Dựa vào biểu đồ phân tích cho thấy các chủng S. aureus đƣợc phân cắt bởi
SmaI thành 12 – 20 đoạn có kích thƣớc khác nhau. Với độ tƣơng đồng về kiểu gen ≥ 80 %, chúng tơi đã phân loại thành 4 nhóm (cluster) , B, , D đƣợc thể hiện nhƣ trên hình vẽ với nguồn gốc các chủng đƣợc thể hiện ở bảng 6.
Bảng 6. Nguồn gốc các chủng S. aureus
Clusters PFGE type Nguồn gốc Tên trƣờng lấy mẫu
A 12 Chậu để thức ăn chín TH33 7 Thịt lợn sống TH33 A A A B B B B B C C C C C D D D D D
27 Chả rán TH31 B 42 Trứng rán TH19 43 Bàn tay 2 TH19 40 Thịt gà rang Th19 36 Thịt bị chín TH9 37 Chậu đựng thức ăn TH9 C 21 Thịt kho tàu TH11 22 Phở TH11 38 Thớt sống TH11 39 Thớt chín TH11 14 Thịt lợn sống TH11 D 16 Trứng TH24 17 Bàn tay TH24
Dựa vào bảng phân tích trên cho thấy sự đa dạng cao của các chủng S. aureus phân lập đƣợc, có 4 nhóm chủng có quan hệ gần gũi (độ tƣơng đồng ≥80% hay sự sai khác ≤3 đoạn). Có 1 nhóm có sự tƣơng đồng 100% và các chủng phân lập đƣợc ở cùng 1 nơi có mối quan hệ gần gũi với nhau. iều này chứng tỏ chúng có sự lây nhiễm chéo giữa các đối tƣợng mẫu, giữa thực phẩm và dụng cụ chứa đựng thực phẩm (trƣờng TH33). Nhƣ vậy, nghiên cứu đã góp phần giúp tìm hiểu rõ hơn con đƣờng lây nhiễm tụ cầu vàng trong quá trình chế biến thực phẩm tại các trƣờng tiểu học bán trú tại Hà Nội. Từ đó cho thấy tầm quan trọng của việc tuân thủ các quy định thực hành tốt an toàn vệ sinh thực phẩm, ngộ độc thực phẩm có thể xảy ra bất cứ khi nào nếu ngƣời chế biến khơng tn thủ các ngun tắc đó.
Trong tất cả các nhóm PFGE mà chúng tơi phân lập đƣợc, khơng có nhóm nào chiếm ƣu thế. iều đó cho thấy khơng có một chủng S. aureus nào tham gia rộng rãi trong môi trƣờng thực phẩm. Hơn nữa, kết quả trên cũng cho thấy khơng có mối quan hệ gần gũi nào giữa các mơ hình PFGE với các độc tố SEs. Tất cả các chủng sản xuất nội độc tố đều có các mơ hình PFGE khác nhau, tuy chỉ có 2 chủng trong cùng 1 trƣờng có độ tƣơng đồng kiểu gen 100% là sự lây nhiễm chéo giữa các loại thực
phẩm.
Nghiên cứu của Yuko Shimamura và Masatsune Murata khi nghiên cứu đặc điểm di truyền của các chủng Staphylococcus aureus từ thực phẩm tại các cửa hàng bán lẻ và bàn tay ngƣời tại Nhật Bản cũng cho thấy sự đa dạng di truyền cao trong các chủng phân lập đƣợc [51]. Nghiên cứu này thu đƣợc tổng số 94 chủng phân lập từ thực phẩm và bàn tay ngƣời và các chủng cũng đƣợc phân tích PFGE. ác chủng phân lập từ thực phẩm mẫu lấy từ các cửa hàng của cùng một chuỗi cửa hàng ở một số quận khác nhau cho thấy một mơ hình giống hệt nhau. Ví dụ: món tráng miệng kiểu Nhật mua từ một chuỗi cửa hàng ở ba huyện khác nhau cho thấy một mơ hình giống hệt nhau. Phát hiện này cho thấy rằng chủng đã đƣợc phân bố phổ biến rộng rãi trong chuỗi cửa hàng. Hơn nữa, các chủng phân lập trong các mặt hàng thực phẩm khác nhau từ cùng một cửa hàng cho thấy một mơ hình giống hệt nhau. Những chủng này cho thấy cùng loại coagulase, loại SE và sản sinh β -lactamase. Kết quả này cho thấy rằng một chủng đặc biệt đã đƣợc lan truyền mạnh mẽ trong một cửa hàng hoặc một chuỗi cửa hàng. Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy có sự phù hợp với nghiên cứu của Yuko Mashimura và cả hai nghiên cứu đều cho thấy sự lây nhiễm chéo giữa các chủng ở các loại thực phẩm trong cùng một mơi trƣờng.
