gan. HIV dương tính và số lượng CD4 thấp làm tăng tốc độ xơ hóa gan trong nhiễm HCV [19] [41]. Ngược lại, HCV làm tăng tiến triển từ nhiễm HIV đến hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải (AIDS) [29]
. Theo nghiên cứu của tác giả Nguyễn Thị Tuyết Vân, cho thấy trong 369 trường hợp nhiễm viêm gan vi rút C, tỷ lệ đồng nhiễm HIV với HCV là 20,9% [13]
.
Các nghiên cứu khác ở Tây Âu và Mỹ cho thấy đồng nhiễm HCV/HIV chiếm tỷ lệ từ 25 đến 30% [33]. Tuy nhiên, tỷ lệ đồng nhiễm có thể thay đổi phụ thuộc vào nhóm đối tượng nghiên cứu cũng như các thời điểm nghiên cứu. Tỷ lệ đồng nhiễm HCV/HIV thường cao trong nhóm đối tượng tiêm chích ma túy.
3.1.5. Tải lƣợng vi rút HCV
Bảng 3.3. Đặc điểm về tải lƣợng vi rút của mẫu nghiên cứu
Tải lƣợng vi rút (bản sao/mL)
10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 Tổng
n 16 13 30 32 17 108
% 15 12 28 29 16 100
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng kỹ thuật Cobas AmpliPrep/COBAS TaqMan, khuếch đại axít nucleic trong huyết thanh bằng cách sử dụng thiết bị COBAS AmpliPrep xử lý mẫu tự động và COBAS TaqMan để tự động khuếch đại và phát hiện, nhờ đó định lượng RNA của vi rút viêm gan C trong máu. Đây là kỹ thuật PCR theo thời gian thực có độ đặc hiệu cao (99,6%) và khoảng dao động rộng giúp phát hiện và định lượng HCV RNA. Ngưỡng phát hiện 38- 172.500.000 bản sao/mL [43].
Trong nghiên cứu của chúng tôi, là mẫu máu các bệnh nhân đã được xác định kiểu gen HCV thành công, tải lượng vi rút viêm gan C trong máu dao động từ
103 đến 107 bản sao/mL, trong đó có 32 mẫu có tải lượng vi rút là 106 bản sao/mL, chiếm 29%. (Bảng 3.3.)
3.2. Phân bố kiểu gen của HCV ở bệnh nhân đến khám và điều trị tại BVBNĐTƢ BVBNĐTƢ
3.2.1. Lý do lựa chọn kỹ thuật sequencing tại khu vực core để xác định kiểu gen và kiểu gen phụ của HCV gen và kiểu gen phụ của HCV
Xác định chính xác tác nhân HCV là mục tiêu quan tâm hàng đầu của các bác sĩ, từ đó tiến hành điều trị, theo dõi diễn tiến và biến chứng của bệnh cũng như phòng ngừa sự lây truyền của vi rút viêm gan C. Hiện nay tại Việt nam phổ biến 3 kỹ thuật xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C là real time PCR, LiPA và sequencing.
Việc xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C bằng kỹ thuật LiPA được tiến hành ở nhiều phịng thí nghiệm PCR do dễ thực hiện, khơng địi hỏi máy móc, trang thiết bị và kỹ thuật cao. Tuy nhiên kỹ thuật này lại kém hiệu quả trong việc phân biệt các kiểu gen 1b và 1a, 2a và 2c, giữa 4a, 4c và 4d bởi kỹ thuật này sử dụng đoạn 5’-UTR. Gần đây, LiPA đã được cải tiến nâng hiệu suất bằng cách khuếch đại đồng thời cả khu vực core nhằm giảm thiểu các nhược điểm trước đây [18]
.
Xác định kiểu gen bằng kỹ thuật Real time PCR có giá thành rẻ hơn 9 lần so với kỹ thuật LiPA [50], tuy nhiên kỹ thuật này chỉ sử dụng đoạn trình tự ngắn cho mồi và mẫu dị, dẫn đến có thể nhầm lẫn trong xác định kiểu gen 1 và một vài kiểu gen phụ của kiểu gen 6. Nghiên cứu của tác giả Stephane Chevaliez và cs cho biết có 10% trường hợp xác định sai genopype 1 khi sử dụng kỹ thuật Real time PCR [49].
Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng kỹ thuật sequencing để xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C. Kỹ thuật sequencing tuy địi hỏi các máy móc trang thiết bị hiện đại và điều kiện kỹ thuật cao nhưng lại xác định được kiểu gen cụ thể, có ý nghĩa trong nghiên cứu sự biến đổi vùng gen mà kỹ thuật LiPA không thực
hiện được. Tính ưu việt của kỹ thuật sequencing trong việc xác định kiểu gen là sự chính xác [4][49]
.
