CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN GẮN KHÁNG THỂ LÊN
3.1.1. Kiểm tra sự có mặt của kháng thể kháng lao
Dot blot là một phƣơng pháp để phát hiện, phân tích và xác định protein. Dot blot cũng giống nhƣ phƣơng pháp Western blot nhƣng khác ở chỗ rằng mẫu protein không đƣợc phân tách trên gel bởi điện di mà thay vào đó mẫu protein đƣợc phát hiện trực tiếp thông qua sự xuất hiện của những vết đốm trịn trên bề mặt của màng lai [39].
Chính vì vậy, sau khi nhận đƣợc kháng thể từ hãng Abcam (Mỹ), chúng tôi đã sử dụng phƣơng pháp Dot blot để kiểm tra sự có mặt của kháng thể kháng lao nhờ sự có mặt của kháng nguyên bề mặt của vi khuẩn lao có trong mẫu vaccine BCG. Mẫu vaccine BCG đƣợc pha thành nhiều nồng độ khác nhau trƣớc khi tiến hành thí nghiệm. Đối chứng dƣơng đƣợc sử dụng là kháng thể sơ cấp và dùng đệm PBS 1x pH 7,4 làm đối chứng âm.
Hình 3.1. Kết quả kiểm tra sự có mặt của kháng thể kháng lao
Ô 1 : Đối chứng dương, Ô 2 : Mẫu vaccine BCG khơng pha lỗng Ơ 10 : Đối chứng âm (khơng có vaccine BCG)
Ơ 3 – 9 : Mẫu vaccine BCG được pha loãng thành các nồng độ khác nhau tương tứng từ 1:2, 1:5, 1:10, 1:20, 1:50, 1:100, 1:200.
Kết quả Dot blot ở hình 3.1 đã khẳng định sự có mặt của kháng thể kháng lao, tuy nhiên mức độ biểu hiện tùy thuộc vào nồng độ BCG đƣợc sử dụng. Ở ô 2 tƣơng ứng với mẫu vaccine BCG khơng pha lỗng độ đậm của vết chấm rất rõ nét, mặc dù độ đậm không bằng đối chứng dƣơng ở ô 1. Mức độ đậm của vết chấm giảm dần từ ô 3 đến ô 6 tƣơng ứng với nồng độ pha lỗng từ 1:2 đến 1:20 và đến ơ thứ 7 tƣơng ứng với nồng độ pha lỗng 1:50 thì gần nhƣ khơng xuất hiện màu của phản ứng trên vết chấm và hai ơ cịn lại là ơ 8 và ô 9 tƣơng ứng với nồng độ pha lỗng 1:100 và 1:200 thì khơng xuất hiện màu của phản ứng, hai ô này kết quả gần nhƣ với mẫu đối chứng âm ở ô thứ 10. Và để khẳng định một lần nữa phân tích trên có độ tin cậy cao, chúng tơi sử dụng phần mềm Image J – một phần mềm phân tích độ sáng của hình ảnh để phân tích vết đốm trịn trên hình 3.1.
Bảng 3.1. Kết quả phân tích độ sáng của vết đốm trịn trên màng lai
Số ô 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Pha loãng Đối chứng dƣơng Khơng pha lỗng 1:2 1:5 1:10 1:20 1:50 1:100 1:200 Đối chứng âm Mức độ sáng so với ĐC dƣơng 100% 44,22% 37,28 % 25,9 9% 5,6 % 2,4% 0,5% 0% 0% 0%
Kết quả phân tích bằng phần mềm Image J rất phù hợp với những nhận xét ở trên. Độ sáng của các vết đốm tròn từ những tỷ lệ BCG khác nhau cũng giảm dần từ nồng độ cao xuống nồng độ thấp. Từ những phân tích trên cho phép chúng tơi kết luận là kháng thể kháng lao đƣợc cung cấp từ hãng Abcam (Mỹ) rất phù hợp với nghiên cứu này, kháng thể kháng lao có mặt đặc hiệu với mẫu nghiên cứu.