Việc phân tích PFGE các chủng S. aureus hầu hết đƣợc sử dụng trong việc
phân loại các chủng MRS ở bệnh viện, bên ngoài cộng đồng hay trong các trang trại do khả năng phân biệt tốt, khả năng lặp lại cao. Việc sử dụng rộng rãi PFGE để phân tích an tồn thực phẩm trong cộng đồng cịn gặp nhiều khó khăn. Hơn nữa, thực tế thì PFGE là một quy trình tốn thời gian, địi hỏi nhân viên đƣợc đào tạo đặc biệt và thiết bị tinh vi. Sự cần thiết phải tuân theo các phƣơng pháp chuẩn, chính xác và thống nhất các cách để so sánh các mẫu với số lƣợng hạn chế thu đƣợc trong các phịng thí nghiệm khác nhau cũng đƣợc coi là một hạn chế của PFGE. Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu đều cho thấy phân tích PFGE cung cấp độ phân giải cao hơn, có thể giúp phân biệt các subtype không đƣợc phát hiện bởi bất kỳ phƣơng pháp P R nào khác [43].
ẾT LUẬN VÀ IẾN NGHỊ
Trong nghiên cứu này, trên tổng số 105 mẫu, t lệ các mẫu đƣợc phát hiện nhiếm
S. aureus lần lƣợt là: 17,6% thực phẩm nguyên liệu sống; 27,6% thực phẩm sau chế biến
trƣớc khi tiêu thụ; 14,3% mẫu phết bàn tay ngƣời chế biến thực phẩm, 12,9% mẫu cdụng cụ chế biến thực phẩm. T lệ nhiễm tụ cầu vàng trong thực phẩm tại một số trƣơng tiểu học là 18,1%.
Tỉ lệ các gen sinh độc tố ruột (sea, seb, sec) của các chủng S. aureus phân lập
đƣợc trong các nhóm đối tƣợng mẫu là 26,31% (n=19). Trong số các chủng mang gen sinh độc tố, t lệ mang gen sea là 20%, gen seb là 20%, gen sec là 60%.
ác chủng S. aureus có sự đa dạng di truyền cao khi phân tích 19 chủng thu thập đƣợc từ 06 trƣờng thì có 4 clusters với độ tƣơng đồng ≥ 80%, 01 nhóm có sự tƣơng đồng 100% chứng tỏ chúng có sự lây nhiễm chéo giữa các đối tƣợng mẫu, giữa thực phẩm và dụng cụ chứa đựng thực phẩm (trƣờng TH33).
Nhƣ vậy, nghiên cứu góp phần làm sáng tỏ con đƣờng lây nhiễm tụ cầu vàng trong khâu chế biến thực phẩm tại các trƣờng tiểu học. Qua đó khẳng định tầm quan trọng của việc tuân thủ các quy định về vệ sinh thực phẩm trong trƣờng học.
TÀI LIỆU TH M HẢO Tiếng Việt
1. Bùi Thế Hiền, Tơ Thị Thu và Cộng sự (2005), “Tình hình ơ nhiễm thực phẩm do
vi sinh vật tại hai xã huyện Kiến Xƣơng tỉnh Thái Bình năm 2001”, Trung tâm y tế dự phịng Thái Bình, Thơng tin khoa học, Cục an tồn vệ sinh thực phẩm, 2005.
2. ỗ Thị Hòa, (2006), Phòng chống tụ cầu trùng vàng. Khoa học phổ thơng, số 30/06,
“Khảo sát tính chất kháng kháng sinh của một số chủng vi sinh vật lây qua đƣờng tiêu hóa, Y học Thành phố Hồ Chí Minh”, số đặc biệt chuyên đề Y tế công cộng và Y học dự phòng, phụ bản của tập 10 (số 4), trang 406-411.
3. Lê Huy Chính (2001), Vi sinh y học, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội.
4. Nguyễn ỗ Phúc, Hoàng Hoài Phƣơng và Bùi Kiều Nƣơng (2003), “ ánh giá mức
độ ô nhiễm vi sinh vật thức ăn đƣờng phố tại thành phố Hồ hí Minh năm 2002”, Viện Vệ Sinh Y tế Công Cộng Tp HCM, Thông tin khoa học, Cục an toàn vệ sinh thực phẩm, 2003.
