Mã hiệu mẫu Khối lƣợng (g) Độ ẩm (%) Nhiệt độ (o C) Pha hơi (lit ) Pha Hạt (mg) m1 m2 ĐA1 ĐA2 T1 T2 PTN-1.1 0,06633 0,06672 69 91 26 24 6647 0,39 PTN-1.2 0,06590 0,06627 91 95 24 23 6515 0,37 PTN-1.3 0,06608 0,06640 78 88 23 21 7206 0,32 PTN-1.4 0,06633 0,06679 45 45 28 25 5498 0,46 PTN-2.1 0,06633 0,06676 93 95 28 26 6518 0,43 PTN-2.2 0,06643 0,06678 79 89 25 25 7146 0,35 PTN-2.3 0,06649 0,06700 79 81 26 25 6833 0,51 PTN-2.4 0,06610 0,06650 79 80 23 21 6833 0,40 NO-1.1 0,06600 0,06622 73 63 27 19 5025 0,22 NO-1.2 0,06611 0,06636 72 61 27 18 5412 0,25 NO-1.3 0,06611 0,06641 71 61 27 18 5409 0,30 NO-1.4 0,06611 0,06636 72 61 27 18 5413 0,25 NO-2.1 0,06697 0,06758 67 67 22 24 6553 0,61 NO-2.2 0,06611 0,06636 67 67 21 24 6548 0,25 NO-2.3 0,06794 0,06864 88 79 23 29 6753 0,70 NO-2.4 0,06643 0,06709 88 79 23 29 6680 0,66 Trong đó các mẫu:
PTN-1.1, 1.2, 1.3, 1.4 cùng đƣợc thu ở Phịng thí nghiệm Phân Tích, khoa hóa học, trƣờng Đại học Khoa Học Tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội.
PTN-2.1; 2.2; 2.3; 2.4 cùng đƣợc thu ở Phịng thí nghiệm Hữu Cơ, khoa hóa học, trƣờng Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội.
NO-1.1; 1.2; 1.3; 1.4 cùng đƣợc thu trong nhà ở tại quận Hoàng Mai, Hà Nội. NO-2.1; 2.2; 2.3; 2.4 cùng đƣợc thu trong nhà ở tại quận Hoàn Kiếm, Hà
2.4.4. Chuẩn bị chất chuẩn và chất đồng hành
- Dung dịch chuẩn phthalate nồng độ 1000 µg/mL (chuẩn bị bằng cách pha 10 mg chất chuẩn gốc với 10 mL n-hexane sạch).
- Các dung dịch chuẩn với các mức nồng độ từ cao đến thấp (500 ng/mL, 100 ng/mL, 50 ng/mL, 25 ng/mL, 10 ng/mL, 5 ng/mL và 1 ng/mL) đƣợc pha loãng lần lƣợt với dung môi n-hexane sạch từ dung dịch chuẩn phthlate nồng độ 1000
µg/mL
- Dung dịch đồng hành có nồng độ 1000 µg/mL (chuẩn bị bằng cách đem cân 10 mg chất đồng hành phthalate rồi thêm 10 mL dung môi n-hexane).
- Dung dịch các chất đồng hành d4-phthalate với các mức nồng độ: 100
µg/mL, 10 µg/mL, 1 µg/mL, 500 ng/mL, 300 ng/mL, 100 ng/ml, 50 ng/mL đƣợc pha từ dung dịch đồng hành có nồng độ 1000 µg/mL.
- Các dung dịch đƣợc ghi rõ nhãn mác và bảo quản ở -50C trong tủ lạnh. 2.4.5. Quy trình chuẩn bị mẫu trắng
Mẫu trắng đều đƣợc thực hiện ở cả pha hơi và pha hạt.
Ở pha hơi, mẫu trắng gồm 2 PUF đã đƣợc làm sạch không cho hấp thụ mẫu khơng khí, thêm 100 ng chất đồng hành d4-phthalate (ngoại trừ d4-DEHP là 250 ng). Ngay sau đó, tiến hành chiết lần 1 với 100 mL, lần 2 với 80 mL hỗn hợp dichloromethane (DCM) và n-hexane (3:2, v: v), mỗi lần chiết đều đƣợc lắc trên
máy Orbital Shaker-SSM1 với tốc độ 250 vịng/phút trong 20 phút, tồn bộ dịch chiết đƣợc chuyển sang bình cầu và cơ cạn đến khoảng 7 mL bằng máy cô quay chân không. Phần dung dịch đƣợc chuyển sang ống nghiệm nhỏ 15 mL và đƣợc cơ cạn bằng dịng N2 đến 1 mLvà chuyển sang lọ nhỏ (GC vial) để tiến hành phân tích sắc ký.
