Phân tử KT IgG nguyên vẹn có mảnh Fc, là nguyên nhân của các phản ứng không mong muốn trên lâm sàng, nhất là shock phản vệ. Fc mang thụ thể gắn các tế bào mastocyte, bạch cầu ưa kiềm...là kho chứa các chất trung gian hóa học histamin, serotonin, bradykinin... gây phản vệ, loại phản ứng nguy hiểm nhất trong kháng huyết thanh trị liệu. Chúng tôi sử dụng Pepsin để cắt bỏ Fc, giữ lại phần F(ab’)2. Tỷ lệ thu lại huyết tương giàu F(ab’)2 với 2 lần tinh chế là 80,4% (bảng 3.12). Như vậy, ~ 20% lượng tủa của huyết tương chứa các thành phần không có KT và F(ab’)2 . Đây là sự cần thiết đầu tiên cho tinh sạch sản phẩm. Tủa ammonium sulfate có lợi điểm: giữ được nguyên tính chất của các phân tử KT, F(ab’)2, song hiệu xuất thu lại KT kém hơn so với các kỹ thuật tinh chế khác như sắc ký trao đổi ion (Ion-exchange chromatography) và sắc ký ái lực (Affinity chromatography). Ammonium sulfate có khả năng hòa tan rất cao tới nồng độ 4M, trong khi ở nồng độ 3,2M, hầu hết các loại protein đều đã bị tủa. Chỉ sau 30-60 phút hòa tan ammonium sulfate theo từng nồng độ chọn lọc, toàn bộ protein tương ứng đã bị tủa. Khi tái hòa tan hạt protein kết tủa trong đệm mới, cấu trúc phân tử và hoạt tính sinh học của protein vẫn được giữ nguyên. Một số muối cùng tủa theo protein, được loại bỏ bằng thẩm tích. Như vậy, dung dịch protein thành phẩm (thí dụ: HTKNR) vừa tinh sạch
vừa được cô đặc, nhưng vẫn giữ nguyên được chức năng sinh học của KT. Tất nhiên, ngoài nồng độ và tính chất của ammonium sulfate ra, tủa protein còn phụ thuộc vào pH và nhiệt độ của dung môi. Ở pH = 4,2 và nhiệt độ 20oC, với nồng độ ammonium sulfate = 14%, mọi thành phần protein không phải KT, kể cả Fc và lipid đều bị tủa, được loại bỏ bằng giấy lọc Whatman; dịch lọc chứa F(ab')2 được thu lại.