Phương Pháp nghiên cứu

CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN

2.3. Phương Pháp nghiên cứu

2.3.1. Phương pháp thu thập tài liệu

Thu thập thông từ các bài báo khoa học, những cơng trình nghiên cứu có liên quan đến đề tài gồm có:

 Tình trạng các loại rác thải nơng nghiệp

 Tình trạng đất nơng nghiệp

 Đặc điểm, tính chất đất nơng nghiệp

 Quy trình sản xuất enzyme rác từ rác thải hữu cơ

 Ứng dụng của enzyme rác

 Tình hình nghiên cứu enzyme rác trong đất nơng nghiệp và ảnh hưởng của chúng đến cây nông nghiệp (cụ thể là lúa).

2.3.2. Phương pháp đo NH4+ , NO3- 2.3.2.1. Thu nhập mẫu 2.3.2.1. Thu nhập mẫu

Nitơ vô cơ - N và nitơ khống hóa (NH4 + và NO3- ) được chiết xuất bằng dung dịch KCl 10% và sau đó lọc qua giấy lọc , sau đó được phân tích lần lượt bằng các chất khử nitroprusside và hydrazine (JSSSPN 1986 ) ở bước sóng 655 nm và 450 nm bằng cách sử dụng máy quang phổ UVD-300 ( Spectro UV-Vis tách hoặc chùm tia kép / tế bào quét tự động 8, Labomed.inc, Hoa Kỳ ).

Mẫu thu được có độ lỗng khá lớn nên khơng cần pha lỗng.

2.3.2.2. Phương pháp đo NH4+

Chuẩn bị hóa chất:

Thuốc thử A gồm (cân cho 1 l):

 34.0 g sodium Salicylate

 25.0 g sodium Citrate

 25.0 g sodium Tartrate

 0.12 g sodium Nitroprusside

Thuốc thử B gồm (cân cho 1 l):

Cân cho 1 L:

 30.0 g sodium hydroxide

 10 ml 5% solution of Sodium Hypoclorite

Tên đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng của enzyme rác tới khả năng phân hủy rơm rạ trong đất nông nghiệp.

Sinh viên thực hiện: Trần Khánh Bảo Người hướng dẫn:TS. Đỗ Hồng Hạnh 18

Các bước tiến hành:

 Hút mẫu cần đo 1ml vào ống nghiệm

 Hút 5ml dung dịch A rồi chờ 15 phút, lắc đều.

 Hút 5ml dung dịch B, lắc đều rồi để ở trong bóng tối trong 30 phút.  Đem đi đo ở OD655

Phản ứng nitroprosside tạo màu xanh của inophenol, đo ở bước sóng 655nm.

Bảng 2.2. Bảng xây dựng đường chuẩn NH4+ Standard ABS mg/L 1 0 0 2 0.222 2 3 0.478 4 4 0.683 6 5 0.871 8 6 1.133 10

Tên đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng của enzyme rác tới khả năng phân hủy rơm rạ trong đất nông nghiệp.

Sinh viên thực hiện: Trần Khánh Bảo Người hướng dẫn:TS. Đỗ Hồng Hạnh 19

Biểu đồ 2.1. Biểu đồ đường chuẩn của NH4+

2.3.2.3. Phương Pháp đo NO3 –

Nguyên lý: Phương pháp mơ tả trong đó nitrat bị khử thành nitrit bằng hydrazin với sự

có mặt của đồng. Khơng cần thiết bị đặc biệt và việc giảm nhiệt không bị ảnh hưởng bởi ánh sáng phịng thí nghiệm thơng thường hoặc sự thay đổi nhiệt độ môi trường trong phạm vi từ 23 đến 27 ° C.

Chuẩn bị hóa chất:

 Dung dịch NaOH:

Hịa tan 11 g NaOH trong nước tinh khiết đến 500 ml.

 Dung dịch CuSO4:

Hòa tan 5,4 g CuSO4 / H2O trong nước tinh khiết và định mức đến 500 ml. Đây là dung dịch gốc, nên pha loãng đến 500 lần khi được sử dụng.

 Dung dịch hydrazine sulfat:

Hòa tan 0,275 g hydrazin sulfat trong nước tinh khiết đến 500 ml.

(Nếu chúng ta khơng cần q nhiều, chỉ cần hịa tan 0,11 g hydrazine sulfat trong nước tinh khiết để tạo thành 200 ml.)

