* Hình ảnh gan đại thể
Ở lơ chuột bệnh lý qua sát thấy hình ảnh gan bạc màu, xốp, bè gan to, bề mặn khơng nhẵn, có các nốt sần. Điều này chứng tỏ paracetamol đã gây tổn thương các mô gan. Ở lô chuột được uống CNVT với mức liều 500 mg/kg kết quả hình ảnh cho thấy có nhưng cải thiện tuy nhiên chưa chưa rõ rệt so với lô chuột bệnh lý. Sự khác biệt chỉ được thấy rõ trên hình ảnh gan đại thể của lô chuột khi uống CNVT ở mức liều 1000 mg/kg và lô chuột chứng dương khi uống silymarin. Ở hai lơ này hình ảnh gan sẫm màu nhiều, ít bạc màu, bề mặt khá nhẵn. Ở lơ uống CNVT 1000 mg/kg ít phù nề, ít sung huyết.
* Hoạt độ AST, ALT
AST và ALT là hai loại enzym được tìm thấy chủ yếu ở các tế bào gan. Khi tế bào gan bị phá hủy AST và ALT sẽ được giải phóng và đi vào máu. Đặc biệt trong trường hợp viêm gan cấp tính nồng độ AST và ALT trong máu sẽ tăng lên một cách đột ngột. Do đó việc xác định hoạt độ AST và ALT là một xét nghiệm hữu ích để phát hiện tổn thương gan và mức độ tổn thương gan.
35
Kết quả thực nghiệm cho thấy hoạt độ AST và ALT ở lô bệnh lý tăng cao (lần lượt là 12 và 24 lần) so với lô sinh lý. Điều này chứng tỏ paracetamol đã gây tổn thương tế bào gan cấp và làm giải phóng các enzym này vào máu. Việc sử dụng CNVT liều 500 mg/kg có làm giảm hoạt độ AST (13,5) và ALT (50,2%) so với lô bênh lý nhưng sự khác biệt này là khơng có ý nghĩa với p>0,05. Sự khác biệt thấy rõ và có ý nghĩa ở lơ chuột uống CNVT liều 1000 mg/kg khi làm giảm hoạt độ AST (52,6%) và ALT (50,2%) so với lơ bệnh lý với p<0,05. Do đó khi sử dụng mức liều cao 1000 mg/kg CNVT đã cho thấy khả năng ức chế tăng hoạt độ enzym AST và ALT phù hợp với những nghiên cứu đã được công bố. Lô chứng silymarin (silymarin là một hoạt chất được sử dụng rộng rãi trong việc điều trị các bệnh về gan) đã chứng minh được tác dụng thông qua việc làm giảm hoạt độ AST (47,1%) và ALT (57,3%) so với lô bệnh lý với p<0,05.
Kết quả đo hoạt độ AST và ALT hoàn toàn tương ứng với sự biến đổi hình ảnh gan đại thể ở các lơ chuột.
* GSH, TBARs
GSH là một chất chống oxy hoá đóng vai trị quan trọng trong bảo vệ tế bào khỏi tác hại của gốc tự do, làm giảm chất oxy hóa nội sinh và chống stress oxy hố ngoại sinh [18], [44]. Gây tổn thương gan bằng paracetamol làm giảm GSH trong gan. Các chất bảo vệ gan hiệu quả sẽ làm phục hồi hàm lượng GSH trong mô gan. TBARs (các cơ chất phản ứng với TBA) là sản phẩm peroxide hóa lipid, được hình thành bởi các gốc tự do tấn công màng tế bào và được sử dụng rộng rãi như là một dấu ấn sinh học về sự tổn thương peroxide hóa lipid [41]. TBARs tăng cao khi gan bị nhiễm độc bởi paracetamol. Các chất bảo vệ gan hiệu quả sẽ làm giảm được hàm lượng TBARs có trong mơ gan.
