STT Tỉ lệ thể tích ACN : H2O
Kết quả
1 ACN : H2O = 30:70 Pic dỗng chân, khơng cân đối, tR = 6,356, hệ số đối xứng F = 2,488
2 ACN : H2O = 35: 65 Pic doãng chân, tR = 5,547, hệ số đối xứng F = 2,596 3 ACN : H2O = 40 : 60 Pic gọn, cân đối, tR = 5,117, hệ số đối xứng F = 1,010 4 ACN : H2O = 50 : 50 Có hiện tƣợng chẻ pic, tR = 4,261, hệ số đối xứng F =
2,184
Dựa trên kết quả thu đƣợc chúng tôi chọn tỉ lệ dung mơi pha động (tính theo thể tích) ACN : H2O là 40:60 cho q trình phân tích định lƣợng.
Hình 3.1. Kết quả khảo sát thay đổi tỉ lệ thành phần pha động
3.1.2. Khảo sát tốc độ dòng pha động
Cùng với yếu tố thành phần pha động, thì tốc độ pha động khi chạy sắc ký cũng ảnh hƣởng khơng ít đến kết quả tách sắc ký. Tốc độ pha động cũng là yếu tố quyết định đến quá trình rửa giải các chất trong cột sắc ký vì nó ảnh hƣởng đến q trình thiết lập cân bằng của chất tan giữa hai pha tĩnh và pha động. Tốc độ pha động quá nhỏ sẽ gây ra hiện tƣợng dỗng píc, thời gian rửa giải các chất lớn làm giảm tính kinh tế của phƣơng pháp. Nhƣng tốc độ pha động quá lớn có thể làm cho các chất trong hỗn hợp mẫu kịp tách ra khỏi nhau, dẫn đến hiện tƣợng chồng, chen lấn pic. Vì vậy cần chọn đƣợc tốc độ pha động phù hợp.
Đối với một hệ pha tĩnh và thành phần pha động đã lựa chọn thì khả năng tách các chất phụ thuộc vào tốc độ pha động.
Theo phƣơng trình Van Deemter :
H = 2λdp + 2γDm /u + (K.df2 /Ds + β.dp2/Dm).u
Cho thấy sự phụ thuộc của chiều cao đĩa lý thuyết H vào tốc độ pha động. Chiều cao đĩa lý thuyết càng lớn thì khả năng tách càng tốt. Vì vậy cần khảo sát xem tốc độ pha động nào là phù hợp. Ở đây chúng tôi khảo sát 3 tốc độ là:
0,5 ml/phút
0,8 ml/phút
1,0 ml/phút
Với tỉ lệ thành phần pha động đã tiến hành khảo sát ở trên (ACN : H2O = 40 : 60), kết quả thu đƣợc đƣợc trình bày trong bảng 3.2 và hình 3.2.