- Tách lipit từ mẫu:
+Cân 1g mẫu đã được trộn đều, cho vào ống thuỷ tinh vial cao thể tích 20ml. +Cho thêm 600l nước cất, 5ml Methanol, 10ml Chloroform và 200l BHT. Ngâm mẫu trong dung môi khoảng 10 phút.
+Đồng hoá mẫu bằng máy trong 1 phút.
+Đổ vào ống xilanh có lót tấm giấy lọc GF/C ở dưới đáy cho dịch mẫu chảy xuống hết hoàn toàn.
+Cho thêm 5ml Methanol và 10ml Chloroform vào vial và đồng hoá mẫu trong 20 giây
+Đổ dung dịch này vào xilanh, cho mẫu được lọc hết hoàn toàn.
+Sử dụng pitton xilanh để ép tống dung dịch còn lại trong xilanh xuống phễu chiết 100ml.
+Cho thêm 7,5ml NaCl 0.9% vào phễu chiết chứa dịch mẫu. Đảo trộn ngược phễu chiết nhiều lần và giữ mẫu ở 50C trong khoảng 4giờ để dịch mẫu phân chia thành 2 lớp.
+Tách lớp dưới (chứa hàm lượng lipit hoà tan trong dung môi) cho chảy vào phễu chiết thể tích 50ml. Loại bỏ lớp dịch phía trên (chứa phần hoá hợp gồm các tạp chất được loại như nước, muối, protein….).
+Xác định thể tích chiết ở trên (Vdm).
+Cho thêm 5ml CH3OH 50% vào mỗi mẫu trong phễu chiết 100ml. Đảo trộn ngược phễu chiết nhiều lần.
+Cho phân chia tách thành 2 lớp và lắng qua đêm ở 50C. - Định lượng lipit
+Lớp dưới được rút chảy xuống bình cầu 100ml.
+Cô quay chân không làm bay hơi dung môi trong bình cầu ở 370C đến khi còn lại thể tích khoảng 1ml.
+Hoà tan mẫu lại ngay lập tức bằng một lượng thể tích nhỏ Chloroform. +Chuyển nhượng mẫu qua bình định mức 5ml, tráng rửa bình cầu nhiều lần và định mức bằng Chloroform vừa đủ 5ml.
+Sau khi xử lý xong, dung dịch này được mang đi xác định hàm lượng lipit tổng. - Xác định hàm lượng lipit tổng
+Lấy chính xác 2ml (Vm) dung dịch mẫu đã xử lý, cho vào một ống thuỷ tinh có nắp 4ml đã được sấy chân không và cân với lượng không đổi.
+Làm khô bằng khí nitơ.
+Cho vào tủ sấy chân không đến khối lượng không đổi, áp suất khoảng 6570 psi trong một giờ.
- Tính kết quả
Lipit tổng số (%) tính theo công thức:
% Xk (g/g) = *100 * * * ) ( 1 0 Vm T m Vdm m m Trong đó:
Xk: Hàm lượng lipit tổng số tính theo trọng lượng khô của mẫu m1: Trọng lượng cân ống vial và mẫu sau sấy (g).
m: Trọng lượng cân mẫu (g).
Vđm: Thể tích định mức sau xử lý (ml) Vm: Thể tích mẫu sau xử lý lấy để sấy (ml) T: thành phần khô của mẫu, T = (100 - W)/100 W: Độ ẩm của mẫu (%)