HCl 2M đến pH=2 3 ml đệm pH=2 20 ml n-hexan/etylaxetat (9/1) 20 µl BSTFA chứa 1% TMCS 2 ml KOH 10M 10 ml nước tiểu
Thủy phân trong 20 phút ở 500C
Lắc trong 30 phút, phân lớp
Thu dịch chiết, loại nước bằng Na2SO4 khan
Cô chân không, thu cặn chiết
Chuyển sang lọ dẫn xuất, rửa bằng 0,2 ml Metanol, lắc siêu âm
Thổi khơ bằng dịng khí N2
Dẫn xuất trong 20 phút ở 90oC
3.5. Ứng dụng quy trình vào phân tích mẫu thực tế
Từ quy trình đã được khảo sát và tối ưu, tiến hành phân tích với 5/6 mẫu bắt được dương tính với que thử miễn dịch cần sa trong nước tiểu. Kết quả thu được trong bảng 3.8.
Bảng 3.8. Kết quả định lượng thu được từ một số mẫu thực
STT STHC-COOH-2TMS Lần 1 STHC-COOH- 2TMS Lần 2 STHC-COOH-2TMS Lần 3 STHC-COOH-2TMS Trung bình Khối lượng THC-COOH (ng/ml) M1 373729 359827 394023 375860 34,1 M2 780945 771801 799532 784092 68,6 M3 862841 884299 892446 879862 76,7 M4 1954728 1986471 1991763 1977654 169,4 M5 301249 328625 325033 318302 29,2
Kết quả cho thấy, hàm lượng THC-COOH trong mẫu nước tiểu phù hợp với lời khai của đối tượng. Đối tượng có tiền sử sử dụng cần sa và đối tượng mới sử dụng cần sa có hàm lượng THC-COOH trong mẫu nước tiểu cao hơn các đối tượng ít sử dụng và đã sử dụng lâu ngày so với thời điểm lấy mẫu phân tích. Như vậy, với đối tượng sử dụng cần sa thường xuyên hàm lượng THC-COOH có thể lên tới vài trăm ng/ml. Từ kết quả hàm lượng THC-COOH thu được trên một số mẫu nước tiểu có thể đánh giá lại được tiền sử và mức độ sử dụng cần sa của đối tượng.
3.6. Hướng phát triển của đề tài
Với những kết quả tin cậy đạt được qua quá trình khảo sát các yếu tố cũng như xây dựng quy trình phân tích THC-COOH trong nước tiểu của người bằng sắc ký khí khổi phổ, phương pháp có thể áp dụng và triển khai tại các phịng thí nghiệm của địa phương để phục vụ cho công tác giám định ma túy.
Ngoài đối tượng phân tích là mẫu nước tiểu, hướng nghiên cứu tiếp theo được đề xuất là có thể áp dụng phân tích với các đối tượng mẫu khác như mẫu máu, nước bọt nhằm đa dạng hình thức lấy mẫu trên thiết bị GC-MS hoặc GC- MS/MS để tăng độ nhạy của phép phân tích. Đồng thời có thể tiến hành phân tích THC-COOH trong các đối tượng mẫu trên thiết bị HPLC, LC-MS để giảm bớt bước dẫn xuất hóa.
KẾT LUẬN
Trên cơ sở khảo sát các yếu tố chúng tôi thu được các kết quả sau: * Điều kiện tối ưu trên thiết bị GC-MS với chương trình nhiệt độ:
120oC (2 phút) 200oC 280oC (5 phút) Tổng cộng: 13,933 phút - Các mảnh ion THC-COOH-2TMS: 73; 147; 209; 297; 355; 371; 398; 417; 432; 473; 488...
- Ion mảnh: 371.
* Khảo sát được phương pháp chiết lỏng lỏng với dung môi chiết THC- COOH trong nước tiểu là n-hexan/etylaxetat (9/1, v/v), thể tích dung mơi chiết là 20 ml.
* Khảo sát được môi trường chiết THC-COOH trong nước tiểu tốt nhất là pH=2, môi trường chiết là HCl 2M, dung dịch đệm xitrat pH=2.
* Hiệu suất của quá trình chiết đạt 96,2%.
* Xây dựng được đường chuẩn phân tích định lượng THC-COOH trong khoảng 10-2000 ng/ml với hệ số tương quan r2 = 0,9998.
- Xác định được giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của thiết bị là LOD= 0,9 ng/ml; LOQ= 2,9 ng/ml.
* Đánh giá được tính phù hợp của phương pháp với RSD ở hai điểm nồng độ đầu và nồng độ cuối của đường chuẩn nhỏ.
* Hiệu suất thu hồi trên nền mẫu thực cao 93,8 % và 95,6%.
* Xây dựng được quy trình phân tích THC-COOH trong mẫu nước tiểu của người sử dụng cần sa.
* Ứng dụng phân tích trên một số mẫu nước tiểu nghi sử dụng cần sa với hàm lượng từ 29,2 ng/ml – 169,4 ng/ml tùy thuộc vào tiền sử sử dụng cần sa và thời gian tính từ thời điểm sử dụng lần cuối đến thời điểm lấy mẫu nước tiểu phân
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
1. Phạm Hùng Việt (2005), Sắc ký khí – Cơ sở lý thuyết và khả năng ứng dụng,
Nhà xuất bản Đại học Quốc gia Hà Nội.
2. Nguyễn Văn Ri (2009), Các phương pháp táchTrường ĐH Khoa học Tự nhiên. 3. Tạ Thị Thảo (2006), Bài giảng Thống kê trong Hóa phân tích, Trường ĐH
Khoa học Tự nhiên.
