CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.2. Phương pháp đánh giá
2.3.2.1. Phương pháp đánh giá viên bao
Sử dụng thiamin nitrat làm thuốc mẫu (model drug) để đánh giá các chỉ tiêu của viên bao khi khảo sát các yếu tố ảnh hưởng tới màng bao. Bào chế viên nhân thiamin nitrat hàm lượng 50 mg theo cơng thức trình bày ở phụ lục bằng phương pháp xát hạt ướt, dập viên trên máy quay tròn với bộ chày cối có đường kính 7 mm, lực gây vỡ viên 6-8 kP, khối lượng viên 160 mg rồi tiến hành bao viên như ở mục 2.3.1.1 hoặc 2.3.1.2. Sau đó đánh giá một số chỉ tiêu sau:
➢ Định lượng:
Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình và nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng với khoảng 100 mg thiamin nitrat, cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất, lắc hoặc siêu âm 10 phút, để yên thêm 10 phút, thêm nước cất đến vạch, lắc đều. Ly tâm 4000 vịng/phút trong 5 phút. Hút chính xác 1,0 ml dịch trong ly tâm ở trên cho vào bình định mức 100 ml, thêm nước đến vạch, lắc đều thu được dung dịch thử.
Mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 100,0 mg thiamin nitrat chuẩn (hoặc nguyên liệu) vào bình định mức 100 ml. Thêm khoảng 70 ml nước cất, lắc hoặc siêu âm cho tan hết, thêm nước cất đến vạch. Hút chính xác 1,0 ml dịch cho vào bình định mức 100 ml, thêm nước đến vạch, lắc đều, thu được dung dịch chuẩn.
19
Đo độ hấp thụ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử tại bước sóng 266 nm, dùng nước cất làm mẫu trắng.
% Hàm lượng thiamin nitrat = 𝐴𝑡.𝐷𝑡.𝑚𝑐
𝐴𝑐.𝐷𝑐.𝑚𝑡 x100%
Trong đó: Ac, At lần lượt là độ hấp thụ quang của mẫu chuẩn và mẫu thử Dc, Dt lần lượt là độ pha loãng của mẫu chuẩn và mẫu thử mc, mt lần lượt là khối lượng mẫu thử và mẫu chuẩn (mg).
Yêu cầu: Hàm lượng thiamin nitrat, C12H17N5O4S , từ 90,0 % đến 110,0 % so với lượng ghi trên nhãn.
➢ Thử hòa tan:
Chỉ thử trong môi trường acid.
Giai đoạn môi trường acid:
✓ Thiết bị: Kiểu cánh khuấy.
✓ Mơi trường hồ tan: 900 ml dung dịch acid HCl 0,1N.
✓ Tốc độ quay: 50 vòng/phút.
✓ Thời gian: 2 giờ.
✓ Nhiệt độ: 37 ± 0,5°C.
Cách tiến hành: Hút mẫu tại các thời điểm 30, 60, 90, 120 phút, mỗi lần hút 10 ml, lọc, đồng thời bổ sung 10 ml dung dịch HCl 0,1 N vào trong cốc. Đo quang ở bước sóng 266 nm. So sánh với dung dịch chuẩn được chuẩn bị như sau: Cân chính xác khoảng 25,0 mg thiamin nitrat chuẩn (hoặc nguyên liệu) vào bình định mức 100 ml, thêm 50 ml dung dịch HCl 0,1 N, lắc đều, thêm HCl 0,1 N vừa đủ đến vạch. Hút chính xác 2,0 ml dung dịch này vào một bình định mức 50 ml khác, thêm HCl 0,1 N vừa đủ đến vạch, lắc đều. Mẫu trắng là dung dịch HCl 0,1 N.
% Thiamin nitrat hịa tan được tính theo cơng thức:
% Thiamin hòa tan =
(𝐶𝑐𝑥𝐷𝑛 𝐷𝑐 +
10𝑥 ∑𝑛−1𝑖=1 𝐶𝑖−1
900 )𝑥900
𝑚 x 100%
Trong đó: Cc là nồng độ dung dịch chuẩn (mg/ml).
Dn là mật độ quang của dung dịch thử tại thời điểm lấy mẫu. Dc là mật độ quang của dung dịch chuẩn.
Ci-1 là nồng độ dung dịch thử tại thời điểm trước đó (mg/ml). m là khối lượng thiamin nitrat có trong mẫu thử hòa tan (mg). Tiến hành phép thử 3 lần, lấy kết quả trung bình.
20
Yêu cầu: Không quá 10 % lượng thiamin nitrat, C12H17N5O4S, so với lượng ghi trên nhãn hòa tan trong 2 giờ.
➢ Thử độ rã:
− Thiết bị: máy thử độ rã Pharma test.
− Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 11.7:
Cho một viên vào mỗi ống thử, không dùng đĩa, treo giá đỡ ống thử trong cốc chứa dung dịch HCl 0,1 N, vận hành thiết bị trong 120 phút. Lấy giá đỡ ống thử ra khỏi chất lỏng. Trừ các mảnh vỏ bao, khơng một viên nào bị rã hay có dấu hiệu bị rạn nứt khiến hoạt chất bị hoà tan. Thay chất lỏng trong cốc bằng đệm phosphat hỗn hợp pH 6,8, cho đĩa vào ống và vận hành thiết bị trong 60 phút. Lấy giá đỡ ống thử ra khỏi chất lỏng. Mầu thử đạt yêu cầu nếu tất cả các viên đều rã.
