VẬT LIỆU VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU

Chƣơng 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. VẬT LIỆU VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU

2.1.1. Nguyên liệu

Nguyên liệu sử dụng trong đề tài này là 71 mẫu DNA tổng số gồm 31 mẫu gà Ri (Hà Nội), 22 mẫu gà Đông Tảo (Hƣng Yên), 18 mẫu gà Tre (Long An), các mẫu DNA này do viện Chăn nuôi, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn cung cấp.

2.1.2. Thiết bị

Các thiết bị đƣợc sử dụng thuộc Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Gen, Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, bao gồm:

- Máy PCR PTC-100 (MJ Research, Inc., Mỹ), GeneAmp PCR System 9700 (ABI, Mỹ).

- Máy xác định trình tự tự động ABI PRISMTM 3100 Genetic Analyzer (ABI, Mỹ).

- Pipetman các loại (Gilson, Pháp).

- Bể điện di PowerPac 300 (Bio-Rad, Mỹ) - Bể ổn nhiệt (Tempette Junior Techne). - Máy khuấy trộn Vortex (OSI Rotolab). - Cân phân tích (Mettler Toledo, Thụy Sỹ). - Lị vi sóng (Sharp, Nhật Bản).

- Máy chụp ảnh (Bio-Rad, Mỹ).

- Máy làm khô chân không (Automatic Environmental Speed-Vac System, AES 1010, Savant, Mỹ).

- Máy ly tâm lạnh (Biofuge, Sorvall).

- Máy li tâm Eppendorf 5415C (Eppendorf, CHLB Đức). - Tủ lạnh sâu -20oC, -80C (Sanyo, Nhật Bản).

2.1.3. Hóa chất

Các hóa chất sử dụng trong nghiên cứu này đƣợc nhập khẩu từ các hãng Fermentas, Sigma Aldrich, Promega… Các hóa chất này gồm có:

- Bộ hóa chất dùng cho PCR: đệm, MgCl2, dNTPs, Taq DNA

polymerase… của hãng Fermentas.

- Cặp mồi H1255 và L16725 đƣợc đặt tổng hợp tại hãng Invitrogen. + H1255: 5’- CAT CTT GGC ATC TTC AGT GCC -3’

+ L16725: 5’- AGG ACT ACG GCT TGA AAG C -3’ - Hóa chất chạy điện di:

+ Agarose.

+ Dung dịch đệm TAE (Tris-acetate-EDTA) 1X. + Thang DNA chuẩn.

+ Dung dịch đệm tra mẫu: Glycerol 20%; Tris-Cl 0,1 M (pH = 8); EDTA 0,01 M (pH = 8); bromophenol blue 0,25%.

+ Dung dịch nhuộm gel ethidium bromide (EtBr).

- Bộ hóa chất thơi gel: Kit Wizard SV gel and PCR Clean - up System của hãng Promega:

 Dung dịch MBS (Membrane Binding Solution).

 Dung dịch MWS (Membrane Wash Solution) có bổ sung ethanol

95%.

- BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit của hãng Applied BioSystems (ABI, Mỹ) phục vụ cho giải trình tự vùng D-loop.

- Ethanol 100% và 70%. - Nƣớc khử ion vô trùng.

2.1.4. Địa điểm nghiên cứu

Đề tài đƣợc thực hiện tại Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ Gen, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.