D. Tinh dầu trong điều tri bệnh răng miệng
2. 1 Tách chiết hoạt chất toàn phần
2.2.1. Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn
Nguyên vât liêu:
- Thuốc thử: dịch chiết bồ kết nồng độ
dịch chiết tế tân ở nồng độ dịch chiết xuyên tiêu ở nồng độ
dung dịch long não hương ở nồng độ :5%, 10%, 20% - Chủng vi khuẩn kiểm định do Viện kiểm nghiệm cung cấp:
Escherichia coli ATCC 25922 Bacillus subtilis ATCC 6635 Staphylococus aureus ATCC 29213 - Môi trường:
Môi trường canh thang
Cao thịt : 5 g Pepton : 10 g NaCl : 5 g Nước cất vừa đủ : 1000 ml
pH từ 7,4+7,6
Môi trường thạch thường
Cao thịt Pepton NaCl Thạch bột Nước cất vừa đủ pH từ 7,4+7,6 5 g 10 g 5 g 18 g 1000 ml
Tủ cấy vi sinh vật Bassaire S4 1125
Nồi hấp tiệt trùng HITACLAVE
Tủ ấm XK24
Bình tam giác, đĩa Petri (đường kính 9cm, đáy phẳng)
Que cấy, ống đục lỗ, pipet Paster
Thước Palmer
Phương pháp thưc nghiêm: phương pháp khuyếch tán trên môi trường thạch
Nguyên tác:
Dựa trên sự khuyếch tán của chất thử trên lớp môi trường thạch đã được cấy vi khuẩn kiểm định. Sử dụng kĩ thuật đục lỗ trên môi trường thạch, với kĩ thuật này thì nồng độ chất thử càng gần lỗ thạch càng cao và càng xa lỗ thạch càng thấp. Những vùng xung quanh lỗ thạch, nồng độ chất thử đủ để ức chế vi khuẩn không mọc được và sẽ tạo thành vòng vô khuẩn có đường kính tỷ lệ với hoạt tính chất thử.
Các bước tiến hành:
o Môi trường thạch thường, sau khi khử trùng, để nguội khoảng 45-ỉ-500C (với chủng E.coli, Sta.aureus) và khoảng 60-ỉ-650C (với chủng Bac.subtilis) thì trộn canh chủng vi sinh vật kiểm định với nồng độ 108 tế bào/ml, theo tỉ lệ 1%
để được nồng độ tế bào v s v thử là 106tế bào/ml.
o Lắc kĩ để vi khuẩn phân bố đều trong môi trường
o Rót vào mỗi hộp Petri 18 ml hỗn dịch trên - Dụng cụ:
o Chờ thạch đông. Dùng dụng cụ đục lỗ thạch để đục các lỗ có đường kính 0,6 mm.
o Dùng pipet Paster lấy chất thử và nhỏ 2 giọt vào lỗ thạch
o Để đĩa Petri ở nhiệt độ phòng khoảng nửa giờ, rồi đặt vào tủ ấm 37 °c.
o Sau 18-ỉ-24h, đọc kết quả: đo đường kính vòng vô khuẩn ở các lỗ đã nhỏ chất thử bằng thước palmer (có độ chính xác đến 0,1 mm).