Vô hoạt 2 giống virus PV1 và MV: Chúng tôi sử dụng formol ở các nồng độ 0,15%, 0,2%, 0,3% để vô hoạt cho 2 giống virus Newcastle và IB.
Kiểm tra virus sau vô hoạt
Kiểm tra theo tiêu chuẩn 10 TCN 1005-2006. Để kiểm tra tính an toàn của kháng nguyên 02 giống virus cường độc Newcastle và IB sau vô hoạt đảm bảo không còn virus sống. Chúng tôi sử dụng nước trứng chứa virus sau vô hoạt tiêm cho phôi gà 10 ngày tuổi rồi chuyển vào tủ ấp 370C, hàng ngày soi theo dõi đến 96 giờ. Giết trứng, mổ thu hoạch nước trứng và kiểm tra bệnh tích phôi gà. Nước trứng sau thu hoạch được kiểm tra bằng phản ứng HA để phát hiện sự có mặt của 02 giống virus Newcastle và IB. Nước trứng sau thu hoạch lần 1 ở cả 02 giống virus được chúng tôi tiếp tục sử dụng để tiêm truyền lặp lại trên phôi gà lần 2 và lần 3.
Kết quả sau 3 lần tiêm truyền liên tiếp trên phôi gà 10 ngày tuổi chúng tôi nhận thấy ở nồng độ formol 0,15 % virus ND chưa được vô hoạt hoàn toàn vẫn còn virus sống (HA dương tính với virus ND). Nồng độ formol 0,3 % cả 02 giống được vô hoạt hoàn toàn (HA âm tính) song gây tỷ lệ chết cao ở phôi gà. Ở nồng độ formol 0,2% chúng tôi nhận thấy cả 2 giống virus được vô hoạt hoàn toàn và không gây chết phôi gà, phôi gà phát triển bình thường giống phôi đối chứng. Kết quả kiểm tra kháng nguyên của 2 giống virus sau vô hoạt trên phôi gà ở nồng độ formol 0,2% thể hiện ở Bảng 3.10.
Bảng 3.10. Kết quả kiểm tra virus sau vô hoạt trên phôi gà ở nồng độ 2%
Kết quả kiểm tra HA nước trứng sau tiêm virus vô hoạt Giống virus
Lần I (HA) Lần II (HA) Lần III (HA)
Newcastle (-) (-) (-)
IB (-) (-) (-)
Ghi chú: (-) kết quả âm tính
Như vậy với nồng độ formol 0,2% cả 2 giống virus đã được vô hoạt hoàn toàn và ở nồng độ formol này cũng không ảnh hưởng đến sự phát triển của phôi gà.
Trên cơ sở đó chúng tôi sử dụng nước trứng chứa virus ND và IB đã vô hoạt này để phối hợp với chất bổ trợ nhũ dầu Montanide ISA 70 VG chế tạo vacxin.
3.6. Sản xuất vacxin
Sau khi đã xác định virus được vô hoạt hoàn toàn, chúng tôi sử dụng huyễn dịch virus này phối hợp với chất bổ trợ nhũ dầu Montanide ISA 70 VG do công ty Seppic cung cấp, theo tỷ lệ 70/30, quy mô sản xuất từ 80 - 100 liều vacxin.
Bảng 3.11. Kết quả sản xuất vacxin
Lô vacxin Ngày sản xuất Chất bổ trợ Số lượng sản xuất
(ml) Số liều vacxin
1 261111 ISA 70 VG 100 333
2 281211 ISA 70 VG 100 333