CHƢƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.5. Nghiên cứu điều kiện phù hợp cho khả năng sinh tổng hợp bacteriocin
bacteriocin
Dịch nuôi cấy vi khuẩn đƣợc tiến hành ly tâm 10000 vòng/phút ở 4oC trong 10 phút và thu dịch trong. Đƣờng kính vịng kháng khuẩn của dịch nuôi cấy ở các nhiệt độ (30, 37 và 40oC) và thời điểm (24, 48 và 72 giờ) đƣợc so sánh để tìm ra điều kiện ni cấy phù hợp cho sự sinh tổng hợp bacteriocin [55,66].
Dịch nuôi cấy vi khuẩn đƣợc tiến hành ly tâm 10000 vòng/phút ở 4oC trong 10 phút và thu dịch trong. Đƣờng kính vịng kháng khuẩn của dịch nuôi cấy ở các nhiệt độ (30, 37 và 40oC) và thời điểm (24, 48 và 72 giờ) đƣợc so sánh để tìm ra điều kiện nuôi cấy phù hợp cho sự sinh tổng hợp bacteriocin [55,66]. khuếch tán trên đĩa thạch [29,37]. Dịch nuôi cấy chủng vi khuẩn đƣợc nhỏ vào các giếng trên mơi trƣờng thích hợp đã chứa 1% (v/v) vi sinh vật gây bệnh (Bảng 2.2). Sau 24 - 48 giờ, vòng kháng khuẩn đƣợc quan sát.
2.2.6.2. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính bacteriocin
Dịch ni cấy sau khi ly tâm 10000 vòng/phút trong 10 phút đƣợc chỉnh đến các giá trị pH 5, 6, 7, 8, 9, 10 bằng NaOH 1M và giữ các pH này ở 30oC trong 1 giờ, 3 giờ. Mẫu đối chứng là môi trƣờng MRS lỏng đã đƣợc chỉnh đến các pH tƣơng ứng. Sau đó các mẫu đƣợc xác định hoạt tính bacteriocin bằng phƣơng pháp khuếch tán trên đĩa thạch. Hoạt tính bacteriocin của mẫu khơng xử lý đƣợc cho là 100% và phần trăm hoạt tính của các mẫu xử lý đƣợc tính theo hoạt tính này. Sau 24 - 48 giờ, đƣờng kính vịng kháng khuẩn của mẫu ở từng pH đƣợc so sánh với nhau để đánh giá ảnh hƣởng của pH đến hoạt tính bacteriocin.
2.2.6.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính bacteriocin
Dịch ni cấy sau ly tâm đƣợc xử lý ở 60oC, 100oC (5 phút, 10 phút, 15 phút, 30 phút, 45 phút, 60 phút) và 121oC (15 phút). Sau đó dịch này đƣợc sử dụng để xác định ảnh hƣởng của nhiệt độ đến hoạt tính bacteriocin bằng phƣơng pháp khuếch tán trên đĩa thạch [85]. Hoạt tính bacteriocin của mẫu không xử lý đƣợc cho là 100% và phần trăm hoạt tính của các mẫu xử lý đƣợc tính theo hoạt tính này.