HA 3:2 HE 5:2 CE 3:2 CA 2:2 CM 3:2 2.2.3.2. Sắc ký cột
Lấy 49,9g cao chiết ethyl acetate trộn với một lượng vừa đủ silicagel Merck, khuấy đều và liên tục cho tới khi hỗn hợp thành dạng bột khơ. 105g bột silicagel có tẩm dịch chiết được đưa lên cột sắc ký đường kính 3 cm. Cột sau khi đã tương đối ổn định, hỗn hợp bột silicagel và cao chiết ethyl acetate được đưa lên đầu cột, với hệ dung môi ban đầu là hexane : acetone (3:2). Sau đó xả hệ dung mơi hexane : acetone (3:2) và thu được 100ml hệ dung môi trên. Tiếp tục với hệ dung môi rửa giải là hexane : acetone (3:2,5). Dịch giải ly từ cột sắc ký được hứng vào các ống nghiệm lớn (dung tích 50ml) có đánh số. Dùng sắc ký bản mỏng và đèn UV hai bước sóng để kiểm tra phần dịch thu được, những phần giống nhau gom lại thành một phân đoạn.
(a) (b)
Hình 2.10. Cột sắc ký lúc vừa cho cao chiết (a) và lúc đang chạy dung môi (b).
Tiếp tục với hệ dung môi rửa giải hexane : acetone (3:3). Dịch giải ly được hứng vào các ống nghiệm lớn được đánh số. Dùng sắc ký bản mỏng và đèn UV hai bước sóng để kiểm tra phần dịch thu được, những phần giống nhau gom lại thành một phân đoạn.
Với hệ dung môi rửa giải hexane : acetone (3:3,5). Dịch giải ly được hứng vào các ống nghiệm lớn được đánh số. Dùng sắc ký bản mỏng và đèn UV hai bước sóng để kiểm tra phần dịch thu được, những phần giống nhau gom lại thành một phân đoạn.
Tiếp tục với hệ dung môi rửa giải hexane : acetone (3:4). Dịch giải ly được hứng vào các ống nghiệm lớn được đánh số. Dùng sắc ký bản mỏng và đèn UV hai bước sóng để kiểm tra phần dịch thu được, những phần giống nhau gom lại thành một phân đoạn.
Tiếp tục với hệ dung môi rửa giải hexane : acetone (3:4,5). Dịch giải ly được hứng vào các ống nghiệm lớn. Dùng sắc ký bản mỏng và đèn UV hai bước sóng để kiểm tra phần dịch thu được.
2.2.3.3. Thu cao chiết của từng phân đoạn
Cô quay chân không dịch chiết của từng phân đoạn, thu được cao chiết của từng phân đoạn.
2.2.3.4. Xác định thành phần hóa học của cao chiết phân đoạn
Lấy 1g cao chiết ethyl acetate ở phân đoạn 1 để xác định thành phần hóa học bằng phương pháp Sắc kí khí ghép khối phổ GC – MS (Gas Chromatography Mass Spectroscopy).
Mẫu được gửi đến Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lường chất lượng 2 tại địa chỉ 02 Ngô Quyền, quận Sơn Trà, thành phố Đà Nẵng.
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. KẾT QUẢ CHỌN HỆ DUNG MÔI RỬA GIẢI