❖ Thử nghiệm Oxidase: nhỏ 1 giọt nước muối sinh lý lên nắp của bảng nhựa, dùng kẹp lấy đĩa giấy Oxidase đặt vào giọt nước muối sinh lý vừa nhỏ. Dùng vịng cấy vơ trùng lấy khúm khuẩn trong ống nghiệm chứa vsv được nuôi cấy trên PCA đã được chuẩn bị trước, quệt khúm khuẩn lên đĩa giấy Oxidase. Quan sát kết quả:
TIEU LUAN MOI download :skknchat123@gmail.com skknchat123@gmail.com
❖ Thử nghiệm trên môi trường di động: mở nắp lọ và dùng kim cấy vô trùng lấy khúm khuẩn và cắm thẳng đứng vào môi trường di động, cách 1/3 đáy lọ và rút
kim theo chiều thẳng đứng. Vặn nắp lọ, đem đi ủ ở 37ºC trong 16 giờ.
❖ Thử nghiệm bảng nhựa: đổ nước muối sinh lý vô trùng vào ống nghiệm chứa vsv nuôi cấy trên PCA, lắc đều để làm thành huyền dịch có độ đục tương đương với độ đục chuẩn McFarland 0,5 – 2,0. Dùng micropipet lấy 100μL huyền dịch cho vào các giếng trên bảng nhựa. Thêm 1 giọt parafilm vào giếng số 1, giếng số 4 và giếng số 12 (parafilm cho vào để tạo mơi trường kị khí). Đậy nắp lại và ni ủ ở 37ºC trong 16 giờ.
Sau khi nuôi ủ 16 giờ (từ 17h30 đến 9h30 ngày hôm sau), đọc kết quả ở các giếng 1, 3, 4, 6, 7, 8, 11, 12. Thêm 1 giọt KOH và α-Napthtol vào giếng số 10. Thêm 1 giọt Nitrite vào giếng số 2, 1 giọt FeCl3vào giếng số 5, 1 giọt Kovac vào giếng số
TIEU LUAN MOI download :skknchat123@gmail.com skknchat123@gmail.com
TIEU LUAN MOI download :skknchat123@gmail.com skknchat123@gmail.com
❖ Thử nghiệm Oxidase: đĩa giấy không đổi màu (-)
❖ Thử nghiệm Motility: mơi trường có màu đỏ lan khỏi đường cấy
❖ Bảng nhựa: Giếng 1 2 3 4 5 6 Hiện tượng Dd có màu vàng Dd có màu đỏ Dd có màu vàng nhạt Dd có màu cam nhạt Dd khơng đổi màu (vàng nhạt) Dd có màu xanh lá Giếng 7 8 9 10 11 12
TIEU LUAN MOI download :skknchat123@gmail.com skknchat123@gmail.com Hiện tượng Dd không đổi màu Dd khơng đổi màu Xuất hiện vịng trịn màu đỏ trên bề mặt Dd khơng đổi màu Dd có màu vàng Dd có màu tím
TIEU LUAN MOI download :skknchat123@gmail.com skknchat123@gmail.com
5.5. 5. 5.
5. Kết luận & Giải thích
Định tính Salmonella: dù phân lập lạc khuẩn không thành công nên không thể quan sát được lạc khuẩn Salmonella nhưng vẫn quan sát thấy những vùng môi trường bị chuyển sang màu hồng (Salmonella trên XLD lạc khuẩn sẽ có màu hồng, có hoặc khơng có tâm màu đen, mơi trường xung quanh sẽ đổi màu sang màu hồng). Kết luận rằng nghi ngờ có Salmonella trong mẫu rau má khơng đá có đường.
Định danh vi sinh vật nuôi cấy trên môi trường PCA bằng NKIDS 14 GNR:
- Thử nghiệm Motility (+): Triphenyltetrazolium chloride trong mơi trường bị tế bào vsv khử thành formazan có màu đỏ.
- Thử nghiệm trên đĩa giấy Oxidase (−¿): vsv không tạo ra men cytochrome
oxidases nên khơng xảy ra phản ứng oxi hóa với TMPD tạo ra indophenol (màu xanh đen)
- Giếng số 1 (GLU) (+): vsv lên men đường glucose, tạo sản phẩm có tính acid, làm đổi màu chất chỉ thị màu bramothymol blue thành màu vàng
- Giếng số 2 (NIT) (+): vsv khử nitrate (NO3־) thành nitrit (NO2-), tác dụng với acid sulphailamine và N-naphthylenediamin hydrochloride có trong giếng tạo thành muối diazo có màu hồng đỏ.
- Giếng số 3 (ONPG) (+): vsv thủy phân cơ chất o-nitrophenyl-D- galactosepyranoside (ONPG) bởi enzyme β-galactosidase có trong tế bào, phóng thích o-nitrophenyl có màu vàng