Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.4. Cơ sở khoa học của việc sản xuất chế phẩm khỏng thể lũng ủỏ chống MG
MG ủể phũng, trị bệnh CRD ở gà
1.4.1. Miễn dịch chống MG
Cũng như nhiều bệnh truyền nhiễm khỏc, miễn dịch chống bệnh CRD cú nhiều loại nhưng phổ biến nhất là miễn dịch tiếp thu chủ ủộng và miễn
dịch tiếp thu bị ủộng.
* Miễn dịch tiếp thu chủ ủộng
Là loại miễn dịch thu ủược sau khi con vật nhiễm bệnh nhưng qua khỏi hoặc sau khi tiờm vaccine.
Trong bệnh CRD người ta cú thể tạo miễn dịch chủ ủộng cho ủàn gà bằng cỏch sử dụng vaccine nhược ủộc hoặc vaccine vụ hoạt. Theo Morow và cộng sự (1998) [63] việc dựng vaccine nhược ủộc MG cú khả năng kớch thớch tạo miễn dịch cho gà với MG cường ủộc. Vỡ vậy, những gà ủược tiờm vaccine cú thể
chống lại bệnh ủường hụ hấp, viờm tỳi khớ và giảm sản xuất trứng do MG gõy ra. Theo Evans và Hafez (1992) [39] việc dựng vaccine cho ủàn gà giống
ủó làm giảm khả năng lõy truyền MG qua trứng.
Theo Turner và Kleven (1998) [76] việc dựng vaccine cho gà mỏi giống ủó hạn chế ủược bệnh CRD ở gà con nuụi thịt.
Theo Hildebrand và cộng sự (1983) [45] vaccine vụ hoạt thường ủược sử dụng cho gà mỏi dũ thương phẩm ủể tạo miễn dịch bảo hộ, giảm khả năng truyền lõy MG qua trứng, hạn chế tụt giảm sản xuất trứng do nhiễm MG trong
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 26
những cơ sở chăn nuụi gà ủẻ nhiều ủộ tuổi. Tuy nhiờn ủộ dài miễn dịch chưa
ủược nghiờn cứu kỹ, phần lớn cỏc ủàn sử dụng vaccine chỉ cú ủộ dài bảo hộ 1
- 2 thỏng sau khi tiờm vaccine (Papazisi và cộng sự, 2000) [66]. * Miễn dịch bị ủộng
Ở gia cầm, miễn dịch bị ủộng cú thể cú ủược khi:
- Gia cầm mẹ cú miễn dịch truyền khỏng thể dịch thể ủặc hiệu (IgG)
cho gia cầm non qua lũng ủỏ trứng.
- đưa khỏng thể dịch thể ủặc hiệu cú sẵn từ ngoài vào.
Gà mẹ cú miễn dịch, lượng khỏng thể cú trong huyết thanh cao so với lượng khỏng thể cú trong lũng ủỏ trứng. Người ta cú thể sử dụng khỏng thể
trong lũng ủỏ ủể thay thế cho khỏng thể cú trong huyết thanh. Gà mẹ cú miễn dịch, lớp khỏng thể IgG theo mỏu ủến ống dẫn trứng, qua lớp biểu mụ ủi vào tỳi lũng ủỏ của quả trứng trong giai ủoạn trứng hỡnh thành.
1.4.2. Tớnh khỏng khỏng sinh và hoỏ dược của vi sinh vật
Khả năng khỏng thuốc của vi sinh vật ủược nhiều tỏc giả ủề cập từ lõu.
đến nay vấn ủề này càng trở lờn nghiờm trọng bởi việc lạm dụng khỏng sinh
và hoỏ dược trong trị bệnh dẫn ủến hiệu quả ủiều trị thấp, thậm chớ nhiều liệu phỏp khỏng sinh ủó bị vụ hiệu hoỏ.
Cỏc vi sinh vật gõy bệnh cú thể chứa một hay nhiều gen sản xuất ra cỏc loại protein khỏng lại một số loại khỏng sinh và hoỏ dược nằm trờn plasmid R. Cỏc plasmid R cú trong tế bào một số vi khuẩn, hầu hết trong số chỳng ủều là cỏc vi khuẩn gõy bệnh cho người hoặc ủộng vật.
Khả năng truyền cỏc gen khỏng thuốc của một số vi sinh vật phỏt triển rất mạnh theo phương thức truyền dọc và truyền ngang xảy ra giữa vi khuẩn cựng loài hay khỏc loài.