Kết quả ở Bảng 3.9 và Bảng 3.10 cho thấy lơ chuột bệnh lý có hàm lượng
GSH giảm có ý nghĩa thống kê và TBARs tăng có ý nghĩa thống kê so với lơ sinh lý. Sự thay đổi hàm lượng GSH và TBARs do sự stress oxy hóa và peroxide hóa lipid xảy ra mạnh mẽ ở gan. Ở lô chuột được uống CNVT với liều 500 mg/kg không cho thấy sự khác biệt đáng kể về hàm lượng GSH và TBARs so với lô chuột bệnh lý. Ở lô chuột uống CNVT liều 1000 mg/kg và lô chuột uống silymarin đã cải thiện trạng thái stress oxy hóa và peroxide hóa lipid ở gan theo xu hướng làm giảm TBARs và làm tăng GSH. Như vậy việc uống CVNT và silymarin đã làm hạn chế tình trạng stress oxy hóa gan do paracetmol gây ra. Kết quả này đã chứng minh hoạt động chống oxy hóa của cao chiết Ngũ vị tử Ngọc Linh và hoàn toàn phù hợp với những tài liệu nghiên cứu về hoạt tính chống oxy hóa đã được cơng bố [11], [15], [45].
36
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 1. Kết luận
Từ các nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng bảo vệ gan của cao chiết Ngũ vị tử Ngọc Linh, khóa luận đã thu được những kết quả sau:
- Bằng phương pháp định tính hóa học các nhóm chất đã xác định được trong dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh có chứa các nhóm hợp chất: flavonid, courmarin, acid hữu cơ và chất béo.
- Kết quả định lượng polyphenol và flavonoid có trong cao chiết Ngũ vị tử Ngọc Linh khá cao lần lượt là 8,72% và 6,70%.
- Cao chiết Ngũ vị tử Ngọc Linh có khả năng bảo vệ gan trên mơ hình gây viêm gan cấp bằng paracetamol. Với liều cao 1000 mg/kg cao chiết Ngũ vị tử Ngọc Linh cho thấy khả năng làm giảm hoạt độ AST và ALT trong huyết thanh rất hiệu quả. Bên cạnh đó cao chiết Ngũ vị tử Ngọc Linh liều cao 1000 mg/kg còn cải thiện được trạng thái stress oxy hóa trong gan qua hiệu quả làm giảm lượng TBARs và làm tăng lượng GSH trong mô gan.
2. Đề xuất
Từ những kết quả của khóa luận, cần tiếp tục các nghiên cứu thêm qua các hướng sau:
- Tiếp tục sàng lọc và định lượng các hợp chất lignan từ dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh.
- Nghiên cứu các thành phần chính có tác dụng bảo vệ gan từ Ngũ vị tử Ngọc Linh và tiến hành chiết phân đoạn nhằm nâng cao hiệu quả tác dụng bảo vệ gan.
TÀI LIỆU THAM KHẢO: Tài liệu tham khảo Tiếng Việt:
1. Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, tr. 872-875.
2. Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung và cộng sự (2006), Cây thuốc và động vật
làm thuốc ở Việt Nam, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, tr. 416-423.
3. Bộ môn Dược liệu (2012), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Trường Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh.
4. Bộ mơn Dược liệu (2010), Thực tập Dược liệu, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội. 5. Bộ Y tế (2015), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất bản Y học, tr. 1273-1274. 6. Bộ Y tế (2015), "Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị ngộ độc", tr. 30-31.
7. Nguyễn Mạnh Cường, Trần Thu Hường và cộng sự (2016), "Đánh giá tác dụng bảo vệ gan của rễ cây Xáo tam phân (Paramingya trimera) trên chuột gây tổn thương gan bằng paracetamol", Tạp chí Khoa học và Cơng nghệ, 54(1), tr. 37- 45.
8. Nguyễn Thượng Dong (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của
thuốc từ dược thảo, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, tr. 309-311.
9. Đỗ Thị Oanh, Phạm Thanh Kỳ và cộng sự (2010), "Nghiên cứu tác dụng chống viêm và bảo vệ gan của cao sói rừng trên thực nghiệm", Tạp chí Dược học
411(50), tr. 36-39.
10. Nguyễn Trọng Tường, Huỳnh Duy Khang và cộng sự (2020), "Xác định hàm lượng polyphenol, flavonoid và hoạt tính kháng oxy hóa của cao chiết từ Vạn thọ (Tagetes erecta L.) hoa vàng và hoa cam", Tạp chí Nghiên cứu khoa học
và Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô, 2020(08), tr. 188-198.
Tài liệu tham khảo Tiếng Anh:
11. Chen X., Tang R., et al. (2019), "Physicochemical properties, antioxidant activity and immunological effects in vitro of polysaccharides from
Schisandra sphenanthera and Schisandra chinensis", Int J Biol Macromol,
131, pp. 744-751.
