CHƯƠNG II : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2 Vật liệu nghiên cứu
2.2.3 Các loại môi trường:
Môi trường Potato Dextrose Agar – PDA Môi trường Potato Dextrose Broth – PDB
2.3 Phương pháp nghiên cứu
37
Sơ đồ bố trí thí nghiệm
❖ Thuyết minh quy trình
Các chủng nấm Trichoderma có trong bộ sưu tập giống của Viện khoa học ứng
dụng được chọn ra để tiến hành đề tài. Các chủng nấm này sẽ cấy lên đĩa petri nhằm mục đích hoạt hóa giống và được sử du ̣ng trong q trình nghiên cứu. Mơi trường sinh viên thực hiện để cấy nấm là môi trường PDA. Sau khi cấy ủ nấm ở nhiệt độ phòng trong vòng 5 ngày để nấm mọc, tạo thành sợi nấm và bào tử. Sau đó các chủng nấm này được sử dụng để quan sát hình thái sợi nấm, đặc điểm sinh trưởng và tăng sinh trên môi trường PDB để thực hiện quá trình tách chiết hợp chất kháng nấm. Quá trình tách chiết hợp chất peptaibol được tiến hành bằng cách tăng sinh khối nấm trên PDB trong 5 ngày tiếp theo lọc tiếp tuyến để loại bỏ sinh khối sau đó bổ sung butanol để trong 48 giờ cuối cùng cô quay chân không thu dịch chiết peptaibol thô. Hợp chất peptaibol sau khi thu một phần
Ống giống
Quan sát hình thái Khảo sát đặc điểm sinh trưởng
Tách chiết hợp chất peptaibol thô
Thu hợp chất peptaibol thô
Xác định cấu trúc peptaibol
Xác định cấu trúc peptaibol
Khảo sát khả năng đối kháng nấm bệnh
Xác định cấu trúc peptaibol
Chủng nấm Trichoderma sau 5 ngày trên PDA
ấm bệnh Hoạt hóa
38
sẽ tiến hành tinh sạch bằng methanol và chloroform để xác định cấu trúc peptaibol, phần còn lại sẽ tiến hành khảo sát khả năng đối kháng nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum trong điều kiện invitro.