và Brian Perry (1994) [25], nhiệt độ thích hợp nhất cho sự phát triển của ốc là 15 - 260C, khi ở nhiệt độ này chúng đẻ số lượng trứng rất lớn. Trứng nở trong vòng 2 tuần và sau 1 tháng ốc trưởng thành. Một con ốc trong vịng 10 - 12 tuần có thể sinh sản ra hàng ngàn con ốc, ở dưới 100C, ốc không phát triển và ngừng hoạt động. Tuy nhiên, ốc có thể chui vào bùn và sống trong điều kiện bất lợi nhiều tháng.
Guralp và cs (1964) [24] cho biết: thời gian cho sự phát triển đến
Miracidium trong trứng F. gigantica khác nhau phụ thuộc vào nhiệt độ.
Khoảng 10 - 11 ngày ở 37 - 38oC, 21 - 24 ngày ở 25oC và 33 ngày ở 17 - 22oC. Grigoryan (1958) [23] cho rằng, nhiệt độ 24 - 26oC và pH 6,5 - 7 là tốt nhất và ở điều kiện đó 70 - 80% trứng có thể phát triển. Tác giả cho rằng, trứng không sống ở nhiệt độ trên 43 - 44oC và ở điều kiện khơ thì trứng cũng nhanh chết. Trứng F. gigantica không phát triển đồng đều và nở thành Miracidium ở cùng một thời gian, vì vậy ở cùng một điều kiện Miracidium có
thể nở trong khoảng một thời gian tới 14 tuần, tăng cơ hội nhiễm vào ốc (Guralp và cs, 1964) [24]. Tác giả cũng thấy rằng trứng bị kích thích nở khi
tiếp xúc ánh sáng mặt trời hoặc ánh sáng mạnh. Khi thoát khỏi trứng
Miracidium sống trong nước khoảng 18 - 26 giờ.
Sau khi thoát khỏi ốc, Cercaria hoá nang thành Adolescaria. Khoảng
2/3 bám vào giá thể trong nước. Phần cịn lại khơng bám vào giá thể mà trơi nổi trong nước, thấy 35% Cercaria thoát khỏi ốc ở đợt thứ 2 trở thành những nang trôi nổi, tỷ lệ giảm ở những đợt tiếp sau (Ueno và cs, 1975) [30].
Theo thông báo của nhiều tác giả trên thế giới, bệnh sán lá gan lớn thường phát triển theo mùa. Vào mùa mưa tỷ lệ nhiễm sán lá gan lớn ở gia súc cao hơn nhiều so với mùa khơ (Ripert và cs, 1987) [29]. Vì trong vịng truyền bệnh có vai trị của thực vật thuỷ sinh, nên sự nhiễm bệnh còn phụ thuộc vào mùa phát triển của chúng.
Tại Autralia, Boray (1966) [23] cho rằng, ở nhiệt độ 22 - 240C, sau 28 - 52 ngày gây nhiễm Miracidium vào ốc - KCTG sẽ thu được Cerca
Phần 3
ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1. Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu
Trâu, bị các lứa tuổi ni ở các nơng hộ, trại gia đình, tại 5 xã thuộc huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tun Quang: Trung Hịa, Phú Bình, Ngọc Hội, Tân An và Hùng Mỹ.
Bệnh sán lá gan ở trâu, bò.
Chế phẩm sinh học: EMUNIV, EMIC, EMZEO
3.2. Địa điểm và thời gian tiến hành
* Thời gian nghiên cứu: Từ 28/5 đến 28/11/2020 * Địa điểm nghiên cứu:
- Địa điểm thu thập mẫu: xã Trung Hịa, Phú Bình, Ngọc Hội, Tân An
và Hùng Mỹ huyện Chiêm Hóa.
- Địa điểm xét nghiệm mẫu: Phịng thí nghiệm Bộ mơn Thú y – Khoa Chăn nuôi thú y – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
3.3. Vật liệu nghiên cứu
* Các loại mẫu nghiên cứu
- Mẫu phân tươi của trâu, bò các lứa tuổi
- Các mẫu gan của trâu, bò (để thu thập sán lá gan) - Mẫu phân trâu, bò trước khi ủ với chế phẩm sinh học - Mẫu phân trâu, bò sau khi ủ với chế phẩm sinh học * Dụng cụ, thiết bị
- Kính hiển vi quang học, kính lúp.
- Bộ dụng cụ xét nghiệm phân, buồng đếm Mc.Master - Các dụng cụ phịng thí nghiệm khác
* Hóa chất
- Dung dịch glycerin 50%
* Các loại chế phẩm sinh học
Ba loại chế phẩm sinh học: EMUNIV, EMIC, EMZEO.
3.4. Nội dung nghiên cứu
3.4.1. Điều tra tình hình chăn ni trâu, bị và cơng tác phịng chống bệnh sán lá gan cho trâu, bị ở huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tun Quang.
- Tình hình chăn ni trâu, bị ở huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tuyên Quang. - Cơng tác phịng chống bệnh sán lá gan cho trâu, bò ở huyện Chiêm Hóa - Tuyên Quang.
