2. 2. 3.1. Chiết xuất saponin toàn phần trong phương thuốc NNTGGw .
Cân 200 g bột dược liệu của phương NNTGGm, thấm ẩm bằng cồn 70°, chiết bằng cồn 70° bằng phương pháp ngấm kiệt, gộp các dịch chiết cồn rồi cất dưới áp suất giảm thu hồi dung môi cồn 70°. Dịch sau thu hồi cô trên cách thuỷ tái cắn. Cắn đem hoà trong nước, loại clorophyl, chất béo bằng ether dầu hoả. Dịch nước đã loại clorophyl, chất béo cô thành cắn. Đem cắn hoà vào 20 ml nước. Chiết saponin bằng n - butanol cho đến khi hết saponin (thử bằng phản ứng vanilin 1% cồn trong H2S04 đặc). Thu hồi dung môi n - butanol, cô trên cách thuỷ đến cắn, sấy ở nhiệt 70°c đến khối lượng không đổi. cấn này
hoà trong nước dùng để thử tác dụng sinh học và định tính. Qúa trình chiết xuất saponin toàn phần đượctiến hành 3 lần, thể hiện ở hình 3 và bảng 3.
Hình 3 : Sơ đồ chiết xuất saponin trong phương NTTGGLH
Bột dược liệu ■Thấm ẩm bằng cồn 70° Chiết ngấm kiệt, dung môi là cồn 70° Dịch chiết cồn Dịch thu hồi cồn Cắn Dịch chiết nước Dịch loại clorophyl, chất béơ*- Nước cất
Ether dầu hoả
Dịch chiết nước
1<---Cô cách thuỷ
Cắn <---Nước cất 11
Dịch nước 4•— n - butanol Thu hồi n-butanol
Bảng 3: Kết quả chiết xuất saponin trong phương NTTGGLH Lần a ( g ) b ( g ) c ( %) X( %) 1 9,784 200,05 19,4 6,07 2 9,023 200,07 18,9 5,56 3 9,523 200,03 20,01 5,96 X 5,86
Nhận xét: Hiệu Jíuất chiết saponin toàn phần trong phương thuốc NTTGGlh là 5,86%.
2.2. 3.2. Phản ứng định tính:
Cắn của phương NTTGGm, hoà vào nước để thử định tính. - Phản ứng tạo b ọ t:
Lấy 1 ml dịch cồn cho vào ống nghiệm thêm 5 ml nước cất lắc mạnh trong 5 phút quan sát thấtị dịch chiết saponin xuất hiện cột bọt bền sau 15 phút.
- Phản ứng Rosenthaler :
Cho 1 ml dịch cồn vào các ống nghiêm thêm 2 -3 giọt vanilin 1% trong etanol, thêm 1 giọt H ơ đặc thấy có màu lục đến tím.
- Phản ứng Lieberman - Burchard : ( ỹ
Trong một ống nghiệm cho 1 ml anhydric acetic thêm 1 ml cloroform đã làm lạnh ở 0°c thêm 1 giọt acid H2S04 dặc, chất thử được hoà tan vào cloroform._Rồi cho vào hỗn hợp trên, thấy dịch thử saponin có màu xanh da trời, lục, hồng, đỏ, cam và bền vững trong một thời gian.
- Phản ứng Salkowski:
Cho 5 ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm cô cạn cách thuỷ, thêm 1 ml cloroform để hoà tan cắn, thấy dịch thử saponin xuất hiện màu vàng đến hồng.
- Phản ứng Vanilin 1% cồn trong H2S04 đặc:
Trong ống nghiệm cho 1 ml dịch chiết cồn thêm 0,5 ml vanilin 1% cồn trong H2S04 đặc thất xuất hiện màu vàng.
Nhận xét: Kết quả định tính cho thấy dịch chiết saponin trong phương thuốc NTTGGnh đều cho kết quả dương tính, có nghĩa là dịch chiết vẫn tổn tại các hoạt chất saponin.