− Làm với 3 viên.
➢ Khả năng trương nở trong môi trường acid
Để đánh giá khả năng chống và bảo vệ khỏi acid dạ dày, khối lượng khô (m0) của 3 viên được ghi lại và sau đó đặt cả 3 viên vào trong ống nghiệm chứa 10 mL HCl 0,1 M ở 25°C, cứ sau 30 phút thì lấy viên ra, thấm khơ nước rồi cân khối lượng viên trương nở (mt), sau đó lại cho vào ngâm trong ống nghiệm. Thí nghiệm tiến hành trong 2 giờ, lặp lại 3 lần. Phần trăm khả năng trương nở được tính theo cơng thức:
Khả năng trương nở (%) = 𝑚𝑡− 𝑚𝑜
𝑚𝑜 x 100 %
2.3.2.2. Phương pháp đánh giá dịch bao
Với dịch bao có chứa nano lipid rắn, sau khi bào chế được nano, tiến hành đánh giá kích thước tiểu phân (KTTP) trung bình và hệ số phân bố kích thước tiểu phân (PDI) bằng máy đo Zetasize. Nguyên tắc của thiết bị này là dựa vào mức độ tán xạ của chùm tia sau khi va chạm vào tiểu phân có thể tính được KTTP theo thuyết Mic.
Hỗn dịch nano được pha loãng đến nồng độ đếm tiểu phân khoảng 200-400 kcps.
2.3.2.3. Đánh giá một số đặc tính của màng bao
❖ Các nguyên liệu sử dụng để đánh giá một số đặc tính khác của màng bao:
- Màng bao: Dịch bao được chuẩn bị như mục 2.3.1, nồng độ chất rắn là 4,25% (kl/tt).
Màng phim được chuẩn bị bằng cách đổ riêng lẻ 10 g dịch bao vào đĩa petri đường kính 95 mm. Dịch bao trong đĩa petri được làm khô trong tủ sấy ở 40°C trong 48 giờ. Sau khi làm khơ, các màng phim được bóc ra, để sử dụng cho các thí nghiệm đánh giá độ bền cơ học, soi kính hiển vi, đo phổ IR và khả năng chống ẩm của màng.
21
- Viên bao: viên mẫu thiamin được bào chế ở mục 2.3.1.5, sử dụng cho thí nghiệm quan
sát hình thái bề mặt viên bao, chụp SEM.
❖ Thiết kế thí nghiệm:
➢ Hình thái bề mặt viên bao
− Thí nghiệm 1: Quan sát viên bao dưới kính hiển vi soi nổi để xem màu sắc, độ nhẵn mịn của bề mặt viên.
− Thí nghiệm 2: Phun dịch bao lên phiến kính, sấy khơ để tạo lớp màng mỏng, đem quan sát dưới kính hiển vi để quan sát sự phân bố của thành phần rắn trong màng bao.
− Thí nghiệm 3: Quan sát hình thái bề mặt viên bao qua kính hiển vi điện tử quét SEM. Mẫu được gắn trên một giá đo phủ một lớp mỏng platinum để tránh tích tụ điện, sau đó được đưa vào buồng chân không và tiến hành đo tại thế gia tốc 10 kV. Nguyên tắc của SEM là chùm điện tử quét trên toàn bộ bề mặt của mẫu được thu lại bởi các đầu dò để biến đổi thành những tín hiệu phản ánh bề mặt của mẫu đưa ra màn hình quan sát.
➢ Độ bền cơ học
Màng bao được cắt thành các dải hình chữ nhật kích thước 30 mm x 10 mm, bảo quản trong bình hút ẩm trong 1 ngày ở nhiệt độ phịng. Mỗi dải phim được cố định hai đầu với khoảng cách ban đầu là 10 mm. Một đầu cố định vào lực kế, đầu còn lại kéo dãn dải phim đến khi dải phim bị đứt, ghi lại giá trị lực [29].
Độ bền kéo (kN/m2) = Lực gây đứt màng (N)
Thiết diện màng (𝑚𝑚2) x1000 ➢ Khả năng chống ẩm của màng
Cắt màng bao thành các mảnh hình trịn có đường kính 2 cm, bảo quản trong bình hút ẩm 1 ngày ở nhiệt độ phịng. Sau đó màng bao được đưa vào mơi trường khắc nghiệt, nhiệt độ 25°C, độ ẩm khoảng 75% (dung dịch bão hịa natri clorid trong bình hút ẩm) trong 3 ngày. Khả năng chống ẩm của màng được đánh giá thông qua phần trăm khối lượng màng tăng lên.
% khối lượng tăng lên = 𝑚2−𝑚1
𝑚1 x 100%
Trong đó, m1, m2 lần lượt là khối lượng màng trước và sau khi hút ẩm.
➢ Phổ hồng ngoại IR
Các mẫu đo phổ FT-IR: natri alginat, alcol cetostearylic, lecithin, màng bao natri alginat, màng bao natri alginat - nano lipid.
22
Mẫu bột cần đánh giá được trộn đều với kali bromid (KBr) theo tỷ lệ khối lượng 1:10 trong cối sứ mã não. Bột sau đó được dập viên, viên được để vào vị trí đặt mẫu trong buồng đo. Quét tại dải số sóng từ 4000 đến 400 cm-1.