3.4.2. Nghiên cứu sự lưu hành bệnh sán lá gan trên đàn trâu, bị của huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tun Quang. Chiêm Hóa - tỉnh Tuyên Quang.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan trâu, bò ở một số xã - Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan theo tuổi trâu, bò - Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan theo mùa vụ
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan theo tính biệt trâu, bị
3.4.3. Xác định lồi sán lá gan gây bệnh trên đàn trâu, bò của huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tuyên Quang.
- Kết quả mổ khám gan trâu, bò thu thập sán lá gan. - Định loại sán lá gan bằng kỹ thuật hình thái học.
3.4.4. Điều tra thực trạng việc xử lí phân và xử lý chất thải trâu, bò ở các xã, sự ơ nhiễm khơng khí và trứng giun sán trong phân trâu, bò trước khi sử lý phân
- Điều tra việc xử lý phân.
- Điều tra tình trạng ơ nhiễm khơng khí do phân trâu, bị khơng được xử lý gây ra.
-Tình hình xử lý phân trâu, bị tại các nơng hộ, trại chăn ni trâu, bị trên địa bàn huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tuyên Quang.
3.4.5. Ứng dụng chế phẩm sinh học trong xử lý phân trâu, bò và đánh giá hiệu quả cải thiện tình trạng ơ nhiễm khơng khí và trứng giun, sán trong hiệu quả cải thiện tình trạng ơ nhiễm khơng khí và trứng giun, sán trong phân trâu, bị sau khi xử lý phân
- Sử dụng chế phẩm sinh học ủ phân trâu, bò
- Xác định sự cải thiện tình trạng ơ nhiễm khơng khí sau khi xử lý phân trâu, bò
- Xác định tổng số trứng giun, sán trong phân trâu, bò sau khi xử lý
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.1. Phương pháp nghiên cứu sự lưu hành bệnh sán lá gan trên đàn trâu, bò tại một số xã thuộc huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tun Quang. bị tại một số xã thuộc huyện Chiêm Hóa - tỉnh Tuyên Quang.
3.5.1.1. Phương pháp thu thập mẫu phân trâu, bò:
Số lượng trâu, bò thu thập mẫu phân được tính theo cơng thức:
Với tỷ lệ nhiễm sán lá gan dự kiến là 20% và độ tin cậy 95% thì số trâu, bò thu mẫu ở huyện là 300 con.
Trong đó có:
- Số lượng trâu: 250 con. - Số lượng bò: 50 con.
Thu thập mẫu phân trâu, bò theo phương pháp lấy mẫu chùm nhiều bậc cắt ngang: lấy mẫu ở 1 huyện; tại huyện này lấy mẫu ở 5 xã, mỗi xã lấy mẫu ở 4 thôn. Tại mỗi thôn lấy mẫu phân ngẫu nhiên của những trâu, bị ni tại các nơng hộ, các trại chăn ni.
Mỗi trâu, bị lấy mẫu phân được ghi lại các đặc điểm như: loại gia súc (trâu/bị), tính biệt (đực/cái), tuổi (kết hợp hỏi chủ hộ và xem răng để xác định tuổi), khối lượng cơ thể (ước đoán), trạng thái phân, các biểu hiện lâm sàng (nếu có), các đặc điểm riêng khác, họ tên chủ hộ, ngày lấy mẫu.
Mẫu phân được lấy lúc trâu, bò vừa thải ra hoặc lấy trực tiếp từ trực tràng con vật. Mỗi trâu, bò lấy khoảng 30 gam phân. Để riêng mỗi mẫu phân vào một túi nilon nhỏ, mỗi túi có kèm theo nhãn ghi những thơng tin trên.
3.5.1.2. Phương pháp xét nghiệm mẫu phân
- Sử dụng phương pháp lắng cặn Benedek (1943) để xét nghiệm mẫu phân tìm trứng sán lá gan.
Nguyên lý: dùng lực khuấy mẫu trong nước để tách trứng sán lá gan ra
khỏi phân, do tỷ trọng của trứng sán nặng hơn tỷ trọng của nước nên trứng sẽ lắng xuống. Vì vậy, có thể tìm trứng sán trong cặn lắng.
Đánh giá kết quả: Những mẫu phân tìm thấy trứng sán lá gan được xác
định là có nhiễm, ngược lại là không nhiễm. Cường độ nhiễm sán lá gan được xác định bằng phương pháp đếm trứng Mc. Master (đếm số trứng/gam phân trên buồng đếm Mc. Master theo tài liệu của Jorgen Hansen và Brian Perry, 1994).
3.5.2. Xác định loài sán lá gan gây bệnh trên đàn trâu, bò của một số xã thuộc huyện Chiêm Hóa – tỉnh Tuyên Quang. thuộc huyện Chiêm Hóa – tỉnh Tuyên Quang.
- Mổ khám gan của 50 trâu, bò theo phương pháp mổ khám khơng tồn diện của Skrjabin (1977)[21], thu thập toàn bộ sán lá gan ký sinh ở gan, ống dẫn mật và túi mật của trâu, bò.
