CHƢƠNG 2 : ĐỀ TÀI, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM
2.2. Các phương tiện nghiên cứu
2.2.1. Thiết bị nghiên cứu
- Sắc kí lớp mỏng: dùng bản mỏng tráng sẵn của MERCK: 60 F254. - GC-MS đo bằng máy GC-6890 MS-5973.
- Phổ hồng ngoại (IR) ghi trên máy impact 410 –Nicolet 760 FT-IR (theo phương pháp ép viên KBr).
- Phổ khối lượng (MS) ghi trên máy Hewlett Packard HP5890, Serie II.
- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): 1H-NMR, 13C-NMR, 13C-NMR-DEPT- 135, 13C-NMR-DEPT-90, COSY, HMQC, HMBC, được ghi trên máy Brucker Advance-500 MHz, chuẩn nội TMS (tetrametyl silan), độ chuyển dịch hóa học (δ) được biểu thị bằng ppm, hằng số J tính theo Hz.
. Các phổ được thực hiện tại Viện hóa học, Viện Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam và Viện hóa học các hợp chất thiên nhiên.
2.2.2. Dụng cụ
- Cột chiết nhồi silica gel - Bộ chưng cất tinh dầu
- Sắc kí cột nhồi silica gel ( Hãng Merk, kích thước hạt 60 đến 100m). Hệ dung môi rửa giải là n-Hexan: Etylaxetat tăng dần độ phân cực.
- Sắc kí lớp mỏng dùng silica gel tráng trên các tấm kính 3 x 10 cm, dùng silica gel G5-20, hoạt hóa ở 1100C trong 2h hoặc dùng bản mỏng nhôm tráng silica gel 60F.254. Hệ dung mơi dùng cho sắc kí lớp mỏng là: n-Hexan: EtOAc với tỉ lệ phù hợp để khả năng tách là tốt nhất.
2.2.3. Các hóa chất
Các dung mơi, thuốc thử và các hóa chất khác đều dùng của hãng MERCK hay của Trung Quốc loại RA. Nếu là dung mơi cơng nghiệp thì phải xử lý như sau:
- Dung môi etylaxetat kỹ thuật được rửa axit 3 lần với dung dịch Na2CO3 5%, sau đó được rửa bằng nước cất đến pH = 7. Làm khô bằng Na2SO4 khan, CaSO4 khan, cất lấy etylaxetat ở phân đoạn có nhiệt độ sơi 76-780C.
- Dung môi n-hexan kỹ thuật được rửa bằng axit H2SO4 đậm đặc, sau đó bằng nước cất đến pH= 7, làm khô bằng Na2SO4 khan và cất lấy ở phân đoạn có nhiệt độ sơi 67-680C.
Sắc kí lớp mỏng (SKLM) được chạy trên những bản nhôm tráng sẵn silica gel 60F254 độ dày 0,2mm của hãng Merck.
Các sắc kí đồ lớp mỏng nhận biết bằng thuốc thử vanillin/H2SO4 1% (dùng để nhận biết các nhóm chất như steroit, tecpenoit, các chất màu, chất sáp…). Thuốc thử được điều chế như sau: cho 0,2g vanillin vào 10ml H2SO4 đặc 98% khuấy đến tan hết, thu được dung dịch thuốc thử. Thuốc hiện màu FeCl3 1M (pH=4) (dùng để nhận biết các loại hợp chất flavonoid, phenolic, axit, este…)
Chất hấp phụ dùng trong q trình sắc kí cột là silica gel cỡ hạt 0,040-0,063 mm của hãng Merck.