CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.5. Sinh thiết phôi bào và rửa phôi bào
Các phôi thụ tinh trong ống nghiệm đạt mốc thời gian 5 ngày tuổi (khoảng 60 tế bào) sẽ được sinh thiết sử dụng tia lase để lấy ra khoảng 3 đến 5 tế bào bởi các chuyên viên phôi học tại phịng ni cấy phôi của các Trung tâm Thụ tinh nhân tạo. Các tế bào này sẽ được chuyển về phịng thí nghiệm ADN thuộc Bộ mơn Giải phẫu của Học viện Quân Y để kiểm tra bất thường về mặt di truyền. Trước khi chuyển phôi bào ra khỏi Trung tâm Thụ tinh nhân tạo, phôi bào cần được trải qua bước rửa phôi để loại bỏ các mảnh vụn tế bào vịn sót lại trong quá trình sinh thiết cũng như loại bỏ các cặn bẩn trong mơi trường cịn sót lại.
Sau khi chuẩn bị pipet miệng, chuyển đĩa chứa tế bào đã sinh thiết lên giá đỡ mẫu của kính hiển vi. Lắp pipet Pasteur đã được vô trùng bằng ngọn lửa vào pipette miệng. Sau đó hút mơi trường ni cấy sạch vào trong pipette pasteur sao cho thành ba phần riêng biệt cách nhau bởi các phần khí. Quan sát trên kính hiển vi và hút ra cụm phơi bào từ đĩa cùng với 1 lượng tối thiểu dung dịch môi trường. Chuyển phơi bào lên phía trên cùng bên trái của giọt dung dịch rửa thứ nhất (dung dịch môi trường
nuôi cấy phôi) đã được đánh dấu trên đĩa. Di chuyển pipet sang một vùng khác trên giọt rửa một và nhả tất cả phần dung dịch còn lại trong pipet vào vị trí đó. Tiếp tục chuyển pipette sang một vùng khác vẫn trong giọt rửa 1, hút vào một lượng nhỏ dung dịch rửa. Di chuyển đến chỗ nhả phôi bào lần 1 và hút phôi bào lên, chuyển sang giọt rửa thứ 2 (dung dịch môi trường nuôi cấy phôi). Lặp lại các bước trên ở giọt rửa thứ 2 và 3; trong đó dung dịch ở giọt rửa thứ 3 vẫn là môi trường nuôi cấy. Làm tương tự các bước trên ở các giọt rửa số 4, 5, 6 (sử dụng dung dịch Phosphate buffer solution 1% polyvinylpyrrolidone). Ở giọt rửa số 6, hút cụm tế bào lên, kèm theo một lượng nhỏ dung dịch (khoảng 2,5 µl) và chuyển sang ống PCR đã được đánh dấu tên và mã vạch của phôi sau đó bảo quản trên khay lạnh trong suốt q trình vận chuyển về phịng phân tích ADN. Trong mỗi lần sinh thiết và rửa phôi, sẽ thu thêm 1 ống môi trường nuôi cấy làm mẫu chứng âm cho qui trình WGA sau này.