CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN
2.1.1. Thuốc nghiên cứu
- Thuốc dùng trong nghiên cứu là dạng cốm tan được sản xuất tại Khoa Dược, Bệnh viện Y học cổ truyền Cao Bằng theo quy trình: tồn bộ phần thân cây Sói rừng mọc trên mặt đất sau khi thu hái về được rửa sạch, thái lát, phơi khơ, chiết tồn phần trong nước. Cốm cây sói rừng dùng trong nghiên cứu đạt tiêu chuẩn cơ sở.
Mơ tả chiết xuất và bào chế cốm cây sói rừng:
+ Chiết xuất hoạt chất: Lấy 10kg dược liệu cho vào nồi nấu, dùng vỉ ép chặt, đun với 10 lít nước sạch trong 120 phút rồi chiết lấy nước sắc lần 1. Đổ tiếp 10 lít nước sạch vào dược liệu như lần 1, đun sôi 120 phút, chiết lấy nước sắc lần 2.
+ Cô cao: Gộp nước sắc lần 1 và 2, cô thành cao đặc đạt tiêu chuẩn DĐVN IV. Thêm chất bảo quản Nipagin 0,15% pha trong cồn tuyệt đối, phân tán đều vào cao đặc.
+ Tạo cốm: Cao đặc trộn với Lactose theo tỷ lệ (1: 2) tạo được khối ẩm vừa phải, sấy ở nhiệt độ 50°C trong khoảng 1 giờ lấy ra sát hạt qua rây số 1000. Sau đó sấy tiếp ở nhiệt độ 60°C cho đến khi cốm khơ có độ ẩm ≤ 5% rồi sát qua rây số 1600. Dùng cốm này để thử các tác dụng trên động vật thực nghiệm
- Thuốc đối chứng dương Purinethol (6 – MP): viên nén chứa 50mg mercaptopurine được sử dụng để điều trị nhiều loại ung thư, trong đó đặc trị các dạng ung thư mơ liên kết, do công ty GlaxoSmithKline sản xuất.
Gộp dịch chiết 2 lần
Cao đặc
Trộn khối ẩm
Sấy khô 500C
Sát hạt qua rây số 1000
Thân cây Sói rừng Sơ chế Dược liệu
Chiết với nước Nước sắc lần 1
Chiết với nước Nước sắc lần 2 Lactose Bã dược liệu Bã dược liệu Sấy cốm 60°C còn độ ẩm < 5% Sát hạt qua rây số 1600 Cốm
Ảnh 2.1. Cốm cây sói rừng
2.1.2. Hóa chất nghiên cứu
- Kit định lượng các chỉ số hóa sinh trong máu: ALT, AST, Albumin, Cholesterol, Bilirubin, Creatinin của hãng Hospitex Diagnosics (Italy) và hãng Dialab GmbH (Áo).
- Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG cho chuột của hãng ABX – Diagnostics.
- Kít định lượng IL-2 (mã: RAB0287-1KT), TNF-α (mã: REF KMC3011) cho chuột của hãng Invitrogen (Mỹ).
- Kháng thể kháng TCD3, TCD4, TCD8 cho chuột của hãng Invitrogen (Mỹ).
2.1.3. Phương tiện, dụng cụ
- Máy xét nghiệm huyết học VETABCTM Animal Blood Counter của hãng Ugo Basile (Italy).
- Máy xét nghiệm hóa sinh máu Screen Master của hãng Hospitex Diagnosics (Italy).
- Máy ELISA của hãng Bio-Rad (Mỹ).
- Máy đếm kỹ thuật dòng chảy FACS Canto II của hãng Becton Dickinson (Mỹ)