 Dung dịch axeton (20%):

Hòa tan 100 ml axeton trong 500 ml nước tinh khiết.

 Dung dịch sulphatlamide:

Hòa tan 5 g sulphanilamit trong dung dịch hỗn hợp gồm 50 ml HCl nồng độ cao và 300 ml nước tinh khiết. Sau đó, định mức đến 500 ml. (Nếu khơng cần nhiều thì chỉ cần chuẩn bị 200ml là được) y = 8.9375x - 0.0452 -2 0 2 4 6 8 10 12 0 0 . 2 0 . 4 0 . 6 0 . 8 1 1 . 2 MG /L ABS

Tên đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng của enzyme rác tới khả năng phân hủy rơm rạ trong đất nông nghiệp.

Sinh viên thực hiện: Trần Khánh Bảo Người hướng dẫn:TS. Đỗ Hồng Hạnh 20

 Dung dịch N- (1-naphtyl) -etylen:

Hòa tan 0,5 g N- (1-naphtyl) -etylen-etylen trong 500 ml nước tinh khiết. Nếu bạn không cần quá nhiều, chỉ cần chuẩn bị đủ thuốc thử cho thí nghiệm của bạn.

Bảng 2.3. Bảng xây dựng đường chuẩn của NO3- Standard ABS Ppm 1 0.008 0 2 0.139 0.2 3 0.332 0.4 4 0.608 0.6 5 0.768 0.8 6 1.073 1

Biểu đồ 2.2. Đường chuẩn của NO3-

Các bước tiến hành:

 Chuẩn bị dung dịch mẫu: 1ml mẫu + 4ml nước cất.  Thêm 1ml NaOH => Trộn đều

 Thêm 1ml CuSO4 => Trộn đều  Thêm 1ml Hydrazine => Trộn đều

 Đem đi đun trong bể ấm 38oC khoảng 30 phút.  Làm nguội bằng nước lạnh

 Thêm 1ml aceton (20%) => Trộn đều  Thêm 1ml sulphanilamide => Trộn đều

 Thêm 1 ml N-E (N – (1 – naphthyl) – ethyenediamine )=> Trộn đều

y = 0.9227x + 0.0497 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 0 0 . 2 0 . 4 0 . 6 0 . 8 1 1 . 2 PPM ABS

Tên đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng của enzyme rác tới khả năng phân hủy rơm rạ trong đất nông nghiệp.

Sinh viên thực hiện: Trần Khánh Bảo Người hướng dẫn:TS. Đỗ Hồng Hạnh 21

 Đo ở OD540

2.3.3. Phương pháp đo carbohydrate

Tổng hàm lượng carbohydrate được xác định bằng phương pháp Dubois (Albalasmeh và cộng sự, 2013; Dubois và cộng sự, 1956). Thêm 1 mL dung dịch đã chiết xuất vào ống nghiệm 15 mL với 1 mL phenol 50 g / L và 5 mL axit sulfuric 95%. Hỗn hợp được vortex mạnh và để yên trong 10 phút trước khi được đặt trong bể nước ấm trong 30 phút. Tổng hàm lượng carbohydrate của chúng được xác định bằng cách sử dụng độ hấp thụ ở bước sóng của mật độ quang (OD) 490 nm so với tiêu chuẩn carbohydrate, được thực hiện trong khoảng nồng độ 0,02 - 1,00 g / L.

Bảng 2.4. Bảng xây dựng đường chuẩn của carbohydrate

Biểu đồ 2.3. Biểu đồ đường chuẩn của carbohydrate

Các bước tiến hành:

 Hút 1ml dung dịch mẫu

 Thêm vào 1.5ml phenol 5% => Trộn đều  Hút 5ml H2SO4

 Chờ 10 phút => lắc đều rồi để 10-20 phút trong nước ấm 30oC

y = 117.9x + 0.2198 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 0 . 1 0 . 2 0 . 3 0 . 4 0 . 5 0 . 6 0 . 7 0 . 8 MG /L ABS Standard ABS mg/L 1 0 0 2 0.084 10 3 0.164 20 4 0.333 40 5 0.517 60 6 0.672 80

Tên đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng của enzyme rác tới khả năng phân hủy rơm rạ trong đất nông nghiệp.

Sinh viên thực hiện: Trần Khánh Bảo Người hướng dẫn:TS. Đỗ Hồng Hạnh 22

 Đo ở OD490