CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U
2.2.2.8. Điê ̣n di, phân tích kết quả
Chúng tơi sƣ̉ du ̣ng 10 µl sản phẩm phản ƣ́ng PCR để điê ̣n di trên gel agarose 1%, nhuộm gel trong dung di ̣ch ethidium bromide 0,5 µg/ml, chụp ảnh và phân tích kết quả.
- Chuẩn bị gel Agarose:
Hòa tan 1 g agarose trong 100 ml TBE 1X bằng lò vi sóng (2-3 phút). Để nguô ̣i agarose đến khoảng 50-60ºC rồi đổ vào khay đổ gel có cài sẵn răng lƣơ ̣c . Đợi khoảng 20-30 phút cho gel đơng hồn toàn mới đƣơ ̣c gỡ răng lƣơ ̣c ra.
- Điện di sản phẩm PCR
Sƣ̉ du ̣ng 10 l sản phẩm PCR và marker để cha ̣y điê ̣n di trong dung di ̣ch TBE
1X, hiệu điê ̣n thế 100 V với thời gian là 30 – 45 phút. Sau khi điê ̣n di xong , tiến hành nhuô ̣m bản gel trong dung di ̣ch ethidium bromide 0.5 g/ml tƣ̀ 5-10 phút. Rƣ̉a bản gel
dƣới vòi nƣớc chảy trong vòng 30 giây.
- Chụp ảnh gel trên hệ thống UVP - Phân tích kết quả:
+ Mẫu chƣ́ ng dƣơng phải có va ̣ch DNA có kích thƣớc đúng khi so sánh vớ i thang DNA chuẩn (241 bp)
+ Mẫu chƣ́ ng âm phải không hiê ̣n va ̣ch DNA.
+ Mẫu bệnh phẩm dƣơng tính là mẫu có hiê ̣n va ̣ch DNA tƣơng đƣơng với va ̣ch DNA của mẫu chứng dƣơng.
+ Mẫu bệnh phẩm âm tính là mẫu không có va ̣ch DNA tƣơng đƣơ ng với mẫu chƣ́ng dƣơng.
2.2.3. Xử lý số liê ̣u
Số liệu đƣợc xử lý bằng phần mềm SPSS 11.5. Trong q trình phân tích số liệu, chúng tơi sử dụng các test t-test, F-test để kiểm định ý nghĩa thống kê.
Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. Tối ƣu hó a phản ứng PCR phát hiện Chlamydia trachomatis