4. Trần Minh Hương (2004), Các chất ma túy thường gặp và phương pháp giám
định trong mẫu phẩm sinh học, Nhà xuất bản Công an nhân dân.
Tiếng Anh
5. California NORML Guide Interpreting Drug Test Results (2012), Marijuana
Drug Test Detection Time.
6. D. Bourquin, R. Brenneisen (1987), Determination of the major Δ9- tetrahydrocannabinol metabolite in urine by high-performance liquid chromatography andphotodiode array detection, Analytica Chimica Acta, Vol
198, pp 183-189.
7. Eirin Berge Steinshamn (2009), Development of an analytical method for
detection and quantification of cannabis and cannabinoid analogues in urine,
Master in analytical chemistry thesis for the Norwegian pharmacy degree candidates pharmaciae.
8. Eugene W. Schwilke, David M. Schwope, Erin L. Karschner, Ross H. Lowe, William D. Darwin, Deanna L. Kelly, Robert S. Goodwin, David A. Gorelick
and Marilyn A. Huestis (2009), Δ9-Tetrahydrocannabinol (THC), 11-Hydroxy- THC, and 11-Nor-9-carboxy-THC Plasma Pharmacokinetics during and after Continuous High-Dose Oral THC, Clinical Chemistry, pp. 2180-2189.
9. Fishburne PM, Abelson HI, Cisin I, (1979) National survey on drug abuse: main
10. Gehaltstatistik (2009), Swiss Federal Office of Public Health, THC Statistics,
p.p. 17-19.
11. Hunt AC, Jones RT (1980), Tolerance and disposition of THC in man. Pharm
Exp Ther, pp. 215:135-44.
12. K.J.S.De Cock, F.T.Delbeke, D.De Boer, P.Van Eenoo, and K.Roels (2003)
Quantitation of 11-nor-∆9-Tetrahydrocannabinol-9-carboxylic acid with GC-MS in Urine Collected for Doping Analysis, Journal of Analytical Toxicolog, Vol 27, pp 106-109.
13. Law, B; Mason, PA; Moffat, AC; King, LJ (1984). "Confirmation of cannabis
use by the analysis of delta 9-tetrahydrocannabinol metabolites in blood and urine by combined HPLC and RIA" Journal of analytical toxicology, pp. 19-22.
14. Marcello Chiarotti, Luisa Costamagna (2000), Analysis of 11-nor-9-carboxy-
∆9-tetrahydrocannabinol in biological samples by gas chromatography tandem mass spectrometry (GC/MS-MS), Forensic Science International, Vol 114, pp 1-6.
15. M. Felli, S. Martello, M. Chiarotti (2011), LC–MS–MS method for simultaneous
determination of THCCOOH and THCCOOH-glucuronide in urine: Application to workplace confirmation tests, Forensic Science International, Vol 204, pp 67-73.
16. Narcotics Division (1998), Manual for identification of abused drugs,
Pharmaceutical and Medical Safety Bureau Ministry of Health and Welfare, Japan.
17. Perez-Reyes M, Guiseppi SD, Mason AP, Davis KH (1983), Passive
inhalation of marijuana smoke and urinary excretion of cannabinoids. Clin
Pharmacol Ther; pp. 34:36-41.
18. Peter R. Stout, Carl K. Horn, and Kevin L. Kalette (2001), Solid-Phase
Extraction and GC-MS Analysis of THC-COOH Method Optimized for a High- Throughput Forensic Drug-Testing Laboratory, Journal of Analytical Toxicolog,
Vol 25, pp 550-554.
19. Shanlin Fu and John Lewis (2008), Novel Automated Extraction Method for
Quantitative Analysis of Urinary 11-nor-∆9-Tetrahydrocannabinol- 9-Carboxylic Acid (THC-COOH), Journal of Analytical Toxicolog, Vol 32, pp 292-297.
20. United Nations international drug control programe (1995), Recommended
methods for the detection and assay of Heroin, Cannabinoids, Cocaine, Amphetamine, Methamphetamine and Ring-substituted Amphetamine Derivatives in biological specimens, United Nations, New York, pp. 31-41.
21. UNODC United Nations office on drugs and crime (2009), Recommended
Methods for the Identification and Analysis of Cannabis and Cannabis Products,
United Nations, New York. pp. 8-9; 21-23.
22. Vandana Dixit and Vyas M. Dixit (1991) Solid-phase extraction of l l-nor-A-
9-tetrahydrocannabinol-9-carboxylic acid from human urine with gas chromatographic-mass spectrometric confirmation, Journal of Chromatography B:
Biomedical Sciences and Applications, Vol 567, pp 81-91.
23. Wolfgang Weinmann*, Susanne Vogt, Rolf Goerke, Claudia Muăller, Andreas
Bromberger (2000), Simultaneous determination of THC-COOH and
PHỤ LỤC
Danh mục các hình tham khảo:
Hình 1. Sắc ký đồ của mẫu M1. Hình 2. Phổ khối của mẫu M1. Hình 3. Sắc ký đồ mẫu M2. Hình 4. Phổ khối của mẫu M2. Hình 5. Sắc ký đồ của mẫu M3. Hình 6. Phổ khối của mẫu M3. Hình 7. Sắc ký đồ mẫu M4. Hình 8. Phổ khối của mẫu M4. Hình 9. Sắc ký đồ của mẫu M5. Hình 10. Phổ khối của mẫu M5.
Hình 11. Sắc ký đồ khảo sát bằng dung mơi n-hexan/etylaxetat (9/1). Hình 12. Phổ khối khảo sát bằng dung mơi n-hexan/etylaxetat (9/1). Hình 13. Sắc ký đồ khảo sát ở môi trường pH=2.