Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.5. Các phương pháp chẩn đoán vi sinh
1.5.1. Phương pháp không nuôi cấy
- Kỹ thuật sử dụng kính hiển vi (huỳnh quang, điện tử)
- Các kỹ thuật sử dụng phương pháp miễn dịch
- Các kỹ thuật sinh học phân tử để xác định các gen đặc thù của các vi khuẩn nói riêng hoặc vi sinh vật nói chung.
* Kỹ thuật phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain Reaction-PCR)
Kỹ thuật phản ứng chuỗi trùng hợp là một kỹ thuật sinh học phân tử, được áp dụng ngày càng nhiều trong việc phát hiện sự có mặt của một số loài vi khuẩn gây bệnh trong răng miệng. Dựa vào sự nhân lên của đoạn DNA đích đặc hiệu, kỹ thuật này rất nhanh, đơn giản và có thể cho kết quả dương tính ngay cả khi trong mẫu chỉ có một lượng vi khuẩn rất nhỏ hoặc khi vi khuẩn đã chết. Các kỹ thuật Real- time PCR hiện đại còn cho phép định lượng được các vi khuẩn, xác định được tỷ lệ các vi khuẩn gây bệnh trong mẫu bệnh phẩm. Tuy vậy, kỹ thuật này cũng có hạn chế như chi phí cao và chỉ đánh giá được số lượng vi khuẩn nói chung chứ không xác định được vi khuẩn sống hay vi khuẩn chết. Tuy nhiên, có thể so sánh số lượng vi khuẩn trước và sau điều trị. Vì về nguyên tắc, việc điều trị tủy bao gồm việc nong dũa, tạo hình
ống tủy và bơm rửa, như vậy cũng sẽ làm giảm số lượng. Việc đặt thuốc sẽ làm vi khuẩn chết và cũng làm giảm số lượng. Do vậy, đánh giá việc giảm số lượng vi khuẩn là rất quan trọng.
Thường thì, khi số lượng vi khuẩn nói chung giảm, thì các lồi cũng giảm theo.
PCR cũng cho phép xác định sự có mặt của một gen liên quan đến sự kháng thuốc của vi khuẩn. Ngoài ra, sử dụng một số cặp mồi đặc hiệu có khả năng khuếch đại một vùng gen đặc trưng của một loại vi sinh vật nào đó như nấm, vi khuẩn, vi rút,... Người ta có thể xác định căn nguyên gây bệnh trong một loại bệnh phẩm nào đó. Trong một số trường hợp, bằng việc giải trình tự một đoạn nucleotide, sau đó so sánh trình tự này với các trình tự sẵn có trên ngân hàng gen, người ta có thể biết rằng đoạn nucleotide đó là của một vi khuẩn nào đó đã được nghiên cứu hoặc là một vi khuẩn mà người ta chưa được biết [31].