CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN
1.3. Tổng quan về phương pháp phân tích Dioxin trong mẫu sữa
1.3.2. Phương pháp làm sạch
- Cột tự nhồi:
Dịch chiết được làm sạch qua hệ cột tự nhồi gổm cột Silica đa lớp, cột Nhơm oxit và cột Cacbon hoạt tính. Cột silicagel đa lớp được nhồi các chất sau: 1 g SiO2, 4 g SiO2/KOH, 1 g SiO2, 8 g H2SO4/SiO2, 2 g SiO2, 4 g Na2SO4theo thứ tự từ trên xuống, rửa giải bằng hỗn hợp dung môi metylen clorua/hexan (1:1 v/v). Cột oxit nhôm bazo được nhồi với 6 g Al2O3, rửa giải bằng hỗn hợp hexan/metylen clorua (2/1 v/v). Cột Cacbon được nhồi bằng 0,55 g hỗn hợp сагbорас/Сеlitе 545, rửa giải bằng hexan, và metylen clorua/metanol/toluen (15:4:1 v/v/v) và toluen theo hướng ngược lại. [38]
- Làm sạch trên hệ cột Supelco
Dịch chiết mẫu sau khi chiết được cơ làm giàu về thể tích nhỏ hơn (khoảng 5 mL) được làm sạch trên hệ cột gồm cột Silica đa lớp ghép nối cột than hoạt tính đã hoạt hóa bằng dung mơi. Sau khi mẫu được chuyển lên cột Silicagel, tiến hành rửa cột với 100 mL Hexan và dung môi qua cột được hứng thải, cột Silica gel được tháo bỏ và tiến hành rửa cột Cacbon đảo chiều với 100 mL Toluen để thu chất phân tích.[40]
- Làm sạch trên hệ làm sạch tự động
Dịch chiết mẫu được làm sạch trên hệ gồm ba cột nhồi sẵn: cột silica đa lớp loại to (28 g silica axit, 16 g silica bazo và 6 g silica trung tính) và nhỏ (4g silica
axit, 2 g silica bazo và 1g silica trung tính), cột nhơm bazo (8 g) và cột Cacbon (2 g). Chất phân tích được rửa giải bằng 60 mL Toluen. Dịch làm sạch được cô về thể tích 150 µL, sau đó chuyển sang vial có sẵn 4 µL Nonan, chuẩn bị bơm trên thiết bị phân tích.[22]
- Làm sạch qua sắc kí thẩm thấu gel (GPC-Gel Permeable Chromatography), cột Nhôm oxit và cột Cacbon (PGC-Porous graphitised carbon) [31]
Khoảng 3 g mỡ được hòa tan trong 15 mL hỗn hợp dung môi etyl acetat/cyclohexan (tỉ lệ 1/1 theo thể tích) và được tiến hành làm sạch qua hệ sắc kí thẩm thấu gel gồm một cổng bơm tự động có thể bơm được 12,5 mL mẫu và một bộ thu mẫu sử dụng các bình cầu 500 mL. Cột GPC thủy tinh (60 cm x 2,5 cm I.D) được nhồi với BioBeads-SX3 và trang bị van điều chỉnh.
Một lượng mẫu có thể tích 12,5 mL (tương đương với 5/6 lượng mỡ) được bơm vào cột và tiến hành rửa giải bằng hỗn hợp dung môi etyl acetat/cyclohexan với tốc độ 1 mL/phút trong suốt q trình bơm mẫu. Sau khi hồn thành bơm mẫu, tốc độ rửa giải được tăng lên 5 mL/phút, phân đoạn làm sạch mẫu được thu ở thời gian 51 phút. 50 µL dodecan được thêm vào mẫu và tiến hành cơ đuổi dung mơi về thể tích khoảng 1 mL. Toàn bộ lượng dịch mẫu còn lại được chuyển sang ống nghiệm bằng dung môi Hexan và được cô đuổi dung môi cho đến khi chỉ còn lại dodecan.
Phần chất còn lại trong ống nghiệm được hòa tan bằng 0,5 mL Hexan và chuẩn bị làm sạch trên cột Nhôm oxit (1 g) đã được hoạt hóa bằng 5 mL Hexan. Chất phân tích được rửa giải qua cột Nhôm bằng 3 mL Hexan. Phân đoạn chất qua cột Nhơm có thể tích 3,5 mL được thu vào ống nghiệm và chuyển lên cột sắc kí PGC. Sắc kí PGC bao gồm một bơm dùng cho sắc kí lỏng hiệu năng cao, một hệ khóa cột gồm đồng hồ và van chọn dung mơi, một vịng bơm mẫu thể tích 5 mL và và bộ thu mẫu với bình cầu thể tích 100 mL. Các chất Dioxin được tách qua cột Hypercarb (100 x 4,6 mm). Cột được rửa lần lượt với 60 mL cyclohexan/DCM (1/1 v/v) để loại bỏ các hợp chất PCBs không phẳng và 60 mL Toluen để thu chất phân
tích, tốc độ dịng 2 mL/ phút.