Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu, địa điểm nghiên cứu

Một phần của tài liệu Nghiên cứu tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ và chống trầm cảm của hương nhu tía (ocimum sanctum l ) trên thực nghiệm (Trang 51 - 54)

2.1.1. Dược liệu nghiên cứu

Dược liệu nghiên cứu là phần trên mặt đất của cây Hương nhu tía (Ocimum

sanctum L.) được thu hái tại Hà Nội, Việt Nam vào tháng 6/2016 (mùa hoa quả) và

được xác định tên khoa học bởi Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu. Mẫu dược liệu được sấy khơ và đo độ ẩm. Lưu mẫu tại Khoa Tài nguyên Dược liệu – Viện dược liệu (số tiêu bản: NIMM-16474B) (Phụ lục 1).

2.1.2. Động vật thí nghiệm

- Chuột nhắt trắng Swiss albino 7-8 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 28-30g

(với mơ hình chuột loại bỏ thùy khứu giác) và 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 23-25g (với mơ hình chuột gây stress nhẹ trường diễn khơng dự đốn trước), giống đực, khỏe mạnh được cung cấp bởi Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương.

- Chuột sau khi mua về được làm quen với phòng chăn nuơi ít nhất 1 tuần trước khi bắt đầu thí nghiệm, trong điều kiện nhiệt độ 25 ± 1oC, độ ẩm 65-75%, độ thơng khí và ánh sáng thích hợp, chu kì sáng tối được duy trì 12 giờ (pha sáng: 7:00 – 19:00), được nuơi bằng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp, thức ăn và nước uống tự do theo nhu cầu của chuột. Các thử nghiệm hành vi được tiến hành trong chu kỳ sáng từ 9:00 – 18:00.

- Tất cả các thí nghiệm đều được thực hiện theo Hướng dẫn Chăm sĩc và sử dụng Động vật (NIH xuất bản số 85–23, sửa đổi năm 1985) và đã được phê duyệt bởi Ủy ban Chăm sĩc và sử dụng động vật của Viện Dược liệu.

2.1.3. Hĩa chất, thuốc thử

Bảng 2.1. Một số hĩa chất, thuốc thử chính sử dụng trong luận án

STT Hĩa chất Nguồn gốc

1 Imipramin Sigma St.louis, MO, USA

2 Donepezil Tokyo C. Industry Co., Ltd, Japan

3 Acid ursolic (độ tinh khiết > 98%) Chengdu Biopurify Phytochemicals, Trung Quốc 4 Acid oleanolic (độ tinh khiết > 98%) Chengdu Biopurify

Phytochemicals, Trung Quốc 5 α-methyl-p-tyrosin (AMPT) Sigma St.louis, MO, USA 6 ρ-chlorophenylalanin (PCPA) Sigma St.louis, MO, USA 7 dimethyl sulfoxid (DMSO) Wako, Nhật Bản

8 acid 5,5´-dithiobis-2-nitrobenzoic Sigma, St. Louis, MO, USA 9 acetylthiocholin iodid Nacalai Tesque, Kyoto, Nhật Bản

10 Natri pentobarbital Wako, Nhật Bản

11 Dung dịch hoạt hĩa kháng nguyên (Target retrieval solution)

Dako, Nhật Bản

12 Kháng thể anti- DCX rabbit Abcam, Anh

13 Kháng thể gắn HRP anti-rabbit IgG Cell Signaling Technology, Mỹ 14 Kháng thể anti-ChAT goat Millipore, CA, USA

15 Kháng thể bovin anti-goat IgG Santa Cruz Bio. Inc., Dallas, TX 16 Kháng thể anti-VEGF rabbit Santa Cruz Bio. Inc., Dallas, TX 17 Kháng thể anti β-actin rabbit Thermo scientific

18 Target Retrieval Solution Dako, Japan

19 Sepazol Nacalai Tesque, Nhật Bản

20 Gel SDS-PAGE

21 Triton-X-100 Sigma, St. Louis, MO, USA

22 Các dung mơi chiết xuất đạt tiêu chuẩn cơng nghiệp

23 Các dung mơi, hệ đệm đạt tiêu chuẩn phân tích

24 Các hĩa chất, dung mơi khác đạt tiêu chuẩn dược dụng

2.1.4. Trang thiết bị, dụng cụ

Một số trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong luận án được trình bày ở Bảng 2.2.

Bảng 2.2. Một số trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong luận án

STT Thiết bị Nguồn gốc

1 Hệ thống định vị hộp sọ chuột Muromachi, Kilai Co., Ltd, Nhật Bản

2 Vật thể O1, O2, O3 Tự thiết kế theo cấu trúc của hãng Ugo Basile (Ý)

3 Mê lộ chữ Y cải tiến

4 Mệ lộ nước Morris Tự thiết kế

5 Bể nước hình trụ Tự thiết kế

6 Thanh treo đuơi chuột Tự thiết kế

7 Mơi trường mở Plexiglas gắn tế bào quang điện Digiscan

Omnitech Electronics, Columbus, OH

8 Phần mềm phân tích kết quả ANY MAZE, Stoeling, Mỹ

9 Phần mềm Image J phiên bản 1.41; NIH, MD,

USA

10 Hệ thống StepOne Real-time PCR System® Applied BioSystem, USA

11 Tủ âm 80oC Sanyo Nhật Bản

12 Máy đọc ELISA Thermo Labsystem Thermo, Đức

13 Kính hiển vi Olympus PROVIS® Olympus Inc., Tokyo, Nhật Bản

14 Máy Amersham ™ ECL ™ Prime GE Healthcare,

Buckinghamshire, UK

15 Máy quang phổ UV-VIS HumaReader HS; Human

Diagnostics, Wiesbaden, Đức

16 Bộ điện di omniPAGE Cleaver Scientific – Anh

17 Bộ chuyển màng Cleaver Scientific – Anh

18 Máy li tâm lạnh Satorius

19 Thiết bị nghiền đồng thể IKA

STT Thiết bị Nguồn gốc

21 Cân phân tích Precisab XT 220A, độ chính xác 0,0001g.

Precisa – Thụy Sĩ

22 Máy cắt tiêu bản chuyên dụng Nhật Bản

23 Màng PVDF Bio-rad, CA, Hoa Kỳ

24 Giấy lọc Whatnam® qualitative filter paper, Grade 93, 580×580 cm

Merck, Darmstadt, Germany

25 Các máy mĩc, dụng cụ khác: dụng cụ thủy tinh, micropipet tự động, lam kính, kim tiêm các cỡ…

2.1.5. Địa điểm nghiên cứu

- Khoa Dược lý – Sinh hĩa, Viện Dược liệu.

Một phần của tài liệu Nghiên cứu tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ và chống trầm cảm của hương nhu tía (ocimum sanctum l ) trên thực nghiệm (Trang 51 - 54)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(179 trang)