CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1. Xác định độc tính cấp và bán trường diễn của cốm cây sói rừng
2.3.1.1. Xác định độc tính cấp
- Thử độc tính cấp và xác định LD50 theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon [129]: Chuột nhắt trắng trọng lượng 20 – 22gam được chia thành từng lô, mỗi lô 10 con. Cho từng lơ chuột uống cốm cây sói rừng với liều tăng dần từ liều cao nhất không gây chết chuột nào đến liều thấp nhất gây chết tồn bộ chuột thí nghiệm, thể tích cho uống hằng định là 0,2ml/10g thể trọng cho mỗi lần uống (0,4ml/chuột), uống 2lần/24 giờ. Chuột được nhịn ăn 12 giờ trước khi uống thuốc, 2 giờ sau khi uống thuốc lần 2, chuột được cho ăn trở lại. Theo dõi tình trạng chung của chuột và số lượng chuột chết ở mỗi lơ trong 72 giờ. Sau đó tiếp tục theo dõi tình trạng chung của chuột đến hết ngày thứ 7 sau khi uống thuốc nghiên cứu.
- Xác định số chuột chết trong vòng 72 giờ đầu. Từ số chuột chết xây dựng được phương trình tương quan tuyến tính giữa liều dùng và tỷ lệ chuột chết để xác định LD50.
2.3.1.2. Xác định độc tính bán trường diễn của cốm cây sói rừng
- Thử độc tính bán trường diễn của thuốc theo đường uống [130]:
Thỏ khỏe mạnh cả hai giống, được nuôi ổn định trong môi trường nghiên cứu trước khi cho uống thuốc. Thỏ được chia ngẫu nhiên thành 3 lô, mỗi lô 10 con, mỗi con nhốt riêng một chuồng. Thỏ được uống nước hoặc uống thuốc thử trong 8 tuần liên tục, mỗi ngày một lần vào buổi sáng:
Lô chứng : uống nước cất 3 ml/kg/ngày
Lô trị 1 : uống cốm cây sói rừng liều 0,6 g/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương liều dùng trên người, tính theo hệ số 3)
Lơ trị 2 : uống cốm cây sói rừng liều 3,0 g/kg/ngày
- Các chỉ tiêu theo dõi: được kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 4 tuần và sau 8 tuần uống thuốc.
+ Tình trạng chung của thỏ: hoạt động tự nhiên, tình trạng ăn uống, thể trọng của thỏ.
+ Đánh giá chức năng tạo máu: thông qua số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu và số lượng tiểu cầu.
+ Đánh giá chức năng gan: thông qua định lượng hoạt độ ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin và cholesterol.
+ Đánh giá chức năng thận: thông qua định lượng creatinin huyết thanh. + Mô bệnh học: Sau 8 tuần uống thuốc, thỏ được mổ để quan sát đại thể toàn bộ các cơ quan. Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận của 30% số thỏ ở mỗi lô.