- Định loại sán lá gan bằng phương pháp sinh học phân tử.
- Định danh các mẫu sán lá gan đã thu thập bằng phương pháp thường quy (làm tiêu bản, nhuộm carmin, quan sát tiêu bản nhuộm bằng mắt thường và kính lúp), dựa theo khóa định loại của Nguyễn Thị Lê và cs. (1996), căn cứ vào đặc điểm hình thái, kích thước và cấu tạo của sán trưởng thành để xác định loài.
3.5.3. Phương pháp nghiên cứu tác dụng của chế phẩm sinh học trong xử lý phân trâu, bò lý phân trâu, bò
3.5.3.1. Phương pháp điều tra hình thức xử lý phân trâu, bò tại các địa phương
- Điều tra tình hình xử lý phân trâu, bị tại 50 nơng hộ. Việc điều tra được thực hiện theo phương pháp phỏng vấn và ghi phiếu điều tra, lựa chọn phương án trả lời trong các hình thức xử lý phân sau:
+ Thải phân trâu, bị trực tiếp ra mơi trường.
+ Ủ phân trâu, bò (đánh đống ủ hoặc ủ trong hố ủ). + Xử lý phân trâu, bò bằng bể biogas.
+ Phương pháp khác (bán phân; bón phân tươi trực tiếp cho cây trồng). - Kết quả điều tra các hình thức xử lý phân được tính bằng tỷ lệ (%) số hộ chăn ni trâu, bị có câu trả lời là một trong các hình thức xử lý nói trên trong tổng số hộ có hình thức xử lý phân đã điều tra.
3.5.3.2.Đánh giá sự ô nhiễm mơi trường từ phân trâu, bị chưa xử lý
Số hộ đánh giá: 5 hộ.
a). Phương pháp đánh giá sự ơ nhiễm do một số loại khí độc từ phân trâu, bị chưa được xử lý
* Đánh giá
Điều tra tình hình ơ nhiễm khơng khí trong bán kính khoảng 50 - 100m xung quanh khu vực 5 hộ chăn ni trâu, bị chưa áp dụng biện pháp xử lý phân nào.
Tình hình ơ nhiễm khơng khí được đánh giá qua khứu giác trực tiếp, kết hợp phỏng vấn và ghi phiếu điều tra tại 25 hộ dân sống trong khu vực cách các hộ chăn ni trâu, bị trong bán kính khoảng 50 - 100m (xung quanh mỗi hộ chăn ni trâu, bị phỏng vấn 5 hộ).
Mức độ ô nhiễm không khí được đánh giá theo 3 mức: khơng mùi, ít mùi, nặng mùi. Mức độ mùi cụ thể như sau:
Mức độ mùi Mô tả
Khơng mùi Hồn tồn khơng ngửi thấy mùi hơi
Ít mùi Có mùi hơi thoang thoảng nhưng khơng khó chịu Nặng mùi Mùi hơi nồng nặc, gây cảm giác khó chịu, đau đầu
b). Phương pháp xác định các loại trứng sán và tổng số trứng sán trong phân trâu, bò trước và sau khi sử dụng chế phẩm sinh học
- Phương pháp xác định các loại trứng giun, sán trong phân trâu, bò: 5 mẫu phân trâu, bò được xét nghiệm bằng phương pháp lắng cặn để tìm trứng các lồi giun sán. Căn cứ vào hình thái trứng để kết luận đó là trứng của những loài giun, sán nào.
- Tổng số trứng của các loài giun, sán trong một mẫu phân được xác định bằng phương pháp đếm trứng trên buồng đếm Mc. Master.
3.5.3.3.Phương pháp đánh giá hiệu quả xử lý phân trâu, bò bằng chế phẩm sinh học
a, Bố trí để ứng dụng chế phẩm sinh học
Số hộ đánh giá: 5 hộ đã đánh giá ở tiểu mục a, mục 3.5.3.2
Sử dụng 3 loại chế phẩm sinh học với số hộ áp dụng như sau:
- 2 hộ sử dụng chế phảm EMUNIV để ủ phân trâu, bò - 2 hộ sử dụng chế phẩm EMIC để ủ phân trâu, bò - 1 hộ sử dụng chế phẩm EMZEO để ủ phân trâu, bò Lượng phân ủ ở mỗi hộ: 4 - 5 tấn
b). Sử dụng chế phẩm sinh học xử lý phân trâu, bò tại các hộ
Cách sử dụng :
* Đối với chế phẩm EMUNIV : Hịa 1 gói (200 gam) vào 5 lit nước sạch, tưới cho 1 tấn phân trâu, bò, đánh đống, che bạt, ủ trong 25 - 30 ngày.
* Đối với chế phẩm EMIC: 300 gam chế phẩm hòa với nước sạch, tưới cho 1 tấn phân trâu , bị, dùng bạt che kín, sau 7 - 10 ngày thì đảo trộn. Ủ phân trong