Tƣơng tự đối với pha hạt, màng lọc (filter) mới chƣa qua quá trình thu mẫu đƣợc đặt trong ống nghiệm 15 ml, thêm 100 ng chất đồng hành d4-phthalate (ngoại trừ DEHP là 250 ng). Sau đó chiết bằng cách lắc với 5 mL hỗn hợp dichloromethane (DCM) và hexane (3:2, v: v) trong 5 phút. Lặp lại quá trình chiết nhƣ vậy thêm hai lần. Tồn bộ phần dịch chiết đƣợc chuyển sang ống nghiệm nhỏ
15 mL khác và dịch chiết sau đó đƣợc cơ cạn bằng dịng N2 đến 1 mL và chuyển sang lọ nhỏ (GC vial) để tiến hành phân tích sắc ký.
2.5. Xử lý mẫu
2.5.1. Phthalate trên pha hơi
Với pha hơi (thu giữ trên hai PUF). Hai PUF sau khi đƣợc hấp thụ khơng khí đƣợc chuyển vào lọ đựng và thêm vào 100 ng chất đồng hành d4-phthalate (ngoại trừ d4-DEHP là 250 ng). Ngay sau đó, tiến hành chiết lần 1 với 100 mL, lần 2 với 80 mL hỗn hợp dichloromethane (DCM) và n-hexane (3:2, v:v), mỗi lần
chiết đều đƣợc lắc trên máy Orbital Shaker-SSM1 với tốc độ 250 vịng/phút trong 20 phút, tồn bộ dịch chiết đƣợc chuyển sang bình cầu và cơ cạn đến khoảng 7 mL bằng máy cô quay chân không. Phần dung dịch đƣợc chuyển sang ống nghiệm nhỏ 15 mL và đƣợc cơ cạn bằng dịng N2 đến 1 mL và chuyển sang lọ nhỏ (GC vial) để tiến hành phân tích sắc ký.
2.5.2. Phthalate trên pha hạt
Với pha hạt (đã đƣợc thu giữ trên màng lọc thạch anh) sau khi thu mẫu màng lọc đƣợc cân lại để xác định khối lƣợng hạt bụi thu đƣợc sau đó đƣợc chuyển vào ống nghiệm 15 mL và cũng tƣơng tự nhƣ pha hơi, thêm 100 ng chất đồng hành d4-phthalate (ngoại trừ DEHP là 250 ng) đƣợc thêm vào ống nghiệm chứa mẫu màng lọc. Sau đó chiết bằng cách lắc với 5 mL hỗn hợp dichloromethane (DCM) và hexane (3:2, v:v) trong 5 phút. Lặp lại quá trình chiết nhƣ vậy thêm hai lần. Toàn bộ phần dịch chiết đƣợc chuyển sang ống nghiệm nhỏ 15 mL và dịch chiết sau đó đƣợc cơ cạn bằng dòng N2 đến 1 mL và chuyển sang lọ nhỏ (GC vial) để tiến hành phân tích sắc ký.
2.6. Xác định các thơng số của phƣơng pháp
2.6.1. Độ thu hồi và độ lặp lại của phƣơng pháp
Đây là hai yếu tố quan trọng để đánh giá hiệu quả của phƣơng pháp. Đánh giá độ thu hồi là đánh giá độ tin cậy của phƣơng pháp xử lý mẫu đã chọn.
Để đánh giá độ thu hồi của phƣơng pháp, chúng tôi tiến hành thêm chất đồng hành d4-phthalate với ba mức nồng độ 100, 300, 500 ng/mL đã đƣợc chuẩn
bị ở phần 2.4 trên nền mẫu trắng ở cả pha hạt (trên màng lọc thạch anh ) và pha hơi (trên PUF), tiến hành xử lý mẫu và phân tích nhƣ phần 2.5.
Mỗi mức nồng độ đều đƣợc tiến hành lặp lại 7 lần.
