a: lá cây đối chứng; b: lá cây chuyển gen
3.11.2.5. Kiểm tra sự di truyền của gen biến nạp
Trong 9 dòng đậu tƣơng chuyển gen đƣợc kiểm tra bằng PCR trồng trong vƣờn ƣơm, chỉ 5 dịng có khả năng thích nghi, phát triển. Các dịng này cũng biểu hiện tính kháng với thuốc diệt cỏ Basta (100 mg/l glufosinate) và có sự hiện hiện các băng lai đặc hiệu trong thí nghiệm Southern blot với probe là đoạn gen cbfd2.
Trong các dòng này, chỉ 2 dịng (D2, D8) có sự tạo hoa, trái, hình thành hạt (hình 3.28), 3 dịng cịn lại (D3, D5, D9) khơng tạo trái, mà sau một thời gian phát triển lá vàng, rụng, cây chết dần. Một số nghiên cứu chuyển gen trên đậu tƣơng cũng ghi nhận nhiều cây chuyển gen khi trồng trong vƣờn ƣơm không thể tạo hạt [130] [181]. Nguyên nhân có thể do rễ những dịng chuyển gen này kém phát triển ảnh hƣởng đến sự sinh trƣởng, phát triển chung, ngồi ra vị trí gắn chèn của gen biến nạp cũng có thể gây ảnh hƣởng đến khả năng sống của giao tử [181][182].
Sau khoảng 4 tháng phát triển trong vƣờn ƣơm, trái của 2 dòng D2 và D8 đến giai đoạn chín, vỏ trái khơ, màu vàng. Dòng D2 thu đƣợc hai trái, mỗi trái 1 hạt, gồm 1 hạt màu đỏ (D2-1) và 1 hạt màu trắng (D2-2). Dòng D8 thu đƣợc 1 trái hai hạt, gồm 1 hạt đỏ (D8-1) và 1 hạt trắng (D8-2). Màu đỏ của các hạt thể hiện đậm và rõ ở phần rễ mầm, nhạt hơn ở phần phơi nhũ (hình 3.29). Nghiên cứu chuyển gen tạo astaxanthin trên nhiều cây khác nhau cho thấy sự tích lũy astaxanthin trên các bộ phận của cây chuyển gen dẫn đến màu của các bộ phận này chuyển sang đỏ nhƣ ở thuốc lá, táo, ngô, cà chua,… [7][31][60][62].
Bốn hạt của hai dòng D2 và D8 đƣợc gieo trồng trong vƣờn ƣơm để kiểm tra khả năng nảy mầm, sinh trƣởng, phát triển của cây so với đối chứng. Trƣớc tiên, các hạt chuyển gen và đối chứng đƣợc gieo nảy mầm trong đĩa petri có giấy thấm nƣớc, ủ trong tối 4 ngày đến khi phần rễ mầm phát triển tốt. Sau đó, cây mầm đƣợc trồng trong chậu đất ở vƣờn ƣơm.