12. Li Z., He X., et al. (2018), "A review of polysaccharides from Schisandra
chinensis and Schisandra sphenanthera: Properties, functions and
applications", Carbohydr Polym, 184, pp. 178-190.
13. Lu Y., Chen D. F. (2009), "Analysis of Schisandra chinensis and Schisandra
14. Mai N. T., Doan V. V., et al. (2021), "Chemical constituents from Schisandra
sphenanthera and their cytotoxic activity", Nat Prod Res, 35(20), pp. 3360-
3369.
15. Wang X., Yu J., et al. (2018), "Characteristics and Antioxidant Activity of Lignans in Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera from Different Locations", Chem Biodivers, 15(6), pp. e1800030.
16. Flora of China, 7, pp. 39-43.
17. Chang Hung-Chi, Guan-Jhong Huang, et al. (2007), "Antioxidant activities and polyphenol contents of six folk medicinal ferns used as “Gusuibu”",
Botanical Studies, 48(4), pp. 397.
18. Enns G. M., Cowan T. M. (2017), "Glutathione as a Redox Biomarker in Mitochondrial Disease-Implications for Therapy", J Clin Med, 6(5), pp. 19. Ikeya Yukinobu, Eiji Miki Minoru Okada, et al. (1990), "Benzoylgomisin Q
and benzoylgomisin P, two new lignans from Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils", Chemical & pharmaceutical bulletin, 35(8), pp. 1408-1411.
20. Ikeya Yukinobu, Heihachiro Taguchi, et al. (1980), "The constituents of
Schizandra chinensis Baill. VII. The structures of three new lignans, (-)-
gomisin K1 and (+)-gomisins K2 and K3", Chemical & pharmaceutical bulletin, 28(8), pp. 2422-2427.
21. Ikeya Yukinobu, Heihachiro Taguchi, et al. (1980), "The constituents of
Schizandra chinensis Baill. VIII. The structures of two new lignans,
tigloylgomisin P and angeloylgomisin P", Chemical & pharmaceutical bulletin, 28(11), pp. 3357-3361.
22. Ikeya Yukinobu, Heihachiro Taguchi, et al. (1979), "The constituents of
Schizandra chinensis Baill. I. Isolation and structure determination of five new
lignans, gomisin A, B, C, F and G, and the absolute structure of schizandrin",
Chemical & pharmaceutical bulletin, 27(6), pp. 1383-1394.
23. Ikeya Yukinobu, Heihachiro Taguchi, et al. (1979), "The constituents of
Schizandra chinensis Baill. V. The structures of four new lignans, gomisin N,
gomisin O, epigomisin O and gomisin E, and transformation of gomisin N to deangeloylgomisin B", Chemical & pharmaceutical bulletin, 27(11), pp.
2695-2709.
24. Ikeya Yukinobu, Hirotoshi Kanatani, et al. (1988), "The constituents of
Schizandra chinensis Baill. XV. Isolation and structure determination of two
new lignans, gomisin S and gomisin T", Chemical & pharmaceutical bulletin, 36(10), pp. 3974-3979.
25. Ikeya Yukinobu, Ko Sugama, et al. (1991), "Two lignans from Schisandra sphenanthera", Phytochemistry, 30(3), pp. 975-980.
26. Ikeyda Yukinobu, Heihachiro Taguchi, et al. (1982), "The constituents of
Schizandra chinensis Baill. XII. Isolation and structure of a new lignan,
gomisin R, the absolute structure of wuweizisu C and isolation of schisantherin D", Chemical & pharmaceutical bulletin, 30(9), pp. 3207-3211. 27. Jiang E. P., Li H., et al. (2015), "Schisandrin B protects PC12 cells against oxidative stress of neurodegenerative diseases", Neuroreport, 26(6), pp. 360- 6.
28. Kopustinskiene D. M., Bernatoniene J. (2021), "Antioxidant Effects of
Schisandra chinensis Fruits and Their Active Constituents", Antioxidants
(Basel), 10(4), pp.
29. Lee Y. S., Cho I. J., et al. (2019), "Hepatoprotective effects of blue honeysuckle on CCl4-induced acute liver damaged mice", Food Sci Nutr, 7(1), pp. 322-338.
30. Liu C. S., Fang S. D., et al. (1978), "Studies on the active principles of
Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils. The structures of schisantherin A, B,
C, D, E, and the related compounds", Sci Sin, 21(4), pp. 483-502.
