3.1.1 .Chuẩn bị thƣ viện
3.2. Kết quả tách dòng aptamer liên kết đặc hiệu E.coli O157:H7
3.2.3. Kết quả biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào E.coli DH5α
Vi khuẩn E. Coli DH5α sau khi đƣợc xử lý bằng CaCl2 giúp màng tế bào trở nên xốp, giúp cho vector pCR2.1 (đã gắn sản phẩm PCR) có thể xâm nhập vào tế bào một cách dễ dàng hơn. Giai đoạn sốc nhiệt kế tiếp (420
C trong 60 giây) nhằm kích thích sự biến nạp plasmid vào trong tế bào. Sau đó tế bào đƣợc cấy trải lên mơi trƣờng dƣỡng chất, giúp cho tế bào hồi phục, nhờ sự trợ giúp của bộ máy tổng hợp trong tế bào mà plasmid tiến hành sao mã, phiên mã và dịch mã tạo nên các protein tƣơng ứng. Gen kháng kháng sinh đƣợc chọn làm dấu hiệu chọn lọc để phân biệt những tế bào có tiếp nhận DNA plasmid trong số những tế bào không tiếp nhận. Tồn bộ q trình tiến hành thực hiện nhƣ đã trình bày trong mục 2.2.7. Kết quả biến nạp đƣợc thể hiện ở hình 3.10.
Hình 3.10: Kết quả biến nạp vector pCR2.1 (đã gắn sản phẩm PCR)vào tế bào E. coli DH5α
Trong môi trƣờng chọn lọc bằng kháng sinh nhƣ trên có thể xảy ra 3 trƣờng hợp:
Trƣờng hợp 1: Tế bào vi khuẩn không nhận plasmid tái tổ hợp nên không sinh trƣởng đƣợc.
Trƣờng hợp 2: Tế bào vi khuẩn nhận plasmid nhƣng không biểu hiện gen kháng kháng sinh nên không sinh trƣởng đƣợc.
Trƣờng hợp 3: Tế bào vi khuẩn nhận đƣợc plasmid tái tổ hợp và biểu hiện gen kháng kháng sinh nên sinh trƣởng đƣợc.
Chỉ những tế bào nhận vector tái tổ hợp (đã gắn sản phẩm PCR) mới có thể sinh trƣởng đƣợc trên mơi trƣờng chọn lọc bằng kháng sinh, do plasmid có chứa và
biểu hiện gen kháng kháng sinh. Chúng tơi tiến hành chọn dịng tế bào mang vector tái tổ hợp chứa aptamer đích bằng phƣơng pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc. Kết quả chúng tôi chọn đƣợc 8 khuẩn lạc chứa vector tái tổ hợp mang aptamer đích (hình 3.11).
Hình 3.11: Kết quả PCR trực tiếp từ khuẩn lạc với cặp mồi ApF2/ApR2
Giếng 1 – 8: Sản phẩm PCR với cặp mồi ApF2/ApR2 từ các khuẩn lạc số 1-8
tương ứng
GiếngM: Thang DNA 100 bp