Do mức độ bảo tồn cao giữa các phân nhóm khác nhau, một số cơ sở y tế hiện nay sử dụng kỹ thuật sequencing dựa vào vùng chưa được dịch mã - 5’UTR để xác định kiểu gen của vi rút viêm gan C. Tuy nhiên nếu dựa vào trình tự vùng 5’UTR, các phân nhóm có liên quan chặt chẽ trong cùng một kiểu gen sẽ không được phân biệt rõ ràng và đầy đủ [26]. Theo nghiên cứu của Stephane Chevaliez và cs, khi giải trình tự gen vùng 5’UTR, khoảng 22,8% - 29,5% trường hợp không xác định được chính xác kiểu gen phụ 1a, đối với kiểu gen phụ 1b là 9,5% - 8,7% trường hợp [49]
.
Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng, trình tự của một vùng mã hóa thích hợp, như 5B khu vực nonstructural (NS5B), core, hay E1 là tiêu chuẩn vàng xác định các loại vi rút viêm gan C và phân nhóm [37] [47]. Chính vì vậy, trong nghiên cứu này, chúng tơi lựa chọn giải trình tự gen tại khu vực core - khu vực bảo tồn dài nhất, với cặp mồi Sc2, Ac2, S7, A5 (Bảng 2.1). Kỹ thuật này tuy mất thời gian và thường đòi hỏi một số bước xử lý mẫu trước khi tiến hành, nhưng thu được kết quả chính xác và đáng tin cậy. Nhược điểm của kỹ thuật này, khi sử dụng mỗi cặp mồi ở một lần tiến hành chỉ cho được kết quả một kiểu gen duy nhất, chính vì vậy khơng xác định được các trường hợp đồng nhiễm kiểu gen. Muốn xác định đồng nhiễm kiểu gen, chúng ta cần làm thêm giải trình tự gen trên khu vực khác nữa NS3 hoặc NS5B. Do kinh phí hạn hẹp, trong nghiên cứu này chúng tơi chỉ sử dụng một cặp mồi, vì vậy khơng xác định được đồng nhiễm kiểu gen HCV trên một bệnh nhân. Đây cũng chính là hạn chế của nghiên cứu này.
3.2.2. Phân bố kiểu gen của HCV
Trong nghiên cứu của chúng tôi, kiểu gen HCV 1 chiếm đa số với tỷ lệ 57,41%, kiểu gen HCV 6 chiếm 39,81%, còn lại là kiểu gen HCV 3 chiếm 2,78%. (Biểu đồ 3.3). Khi nghiên cứu về kiểu gen vi rút viêm gan C ở khu vực Hà nội, tác giả Nguyễn Nghiêm Luật và cs đã xác định được 3 kiểu gen, đó là các kiểu gen 1, 2
và 6 với tỷ lệ kiểu gen HCV 1 là 68,57%, kiểu gen HCV 2 là 5,88% và kiểu gen HCV 6 là 25,71% [9]
. So với các kiểu gen đã được công bố ở khu vực miền Bắc trong nghiên cứu của Học viện Quân Y 108 năm 2007 kiểu gen HCV 1 chiếm ưu thế với tỷ lệ 65,33%, tiếp theo là kiểu gen HCV 6 với 18,67%. Kiểu gen HCV 2 chiếm 6,67%. Ngoài ra trong nghiên cứu này còn xác định thêm kiểu gen HCV 7 (8%) và kiểu gen HCV 8 (1,33%) [9]. Tuy nhiên theo phân loại kiểu gen mới, kiểu gen HCV từ 7 đến 11 được xác định là các biến thể của kiểu gen HCV 3 (kiểu gen 10a) và kiểu gen HCV 6a (kiểu gen 7, 8, 9, 11) và đã được phân loại là kiểu gen phụ của kiểu gen HCV 3 và kiểu gen HCV 6 [32].
Nghiên cứu khác ở khu vực miền nam của công ty Nam Khoa cũng cho kết quả tương tự với kiểu gen HCV 1 chiếm ưu thế với 71,02%, kiểu gen HCV 6 chiếm 18,62% và kiểu gen HCV 2 chiếm 10,31%. Ở nghiên cứu của công ty Nam khoa, tỷ lệ kiểu gen 3 chiếm 0,05% và kiểu gen HCV 4 chiếm 0,05% [9]. Nghiên cứu của tác giả Hồ Tấn Đạt và cs xác định được 3 kiểu gen chính là 1, 6 và 2, trong đó kiểu gen HCV 1 chiếm 58,4%, kiểu gen HCV 6 chiếm 23,9%, kiểu gen HCV 2 chiếm 13,1% và chỉ có duy nhất 1 trường hợp có kiểu gen HCV 3 (0,3%). Có 4,3% trường hợp khơng xác định được kiểu gen [4].
39,81% 57,41%
2,78%
Type 1 Type 3 Type 6