Thử nghiệm hoạt tính kháng vi sinh vật của tinh dầu tần dày lá:

Việc thử nghiệm được tiến hành theo phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch và đo đường kính vịng ức chế:

Tẩm tinh dầu pha loãng lên đĩa giấy có đường kính 6 mm đặt trên mặt thạch có vi khuẩn, tinh dầu sẽ nhanh chóng khuếch tán trên mơi trường thạch ức chế sự sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn, tạo vòng vơ khuẩn. Sau 24h đo đường kính vịng vơ khuẩn (d). Nếu d càng lớn tinh dầu có hoạt tính kháng khuẩn càng mạnh.

V.1. Chuẩn bị

Tinh dầu được pha ở những nồng độ khác nhau dựa vào biểu thức:

C  1 V

Trong đó: C: nồng độ tinh dầu (  l-1) V: độ pha loãng (  l)

C0 = 1 l 1 C1  1 1lC0  9lDMSO 10 1 l 1 C2  1 1lC1  9lDMSO  102 l 1 C3  1 1lC2  9lDMSO 103 l 1 C4  1 1lC3  9lDMSO  104 l 1

Các chủng vi khuẩn thử nghiệm là Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis và nấm men Candida albicans được tăng sinh và cấy trên môi trường chuyên biệt. subtilis và nấm men Candida albicans được tăng sinh và cấy trên môi trường chuyên biệt.



Nổng độ vi khuẩn: 1,0.106 cfu/ml

Tẩm đĩa giấy: Sau khi hồn ngun trong dung mơi, tẩm tinh dầu lên đĩa giấy vô khuẩn để

thu được các đĩa giấy có nồng độ thay đổi từ 1 l 1

đến 10-4 l 1

, để khơ ở nhiệt độ phịng và dùng ngay.

V.2. Thí nghiệm



Cấy lên đĩa thạch MH (Mueller Hinton): Dùng que gòn nhúng vào huyền dịch vi khuẩn, cấy phủ đầy mặt đĩa thạch theo 3 chiều.

Đặt đĩa cấy đã tẩm dịch trích: Dùng kẹp vô trùng đặt đĩa giấy lên mặt thạch (5 đĩa cho

một hộp thạch).

Ủ ở 37 o

C trong 24 giờ.

V.3. Đọc kết quả

Quan sát đường kính của vịng vơ khuẩn và đo đường kính của vịng vơ khuẩn:

Có hoạt tính kháng khuẩn: có vịng vơ khuẩn (đường kính vịng vơ khuẩn > 6 mm).  Khơng có hoạt tính: Khơng có vịng vơ khuẩn (đường kính vịng vơ khuẩn = 6 mm

hoặc <6 mm).

K

Hình 11: Kết quả thử hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu tần dày lá:

Bacillus Subtilis

Escherichia Coli

Staphylococcus aureus Candida albicans

Staphylococcus aureus 30 29 29 25 20

Escherichia. Coli 30 28 27 20 19

Bacillus Shubtilis 30 30 25 20 17

Candida albicans 30 30 25 24 20

Nồng độ (C) C0 C1 C2 C3 C4

Nhận xét: Tinh dầu tần dày lá có tác dụng diệt khuẩn đối với vi khuẩn: Staphylococcus

aureus, E. Coli, Bacillus Shubtilis và nấm Candida albicans với kích thước vịng kháng khuẩn như trên.