Cơ chế hoạt ủộng của cỏc plasmid R giỳp tế bào vi khuẩn hỡnh thành tớnh khỏng thuốc theo cỏc phương thức sau:
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 27
- Làm cho khỏng sinh và dược chất trở lờn vụ hoạt.
1.4.3. Biện phỏp phũng trị bệnh bằng chế phẩm sinh học trờn thế giới
Cựng với cỏc biện phỏp miễn dịch thụ ủộng phũng tiờu chảy cho lợn
con qua sữa ủầu của lợn mẹ hay sử dụng globulin miễn dịch từ huyết thanh ngựa, cũn cú thể sử dụng một lượng thớch hợp khỏng thể ủặc hiệu khỏc loài
chống lại cỏc chủng E.coli ủộc cú tỏc dụng khống chế cú hiệu quả tiờu chảy ở lợn (Yolken và cộng sự, 1988 [80]; Yokoyama và cộng sự, 1992 [79]). Cỏc tỏc giả cho biết: trứng gà ủược miễn dịch chỉ lấy phần lũng ủỏ sấy khụ thành dạng bột, từ 10 gam lũng ủỏ tối miễn dịch ban ủầu sau khi tinh chế lượng vật chất khụ thành phần IgG thu ủược ủạt 15 mg ở ủộ tinh khiết 93,8%.
Giỏ trị vật chất khụ (mg) IgG tinh khiết Phương phỏp
tinh chế IgG
Protein Lipid IgG %
Lũng ủỏ trứng 1240 3470 65 5,2 Phương phỏp phự nổi 323 9 40 12,4 Kết tủa Palson.A 16 0 15 93,8
Kết quả tinh chế IgG từ lũng ủỏ trứng gà tối miễn dịch (Yokoyama H et al, 1992) [79]
Khụng chỉ dựng chế phẩm khỏng thể lũng ủỏ ủiều trị bệnh cho gia sỳc, gia cầm mà một số tỏc giả nước ngoài như Yolken và cộng sự (1988) [80] ủó chế khỏng thể khỏng Rotavirus từ lũng ủỏ trứng gà ủược tối miễn dịch
Rotavirus ủể ủiều trị bệnh tiờu chảy cho trẻ em.
1.4.4. Biện phỏp phũng trị bệnh bằng chế phẩm sinh học tại Việt Nam
Khi cơ thể gia sỳc bị lạnh kộo dài, ủặc biệt gia sỳc non sẽ giảm phản
ứng miễn dịch, giảm số lượng bạch cầu và tỏc dụng thực bào, do ủú dễ bị
mầm bệnh tấn cụng. Việc phũng bệnh cho gia sỳc non theo hướng nõng cao sức miễn dịch cú thể bằng cỏch bổ sung cho chỳng một lượng globulin miễn dịch, tức là ủưa vào cơ thể một lượng khỏng thể ủặc hiệu tạo miễn dịch tiếp thu bị ủộng ủó ủược nhiều tỏc giả nghiờn cứu.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 28
Tạ Thị Vịnh và cộng sự (1994) [23] ủó cụng bố kết quả chiết tỏch thành cụng chế phẩm globulin từ huyết thanh ngựa ủể ủiều trị bệnh lợn con tiờu chảy.
Từ năm 1950 Viện thỳ Y Pasteur Nha Trang ủó nghiờn cứu việc dựng huyết thanh ngựa miễn dịch ủể ủiều trị bệnh lợn ủúng dấu, tụ huyết trựng và
ủặc biệt trị bệnh do virus gõy ra như dịch tả trõu bũ, dịch tả lợn.
Phan Thanh Phượng và đặng Thị Thủy (2008) [18] ủó chế tạo khỏng thể từ lũng ủỏ trứng gà ủược bào chế thành dạng bột và dạng ủụng khụ phũng trị
bệnh E.coli và tụ huyết trựng lợn. Tỏc giả cho biết: khỏng thể bột dựng phũng, trị bệnh phõn trắng lợn con rất hiệu quả. Khi phũng: 100% lợn con khụng bị bệnh phõn trắng, khi ủiều trị: 70 - 100% lợn khỏi bệnh sau 5 ngày dựng chế phẩm.
Cụng ty Cổ Phần Phỏt triển Cụng nghệ Nụng thụn (RTD) ủó nghiờn
cứu sản xuất khỏng thể Newcastle, khỏng thể Gumboro, khỏng thể Viờm gan vịt, khỏng thể Dịch tả vịt, khỏng thể E.coli từ lũng ủỏ trứng gà tối miễn dịch
ủể ủiều trị bệnh do virus, vi khuẩn gõy ra. Hiện nay 5 loại khỏng thể ủú ủó và ủang ủược Bộ Nụng nghiệp và Phỏt triển Nụng thụn cho phộp lưu hành phõn
phối rộng rói trờn thị trường và ủược bà con chăn nuụi tin dựng (Bộ Nụng
nghiệp và Phỏt triển nụng thụn, 2009) [2].
