Chƣơng 2 : NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Vật liệu nghiên cứu
Các thí nghiệm sử dụng các hóa chất, dụng cụ và thiết bị chuyên môn dùng trong nghiên cứu vi sinh vật học.
2.2.1. Môi trường nuôi cấy
- Môi trường phục vụ cho phân lập, nuôi cấy, giám định mẫu bệnh, thành phần (trong 1 lít môi trường):
+ Môi trường PSM: cà rốt 20g; khoai tây 20g; agar 15g và các hóa chất: Pimaricin 10µg/ml; Rifampicin 20µg/ml; Hymexazol 0,3µl/ml.
+ Môi trường PCA: khoai tây 20g; cà rốt 20g; agar 20g
+ Môi trường PDA: khoai tây 200g; đường dextro 20g; agar 20g + Môi trường CA: cà rốt 200g; agar 15g
+ Môi trường CMA: bột ngô 60g; agar 20g
+ Môi trường Czapek: NaNO3 2g; KH2PO4 1g; MgSO4.7H2O 0,5g; KCl 0,5g; FeSO4.7H2O 0,01g; sucrose 30g; agar 20g.
+ Môi trường WA: agar 20g
+ Môi trường V8 Juice: V8 200ml; CaCO3 3g ; agar 20g.
- Môi trường nuôi cấy vi sinh vật đối kháng: Thành phần (trong 1 lít môi trường) + Môi trường PDA: khoai tây 200g; đường dextro 20g; agar 20g
+ Môi trường LB: tryptone 10g; yeast extract 5g; NaCl 5g; agar 20g
+ Môi trường King’B: Yeast extract 5g; pepton 20g; glyxerin 5ml; K2HPO4 (12,5 %) 12ml; MgS04.7H20 (6,25 %) 25ml; agar 20g
+ Môi trường PSA: Saccharoza 20g; Pepton 5,0g; K2HPO4 0,5g; MgSO4.7H2O 0,25g; agar 20g
+ Môi trường NA: nutrient agar 23g.
- Môi trường bảo quản Skim milk: Skim milk 10g; L-glutamic 1,5g; nước cất 100ml.
2.2.2. Các trang thiết bị và dụng cụ
Máy PCR, máy điện di, máy ly tâm, máy đọc UV, máy Vortex , lò vi sóng , hộp Petri, ống nghiệm, ống đong, cốc thủy tinh, bình tam giác, que cấy, panh, dao, kéo, đèn huỳnh quang, tủ lạnh, tủ sấy, nồi hấp, tủ định ôn, kính hiển vi quang học, kính lúp soi nổi, pipetman và đầu côn các loa ̣i , thiết bị đo nhiệt độ, ẩm độ... và các thiết bi ̣ thí nghiê ̣m khác.
2.2.3. Nguồn vi sinh vật sử dụng trong nghiên cứu
Chúng tôi lựa chọn các nguồn nấm bệnh: gồm các mẫu quả, đất vùng rễ của những cây bị bệnh thối đen quả ca cao, các nguồn vi sinh vật đối kháng: gồm các mẫu rễ và đất vùng rễ của cây ca cao khỏe không bị bệnh thu thập trên đồng ruộng tại:
- Thôn Eatu, xã Eana, huyện Krông Ana, tỉnh ĐăkLăk;
- Vườn thực vật, Viện KHKT Nông Lâm Nghiệp Tây Nguyên; ĐăkLăk; - Huyện Krông Pak, tỉnh ĐăkLăk;
- Nông trường ĐăkLao, Đăk Mil, Đăk Nông;
- Xã Minh Hưng, huyện Bù Đăng, tỉnh Bình Phước; - Tở 1 khu 5, Phường Thác Mơ, Phước Long, Bình Phước - Ấp 5, xã Tân Hưng, Đồng Phú, Bình Phước.