31. Liu S. J., Qu H. M., et al. (2014), "SCP, a polysaccharide from Schisandra chinensis, induces apoptosis in human renal cell carcinoma Caki-1 cells
through mitochondrial-dependent pathway via inhibition of ERK activation",
Tumour Biol, 35(6), pp. 5369-74.
32. McGill M. R., Jaeschke H. (2019), "Animal models of drug-induced liver injury", Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis, 1865(5), pp. 1031-1039.
33. McGill M. R., Williams C. D., et al. (2012), "Acetaminophen-induced liver injury in rats and mice: comparison of protein adducts, mitochondrial dysfunction, and oxidative stress in the mechanism of toxicity", Toxicol Appl
Pharmacol, 264(3), pp. 387-94.
34. Mohamed A. F., Ali Hasan A. G., et al. (2005), "Antioxidant and hepatoprotective effects of Eucalyptus maculata", Med Sci Monit, 11(11), pp. BR426-31.
35. Mossanen J. C., Tacke F. (2015), "Acetaminophen-induced acute liver injury in mice", Lab Anim, 49(1 Suppl), pp. 30-6.
36. Nasser M. I., Zhu S., et al. (2020), "A Comprehensive Review on Schisandrin B and Its Biological Properties", Oxid Med Cell Longev, 2020, pp. 2172740.
37. Nirmala M., Girija K., et al. (2012), "Hepatoprotective activity of Musa paradisiaca on experimental animal models", Asian Pac J Trop Biomed, 2(1), pp. 11-5.
38. Qu H. M., Liu S. J., et al. (2014), "Antitumor and antiangiogenic activity of
Schisandra chinensis polysaccharide in a renal cell carcinoma model", Int J Biol Macromol, 66, pp. 52-6.
39. Richard M.K.Saunders (2001), "Species plantarum: flora of the world Part 4. schisandraceae", Australian biological resources study canberra, pp. 1-10. 40. Ruepp S. U., Tonge R. P., et al. (2002), "Genomics and proteomics analysis
of acetaminophen toxicity in mouse liver", Toxicol Sci, 65(1), pp. 135-50. 41. Simeonova R., Kondeva-Burdina M., et al. (2014), "Some in vitro/in vivo
chemically-induced experimental models of liver oxidative stress in rats",
Biomed Res Int, 2014, pp. 706302.
42. Wang C. M., Yuan R. S., et al. (2016), "Schisandra polysaccharide inhibits hepatic lipid accumulation by downregulating expression of SREBPs in NAFLD mice", Lipids Health Dis, 15(1), pp. 195.
43. Wasowicz W., Neve J., et al. (1993), "Optimized steps in fluorometric determination of thiobarbituric acid-reactive substances in serum: importance of extraction pH and influence of sample preservation and storage", Clin Chem, 39(12), pp. 2522-6.
44. Yuan L., Kaplowitz N. (2009), "Glutathione in liver diseases and hepatotoxicity", Mol Aspects Med, 30(1-2), pp. 29-41.
45. Yue C., Chen J., et al. (2015), "Effects of Selenylation Modification on Antioxidative Activities of Schisandra chinensis Polysaccharide", PLoS One, 10(7).
46. Yue C., Chen J., et al. (2017), "The antioxidant action and mechanism of selenizing Schisandra chinensis polysaccharide in chicken embryo
hepatocyte", Int J Biol Macromol, 98, pp. 506-514.
47. Zamzami M. A., Baothman O. A. S., et al. (2019), "Amelioration of CCl4- Induced Hepatotoxicity in Rabbits by Lepidium sativum Seeds", Evid Based Complement Alternat Med, 2019, pp. 5947234.
48. Zhao T., Mao G., et al. (2014), "Isolation, characterization and antioxidant activity of polysaccharide from Schisandra sphenanthera", Carbohydr Polym, 105, pp. 26-33.
49. Zhao T., Mao G., et al. (2013), "Antitumor and immunomodulatory activity of a water-soluble low molecular weight polysaccharide from Schisandra chinensis (Turcz.) Baill", Food Chem Toxicol, 55, pp. 609-16.
50. Niu J., Xu G., et al. (2017), "In Vitro Antioxidant activities and anti-diabetic effect of a polysaccharide from Schisandra sphenanthera in rats with type 2 diabetes", Int J Biol Macromol, 94(Pt A), pp. 154-160.