1.4.5. đặc ủiểm ưu việt về khỏng thể lũng ủỏ trứng của gà ủược gõy tối miễn dịch
IgG của gà cú tỏc dụng miễn dịch giống như IgG của ủộng vật cú vỳ nhưng cấu trỳc cú ủiểm khỏc với IgG của ủộng vật cú vỳ (trọng lượng phõn tử chuỗi nặng IgG của ủộng vật cú vỳ khoảng 50kDa, IgG của gà là 67 - 70kDa). Dựa trờn cấu trỳc khỏc nhau giữa IgG của ủộng vật cú vỳ với IgG của gà
người ta ủặt tờn cho nú là IgY.
Gà là loài vật thường ủược dựng ủể sản xuất khỏng thể, người ta cú thể chế khỏng thể từ lũng ủỏ trứng gà, IgY thu ủược từ trứng khụng cần phải lấy từ mỏu con vật. IgY cú một số ủiểm ủặc trưng:
- IgY khụng gắn vào thụ thể Fc của ủộng vật cú vỳ.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 29
- IgY cú tiểu phần Fc lớn hơn so với tiểu phần Fc của ủộng vật cú vỳ. Sử dụng IgY của gà cú ủộ ủặc hiệu cao khỏng lại cỏc khỏng nguyờn của ủộng vật cú vỳ với hoạt tớnh phản ứng chộo thấp nhất.
Gà mẹ ủược miễn dịch cú thể chuyển globulin miễn dịch IgY từ huyết
thanh sang lũng ủỏ trứng, khỏng thể trong huyết thanh và trong lũng ủỏ trứng gà là tương ủương nhau, vỡ vậy người ta thường dựng trứng ủể sản xuất khỏng thể IgY.
Thu nhặt trứng rừ ràng là dễ dàng hơn lấy mỏu từ con vật ủược miễn dịch và từ vài quả trứng mà một con gà ủẻ trong một tuần cú thể thu ủược số lượng immunoglobulin bằng với số lượng immunoglobulin trong lượng mỏu ủược
lấy vài lần từ một con thỏ ủược gõy miễn dịch (Tụ Long Thành, 2007) [20]. Lũng ủỏ trứng gà ủược tối miễn dịch cú những ủặc ủiểm:
- Theo Yokoyama và cộng sự (1992) [79] hàm lượng khỏng thể IgY trong lũng ủỏ trứng gà là 15 mg/quả, ủộ tinh khiết 93,8%.
- Khỏng thể trong ủàn gà ủược tối miễn dịch kộo dài từ 4 - 6 thỏng (tuỳ từng loại vaccine) như vậy cú thể thu hoạch trứng trong suốt thời gian dài.
- đàn gà ủược tối miễn dịch khụng ảnh hưởng ủến tỷ lệ ủẻ.
- Khỏng thể ủược sản xuất từ lũng ủỏ trứng gà tối miễn dịch cú hiệu giỏ cao như: khỏng thể E.coli hiệu giỏ ngưng kết là 1/1280, khỏng thể Newcastle cú hiệu giỏ HI ≥ 7log2, khỏng thể Viờm gan vịt cú hiệu giỏ SN ≥ 1/4000, khỏng thể Gumboro cú hiệu giỏ SN ≥ 1/2000Ầ vượt xa ngưỡng phũng hộ. Lượng khỏng thể sản xuất thụng qua lũng ủỏ trứng luụn ủỏp ứng ủủ yờu cầu thực tế sản xuất.
- Khỏng thể ủược bào chế từ lũng ủỏ trứng gà tối miễn dịch ngoài
khỏng thể ủặc hiệu ủiều trị bệnh cũn cung cấp cỏc chất dinh dưỡng cần thiết như: protein, lipid... Mặt khỏc trong dung mụi cũn bao gồm cỏc chất ủiện giải, vitamin và lượng ủường cung cấp cho con vật bệnh, vỡ vậy:
+ điều trị bằng khỏng thể con vật bệnh chúng hồi phục, khụng cũi cọc. + Khụng gõy ra hiện tượng vi sinh vật khỏng khỏng sinh và hoỏ dược. + Cú khỏng thể ủặc hiệu và dưỡng chất nờn kết quả ủiều trị cao.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦẦẦ 30
Chương 2
NỘI DUNG, NGUYấN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU