CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU
2.1.4. Phương pháp kiểm soát nhiễu và sai số
- Tập huấn cho điều tra viên trước khi thực hiện. - Tuân thủ đúng qui định trong nghiên cứu. 2.1.5. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu
- Số liệu thu thập được làm sạch trước khi nhập số liệu. Nhập số liệu được tiến hành bằng 2 máy tính độc lập để so sánh, tránh các sai số trong quá trình nhập. Nhập bằng phần mềm Microsoft Excel và chuyển toàn bộ số liệu sang định dạng của SPSS.
- Trong q trình phân tích, các giá trị ngoại lai (các loài muỗi khác) cũng được phát hiện và loại bỏ nhằm đảm bảo sự tập trung của số liệu.
2.2. Mục tiêu 2: Xác định độ nhạy cảm với hóa chất diệt cơn trùng của muỗi
Aedes aegypti và Aedes albopictus tại các điểm nghiên cứu bằng phƣơng pháp
của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) và của Trung tâm Kiểm soát Bệnh tật Hoa Kỳ (USCDC).
2.2.1. Đối tượng nghiên cứu
- Muỗi, bọ gậy Ae. aegypti và Ae. albopictus tại điểm nghiên cứu.
- Các hoá chất diệt côn trùng của WHO cung cấp Alphacypermethrin 30mg/m2, lambdacyhalothrin 0,05%, deltamethrin 0,05%, permethrin 0,75%.
- Các hoá chất diệt côn trùng của USCDC cung cấp: Alphacypermethrin, lambdacyhalothrin, deltamethrin, permethrin (bảng 1).
Bảng 2.1. Liều thử nghiệm và thời gian thử nghiệm của từng loại hóa chất đối với muỗi Aedes theo phương pháp USCDC (2019)
Hóa chất thử nghiệm
Liều hóa chất thử nghiệm /lồi
(µg/chai) Thời gian thử Nghiệm (phút)
Ae. aegypti Ae. albopictus
Deltamethrin 12,5 10 30
Lambdacyhalothrin 12,5 10 30
Alphacypermethrin 12,5 10 30
Permethrin 21,5 15 30
2.2.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
- Địa điểm:
Tại thực địa: Chọn những điểm có dịch SXHD từ năm 2016 – 2019 hoặc nơi hiện có nhiều ca bệnh SXHD và/hoặc mật độ véc tơ cao (> 0,5 con/nhà) và/hoặc chỉ số Breteau cao (>20). Chú ý đặc biệt những khu vực đông dân cư như khu vực bệnh viện, trường học, khu công nghiệp.
Tại Hà Nội:
Quận Hai Bà Trưng: Phường Bạch Mai và phường Vĩnh Tuy Quận Hà Đông: Phường Kiến Hưng và xã Phú Lương
Huyện Hoài Đức: Xã Sơn Đồng và xã La Phù 2.2.3. Phương pháp nghiên cứu
a) Thiết kế nghiên cứu
- Nghiên cứu phịng thí nghiệm. - Nghiên cứu cắt ngang và mơ tả.
b) Cỡ mẫu nghiên cứu
- Chọn ngẫu nhiên 50 nhà mỗi xã, phường để điều tra muỗi, bọ gậy Aedes. - Tất cả mẫu muỗi, quăng, bọ gậy Aedes thu thập được tại thực địa.
- Những mẫu muỗi cịn sống sau khi tiếp xúc với hố chất diệt côn trùng.
c) Phương pháp chọn mẫu
- Tại thực địa:
+ Đối với muỗi, bọ gậy Aedes thu thập ở thực địa: Tất cả muỗi, bọ gậy thu được từ các hộ gia đình.
+ Quy trình điều tra: Theo quy định của Bộ Y tế “QĐ Số 3711/QĐ-BYT ngày 19 tháng 9 năm 2014 của Bộ Y tế về việc ban hành Hướng dẫn giám sát và phòng, chống bệnh sốt xuất huyết Dengue” [59].
+ Muỗi Aedes sử dụng để xác định độ nhạy cảm theo phương pháp WHO (2016) và USCDC (2019): Muỗi trưởng thành chưa hút máu 2 - 5 ngày tuổi được nuôi từ bọ gậy/quăng bắt ở thực địa. Những mẫu muỗi cịn sống sau khi tiếp xúc với hố chất diệt côn trùng sẽ được sử dụng để phân tích tìm gen kháng.
d) Nội dung nghiên cứu
Điều tra thu thập muỗi Aedes tại các điểm nghiên cứu. Đánh giá các chỉ số muỗi trưởng thành và bọ gậy gồm 05 chỉ số: Chỉ số mật độ muỗi, chỉ số nhà có muỗi, chỉ số nhà có bọ gậy, chỉ số dụng cụ chứa nước có bọ gậy, chỉ số BI. Tập tính trú đậu (trong nhà, ngồi nhà, bề mặt giá thể, vị trí đặt giá thể). Xác định ổ bọ gậy Aedes (trong nhà, ngồi nhà, chất liệu, hình dáng, kích thước ổ đẻ).
- Tại phịng thí nghiệm: Xác định độ nhạy cảm của muỗi Aedes tại các điểm nghiên cứu với hố chất diệt cơn trùng bằng phương pháp WHO (2016) và USCDC (2019).
e) Phương pháp xác định biến số và đo lường biến số
- Thành phần các loài muỗi Aedes tại điểm nghiên cứu. - Mật độ các loài muỗi Aedes.
- Ổ bọ gậy nguồn của muỗi Aedes.
- Tỷ lệ muỗi chết sau 24 giờ thử nghiệm theo phương WHO. - Tỷ lệ muỗi chết sau 30 phút thử nghiệm theo phương USCDC.
f) Phiếu thu thập số liệu
- Phiếu điều tra muỗi Aedes,
- Phiếu phỏng vấn người tham gia nghiên cứu. - Phiếu ghi thông tin
g) Các chỉ số đánh giá
- Chỉ số nhà có quăng/bọ gậy (HI)(%) = (Số nhà điều tra có bọ gậy Aedes/ Tổng số nhà điều tra) x 100.
- Chỉ số dụng cụ chứa nước có bọ gậy/quăng (CI)(%) = (Số dụng cụ điều tra có bọ gậy Aedes/ Tổng số dụng cụ điều tra trong và ngoài nhà) x100.
- Chỉ số Breteau (BI) = Số DCCN có bọ gậy Aedes trong 100 nhà điều tra. - Chỉ số mật độ muỗi (CSMĐM, DI)
- DI (con/nhà) = (Tổng số muỗi cái Aedes bắt được/ Tổng số nhà điều tra) - Chỉ số nhà có muỗi (CSNCM) (%) = (Tổng số nhà có muỗi cái Aedes/ Tổng
số nhà điều tra) x 100.
- Độ nhạy cảm của muỗi Aedes với HCDCT.
h) Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu
Thu thập muỗi và bọ gậy Aedes theo quy trình giám sát véc tơ của Bộ Y tế năm 2014 [59]. Tại các điểm nghiên cứu, chọn ngẫu nhiên các hộ gia đình để điều tra muỗi và bọ gậy. Tiến hành điều tra từ 7 giờ sáng đến 11 giờ 30 phút và từ 13 giờ 30 phút đến 17 giờ, số hộ gia đình điều tra tối thiểu tại mỗi xã/phường từ 50 nhà trở lên. Mỗi xã/phường được tổ chức 2 nhóm điều tra, mỗi nhóm 3 người gồm: 01 người bắt muỗi, 01 người bắt bọ gậy và 01 người ghi chép số liệu. Tại mỗi hộ gia đình, bắt muỗi ở tồn bộ khơng gian trong và ngồi nhà nhưng khơng q 15 phút. Không gian trong nhà là các không gian được giới hạn bởi tường hoặc vách và có mái che. Khơng gian ngồi nhà là các khơng gian khơng có mái che như lối đi, sân… nằm giữa nhà ở chính với bếp, nhà tắm, nhà kho… hoặc là các khơng gian quanh nhà ở có mái che nhưng khơng có tường bao như hiên nhà, ban công…
+ Thu thập muỗi ngoài nhà: Dùng máy hút muỗi cầm tay, bắt muỗi đậu nghỉ ở những nơi muỗi hay trú đậu như lá cây, thân cây, thành các dụng cụ chứa nước, đồ vật vương vãi ngoài trời.
+ Thu thập muỗi trong nhà: Soi bắt muỗi đậu nghỉ ở những nơi muỗi hay trú đậu như gầm bàn, gầm giường, nơi treo quần áo…Muỗi được lưu giữ trong các tupe thủy tinh và ghi nhãn: địa điểm, vị trí, thời gian, người bắt muỗi.
+ Bắt bọ gậy trong các DCCN. Bọ gậy thu được ở mỗi DCCN được lưu giữ trong các lọ đựng mẫu có ghi nhãn: địa điểm, loại DCCN, số lượng bọ gậy, thời gian và người bắt. Bọ gậy sau khi thu thập được bảo quản và được vận chuyển về phịng thí nghiệm Khoa Côn trùng, Viện Sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương. - Kỹ thuật định loại muỗi, bọ gậy Aedes: Theo khóa định loại muỗi, bọ gậy Aedes ở Việt Nam [56] [57].
* Xác định độ nhạy cảm của muỗi Aedes với hóa chất diệt cơn trùng - Kỹ thuật thử nhạy cảm theo phương pháp của WHO (2016) [60]. Bước 1. Chuẩn bị ống nghỉ
Lấy một tờ giấy trắng sạch có kích thước 12 x 15 cm, ghi lên tờ giấy các thông tin cần thiết (số thứ tự ống, tên hóa chất, lồi muỗi và ngày tháng thử nghiệm), dùng kẹp bằng thép để giữ cho tờ giấy ép sát vào thành ống.
Bước 2. Cho muỗi vào ống nghỉ
Cho 25 con muỗi vào một ống nghỉ
Sau khi đã cho đủ 25 con muỗi vào ống, để ống nghỉ ở tư thế thẳng đứng với đầu ống có lưới hướng lên trên trong thời gian 1 giờ
Bước 4. Chuẩn bị ống tiếp xúc
Cho vào mỗi ống tiếp xúc một tờ giấy tẩm hoá chất cần thử: cuộn tờ giấy tẩm thành hình trụ và lồng vào ống tiếp xúc. Dùng kẹp bằng đồng để giữ cho tờ giấy ép sát vào thành ống.
Bước 5. Chuyển muỗi từ ống nghỉ sang ống tiếp xúc
Lắp ống tiếp xúc vào tấm đế của ống nghỉ (trong ống nghỉ đã có muỗi) thổi hết sức nhẹ nhàng vào ống nghỉ để muỗi bay từ ống nghỉ sang ống tiếp xúc.
Bước 6. Muỗi tiếp xúc với giấy tẩm hoá chất
Để ống tiếp xúc (có muỗi ở trong) ở vị trí thẳng đứng với đầu ống có lưới hướng lên phía trên trong thời gian là 60 phút
Bước 7. Chuyển muỗi từ ống tiếp xúc sang ống nghỉ
Ngay sau khi kết thúc thời gian tiếp xúc, chuyển muỗi từ ống tiếp xúc sang ống nghỉ
Bước 8. Muỗi nghỉ sau tiếp xúc
Giữ ống nghỉ trong vòng 24 giờ ở nơi tách biệt, mát mẻ với nhiệt độ điều kiện nhiệt độ 250C ± 20C và độ ẩm là 80% ± 10%. Ghi nhiệt độ tối đa và tối thiểu ở nơi để ống nghỉ trong khoảng thời gian theo dõi (24 giờ).
Tiêu chuẩn đánh giá độ nhạy cảm của muỗi với hoá chất diệt côn trùng: + Tỷ lệ muỗi chết từ 98 - 100%: muỗi nhạy cảm với hoá chất thử nghiệm
+ Tỷ lệ muỗi chết từ 90 - 97%: muỗi có khả năng kháng với hố chất thử nghiệm + Tỷ lệ muỗi chết dưới 90%: muỗi kháng với hoá chất thử nghiệm
Nếu tỷ lệ muỗi chết trong lô đối chứng từ 5% - 20% thì tỷ lệ muỗi chết ở lơ tiếp xúc với hóa chất (muỗi thử nghiệm) được điều chỉnh theo công thức Abbott.
- Kỹ thuật thử nhạy cảm theo phương pháp USCDC (2019) [61]
Bước 1:Chuẩn bị
+ Chuẩn bị chai thử nghiệm: Chai thủy tinh trung tính Wheaton dung tích 250 ml, đường kính miệng chai 1,5 cm, có nắp vặn 5 chai trong đó01 chai đối chứng và 4 chai thử nghiệm. Đánh dấu 1 chai là chai đối chứng (đánh dấu cả chai và nắp chai); đánh dấu 4 chai còn lại (theo thứ tự từ 1 – 4) gồm tên hóa chất, nồng độ và ngày thử nghiệm (đánh dấu cả chai và nắp chai).
Chú ý: Chai đối chứng và chai thử nghiệm phải được làm sạch và làm khô trước khi sử dụng.
+ Chuẩn bị muỗi cho thử nghiệm: Muỗi thử 125 muỗi cái Aedes thu từ thực địa hoặc nuôi từ bọ gậy (2-5 ngày tuổi), hút nước đường glucose 10% một ngày trước khi thử nghiệm. Chọn những con muỗi cái khỏe mạnh, đủ chân, đủ cánh có tư thế đậu bình thường để thử nghiệm, muỗi được nghỉ và ổn định trong lồng nghỉ 1 giờ trước khi thử nghiệm.
Bước 2: Thả muỗi
+ Thử sinh học được thực hiện với chai ở tư thế đứng hoặc nằm.
+ Sử dụng 1 ống hút muỗi thả 25 muỗi vào chai đối chứng bằng cách thổi nhẹ, sau đó đóng nắp chai.
+ Sử dụng 1 ống hút muỗi thả 25 muỗi vào mỗi chai thử nghiệm sau đó đóng nắp chai.
+ Ngay sau khi cho muỗi vào chai đối chứng và chai thử nghiệm, sử dụng đồng hồ bấm giờ theo dõi thời gian và đọc số muỗi ngã cứ 5 phút một lần.
+ Theo dõi số lượng muỗi chết và muỗi sống theo thời gian quy định với mỗi loại hóa chất thử và mỗi lồi muỗi quy định.
Chú ý:
Sử dụng màng lọc trong ống hút thủy tinh để tránh hút phải muỗi. Thổi nhẹ nhàng để muỗi bay vào trong chai.
Không để chạm ống hút thủy tinh vào thành trong của chai để tránh nhiễm hóa chất.
Bước 3: Đọc kết quả
+ Theo dõi và đếm số lượng muỗi chết/sống sau 30 phút và ghi số liệu theo dõi vào biểu mẫu NIMPE.BM 09.PP.06/01.
+ Tiêu chuẩn đánh giá mức độ nhạy cảm của muỗi theo phương pháp USCDC: Tỷ lệ chết trong thời điểm thử nghiệm từ 97% - 100%: Muỗi
nhạy cảm với hóa chất thử nghiệm.
Tỷ lệ chết trong thời điểm thử nghiệm từ 90% - 96%: Muỗi có khả năng hóa chất thử nghiệm.
Tỷ lệ chết trong thời điểm thử nghiệm dưới 90%: Muỗi kháng hóa chất thử nghiệm.
Bước 4: Vệ sinh dụng cụ
Các dụng cụ sau khi làm xong thử nghiệm được rửa sạch bằng nước với xà phịng, sấy khơ và bảo quản các dụng cụ đó.
2.2.4. Phương pháp kiểm sốt nhiễu và sai số
- Tập huấn cho điều tra viên trước khi thực hiện. - Tuân thủ đúng qui định trong nghiên cứu. 2.2.5. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu
- Số liệu thu thập được làm sạch trước khi nhập số liệu. Nhập số liệu được tiến hành bằng 2 máy tính độc lập để so sánh, tránh các sai số trong quá trình nhập. Nhập bằng phần mềm Microsoft Excel và chuyển toàn bộ số liệu sang định dạng của SPSS.
- Trong quá trình phân tích, các giá trị ngoại lai (các loài muỗi khác) cũng được phát hiện và loại bỏ nhằm đảm bảo sự tập trung của số liệu.
Chƣơng 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ KẾT QUẢ
3.1. Đặc điểm sinh học, sinh thái học của muỗi Ae. aegypti và Ae. albopictus tại các điểm nghiên cứu ở Hà Nội các điểm nghiên cứu ở Hà Nội
3.1.1. Đặc điểm sinh học của muỗi Ae. aegypti và Ae. albopictus trong phịng thí
nghiệm
3.1.1.1. Chu kỳ vịng đời phát triển của muỗi Ae. aegypti và Ae. albopictus
Tiến hành theo dõi 6 lơ thử nghiệm trong điều kiện phịng thí nghiệm kết quả
được thể hiện trong bảng 2, bảng 3.
a) Chu kỳ vòng đời phát triển của muỗi Ae. aegypti
Bảng 3.1. Thời gian (ngày) hoàn thành chu kỳ phát triển của muỗi Ae. aegypti trong phịng thí nghiệm.