Độ thu hồi đƣợc tính tốn theo cơng thức đã đƣợc trình bày ở phần 1.5.4. Độ lặp lại đƣợc thể hiện trên độ lệch chuẩn tƣơng đối đƣợc tính theo cơng thức đã nêu ở phần 1.5.3
2.6.2. Xác định giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng của phƣơng pháp Để xác định MDL, trƣớc tiên cần phân tích mẫu (mẫu thực, mẫu thêm Để xác định MDL, trƣớc tiên cần phân tích mẫu (mẫu thực, mẫu thêm chuẩn hoặc mẫu chuẩn). MDL chính là nồng độ nhỏ nhất trong mẫu ban đầu để sau khi trải qua q trình xử lí mẫu và tiến hành đo sắc ký cho tín hiệu nhiễu cao gấp 3 lần tín hiệu đƣờng nền. Dựa vào giá trị IDL, độ thu hồi cùng với lƣợng bụi (pha hạt), thể tích khí (pha hơi) ta tính đƣợc MDL thơng qua công thức:
MDL =
V R
IDL
(%) (ng/m3) (đối với pha hơi) MDL =
m R
IDL
(%) (ng/mg) (đối với pha hạt)
Trong đó: m là khối lƣợng bụi thu đƣợc trên filter (mg) V là thể tích mẫu khí thu đƣợc (m3)
R (%) là độ thu hồi
MQL là nồng độ nhỏ nhất trong mẫu ban đầu mà khi sử dụng phƣơng pháp để phân tích có thể định lƣợng đƣợc. MDL đƣợc xác định: MQL = 3 × MDL.
2.6.3. Khoảng tuyến tính
Để xác định đồng thời mƣời phthalate trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành khảo sát khoảng tuyến tính và xây dựng đƣờng chuẩn bằng cách: Pha một dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ từ 1 ng/mL đến 1000 ng/mL nhƣ ở phần 2.3. Sau đó đem đo trong điều kiện đã tối ƣu hóa trƣớc đó.
2.7. Đánh giá sự thay đổi nồng độ phthalate theo nhiệt độ
Để đánh giá sự thay đổi nồng độ phthalate theo nhiệt độ môi trƣờng. Chúng tơi tiến hành thu mẫu khơng khí trong 8 ngày khác nhau tại cùng một vị trí trong nhà ở số 1. Nhiệt độ trong phòng đƣợc thay đổi trong khi tất cả các yếu tố khác
đều giữ nguyên. Mƣời phthalate đƣợc tiến hành phân tích theo quy trình đã đƣợc khảo sát trƣớc đó.
CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Tối ƣu điều kiện chiết tách và phân tích sắc ký phthalate
3.1.1. Lựa chọn cột tách sắc ký
Trong điều kiện hiện có chúng tơi đã sử dụng cột cột mao quản BD-5MS của hãng Agilent, 5% diphenyl 95% dimethylpolysiloxane, dài 30 m, đƣờng kính trong 0.25 mm và độ dày màng pha tĩnh 0.25 µm, nhiệt độ tối đa là 325 o
C. mẫu đƣợc bơm ở chế độ khơng chia dịng với thể tích 2 µL để tách và định lƣợng các phthalate
3.1.2. Khảo sát chu trình nhiệt độ
Chƣơng trình nhiệt độ của buồng cột đƣợc thay đổi sao cho khả năng tách là tối ƣu. Chúng tơi đã khảo sát với hai chƣơng trình nhiệt độ nhƣ đã nêu ở phần 2.4.2. Kết quả cho thấy chƣơng trình 1 cho kết quả tốt hơn.
Hình 3.1. Chƣơng trình nhiệt độ buồng cột
Từ các kết quả khảo sát chúng tôi đƣa ra kết luận điều kiện tối ƣu cho phân tích phthalate nhƣ sau:
Sắc ký khí (GC-7890B) ghép nối detector khối phổ (MS-5977A) của hãng Agilent Technologies. Quá trình phân tách sắc ký đƣợc thực hiện trên cột mao quản BD-5MS của hãng Agilent, (5% diphenyl 95% dimethylpolysiloxane, dài 30
m, đƣờng kính trong 0.25 mm và độ dày màng pha tĩnh 0.25 µm). Mẫu đƣợc bơm ở chế độ khơng chia dịng với thể tích 2 µL. Nhiệt độ buồng cột: 80 ºC (giữ 1.0 phút) đến 180 ºC với tốc độ 12 ºC/phút (giữ 1.0 phút), tăng lên 230 ºC với tốc độ 6 ºC/phút, sau đó tăng lên 270 ºC với tốc độ 8 ºC/phút (giữ 2.0 phút), và cuối cùng tăng lên 280 ºC với tốc độ 30 ºC/phút (giữ 12.0 phút).
Sau khi khảo sát các điều kiện sắc ký, 10 chất chuẩn phthalate đƣợc tiến hành phân tích với mảnh ion nhƣ trong bảng 3.1.