Số
lơ Số lượng trứng
Thời gian trung bình của từng giai đoạn phát triển (ngày) (CI 95%)
Thời gian để phát triển từ trứng đến muỗi trưởng thành Trứng phát triển thành bọ gậy Bọ gậy phát triển thành quăng Quăng phát triển thành muỗi 1 50 1,86 (1,7 - 2,03) 4,12 (3,94 - 4,30) 3,62 (3,37 - 3,87) 9,60 2 50 2,06 (1,87 - 2,24) 4,10 (3,90 - 4,23) 3,57 (3,32 - 3,83) 9,73 3 50 2,07 (1,91 - 2,24) 4,11 (3,91 - 4,31) 3,62 (3,36 - 3,88) 9,80 4 50 1,90 (1,76 - 2,04) 3,89 (3,74 - 4,04) 3,73 (3,48 - 3,99) 9,52 5 50 2,02 (1,86 - 2,18) 3,96 (3,80 - 4,12) 3,46 (3,32 - 3,69) 9,44 6 50 1,96 (1,80 - 2,13) 3,90 (3,73 - 4,07) 3,57 (3,36 - 3,79) 9,43 Thời gian trung bình chung (CI 95%) 1,98 (1,89 - 2,07) 4,01 (3,89 - 4,13) 3,59 (3,50 - 3,69) 9,59 (9,43 – 9,75)
Kết quả bảng 2 cho thấy thời gian trung bình phát triển từ trứng đến bọ gậy loài Ae. aegypti 1,98 ngày; thời gian phát triển từ bọ gậy đến quăng 4,01 ngày; thời gian phát triển từ quăng đến muỗi là 3,59 ngày. Tổng thời gian trung bình để hồn thành một chu kỳ phát triển từ trứng đến muỗi trưởng thành là 9,59 ngày.
b) Chu kỳ vòng đời của muỗi Ae. albopictus
Bảng 3.2. Thời gian hoàn thành chu kỳ phát triển của muỗi Ae. albopictus trong phịng thí nghiệm Số lơ Số lượng trứng
Thời gian trung bình
của từng giai đoạn phát triển (ngày) (CI 95%) Thời gian để phát triển từ trứng đến muỗi trưởng thành Trứng phát triển thành bọ gậy Bọ gậy phát triển thành quăng Quăng phát triển thành muỗi 1 50 2,59 (2,32 - 2,86) 6,40 (5,95 - 6,85) 6,40 (5,47 - 6,07) 15,39 2 50 2,57 (2,30 - 2,84) 6,34 (5,89 - 6,79) 6,34 (5,29 - 5,88) 15,43 3 50 2,53 (2,27 - 2,79) 6,44 (5,99 - 6,89) 6,44 (5,39 - 5,96) 15,41 4 50 2,54 (2,28 - 2,80) 6,40 (5,96 - 6,84) 6,40 (5,43 - 5,99) 15,34 5 50 2,55 (2,29 - 2,81) 6,27 (5,83 - 6,71) 6,27 (5,38 - 5,94) 15,09 6 50 2,58 (2,32 - 2,84) 6,27 (5,83 - 6,71) 6,27 (5,43 - 5,99) 15,12 Thời gian trung bình (CI 95%) 2,56 (2,47- 2,66) 6,35 (6,18 - 6,53) 6,35 (5,57 - 5,80) 15,23 (15,13 - 15,46)
Kết quả bảng 3 cho thấy thời gian trung bình phát triển trứng đến bọ gậy 2,56 ngày; thời gian phát triển từ bọ gậy đến quăng 6,35 ngày; thời gian phát triển từ quăng đến muỗi là 6,35 ngày. Tổng thời gian trung bình để hồn thành một chu kỳ phát triển từ trứng đến muỗi trưởng thành là 15,23 ngày.
3.1.1.2. Tỷ lệ nở từ trứng đến muỗi trưởng thành của Ae. aegypti và Ae. albopictus
Tỷ lệ nở từ trứng đến muỗi trưởng thành của muỗi Ae. aegypti trong điều kiện phịng thí nghiệm đươc thể hiện trong bảng 3.3 và bảng 3.4.
a) Tỷ lệ nở từ trứng đến muỗi trưởng thành của muỗi Ae. aegypti
Bảng 3.3. Tỷ lệ % phát triển từ trứng đến muỗi trưởng thành trong điều kiện phịng thí nghiệm Lơ SL trứng thử nghiệm Số lượng trứng phát triển thành bọ gậy Số lượng bọ gậy phát triển thành quăng Số lượng quăng phát triển thành Muỗi Số lượng trứng thành muỗi Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) Số lượng Tỷ lệ (%) 1 50 50 100 50 100 49 98 49 98 2 50 50 100 49 98 49 100 49 98 3 50 50 100 50 100 50 100 50 100 4 50 50 100 50 100 50 100 50 100