5. Nguyễn ỗ Phúc, Nguyễn Thị Kê, Trần Linh Thƣớc (2006), “Mối tƣơng quan giữa
đậm độ và khả năng sinh độc tố ruột (enterotoxin) của S. aureus trên hai môi trƣờng nuôi cấy TSGM và BHI”, Y học Thành phố Hồ Chí Minh, số đặc biệt chuyên đề Y tế công cộng và Y học dự phòng, phụ bản của tập 10, (số 4), tr. 412- 417.
6. Nguyễn Lý Hƣơng, Nguyễn Thị Phấn và Bùi Thị Kim Dung (2005), “Khảo sát tình
hình ơ nhiễm vi sinh vật trên một số mặt hàng thực phẩm ăn liền bán tại các chợ ở Tp.Hồ hí Minh trong 3 năm 2002-2004”, Trung tâm y tế dự phịng Tp.Hồ Chí Minh, Thơng tin khoa học, Cục an toàn vệ sinh thực phẩm, 2005.
7. Nguyễn Thị Kê, Cao Minh Nga (2006), Áp dụng kỹ thuật ELISA PCR để xác định
một số vi khuẩn và độc tố ruột vi khuẩn S. aureus gây bệnh truyền qua đường thực phẩm,
ề tài sở Khoa Học và Cơng nghệ TP. Hồ Chí Minh.
9. Trần Linh Thƣớc (2002), Phương pháp phân tích vi sinh vật trong nước, thực phẩm và mỹ phẩm. Nxb Giáo dục. 230 trang.
Tiếng Anh
10. Agar, B. P. (2000), “BAIRD-PARKER Agar (Staphylococcus Selective Agar Base
acc. to BAIRD-PARKER)”.
11. Arbeit, R. D. (1996), “Laboratory procedures for the epidemiologic analysis of microorganisms”, Manual of clinical microbiology.
12. Argaw, S., & Addis, M. (2015), “A Review on Staphylococcal Food Poisoning”,
Food Science and Quality Management, 40, 59-71.
13. Argudín, M. Á., Mendoza, M. C., & Rodicio, M. R. (2010), “Food poisoning and
Staphylococcus aureus enterotoxins”, Toxins, 2(7), 1751-1773
14. Asao, T., Kumeda, Y., Kawai, T., Shibata, T., Oda, H., Haruki, K., .. & Kozaki, S. (2003), “An extensive outbreak of staphylococcal food poisoning due to low-fat milk in Japan: estimation of enterotoxin A in the incriminated milk and powdered skim milk”, Epidemiology and infection, 130(1), 33.
15. Bannerman, T. L., Hancock, G. A., Tenover, F. C., & Miller, J. M. (1995), “Pulsed-field gel electrophoresis as a replacement for bacteriophage typing of
Staphylococcus aureus”, Journal of clinical microbiology, 33(3), 551-555.
16. Baron, S. (1996), Protozoa: Structure, Classification, Growth, and Development--
Medical Microbiology, University of Texas Medical Branch at Galveston.
17. Bennett, R. W. (2001), “FDA Bacteriological nalytical Manual online”,
Staphylococcus aureus, 12.
18. Brynestad, S., & Granum, P. E. (2002), “Clostridium perfringens and foodborne infections”, International journal of food microbiology, 74(3), 195-202.
19. Busch, U., & Nitschko, H. (1999), “Methods for the differentiation of microorganisms”, Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and
20. Carroll, K. C., Butel, J. S., & Morse, S. A. (2015), Jawetz Melnick & Adelbergs
Medical Microbiology 27 E, McGraw Hill Professional.
21. CDC (2010): “National center for Emerging and Zoonotic Infectious Disease: Staphylococcal Food Poisoning”, USA.
22. CDC/Pulse-Net. (2013), Oxacillin-resistant Staphylococcus aureus on PulseNet
(OPN): Laboratory Protocols for Molecular Typing of S. aureus by Pulsed-field
Gel Electrophoresis (PFGE).
23. Chiou, C. S., Wei, H. L., & Yang, L. . (2000), “Comparison of pulsed-field gel electrophoresis and coagulase gene restriction profile analysis techniques in the
molecular typing of Staphylococcus aureus”, Journal of clinical
Microbiology, 38(6), 2186-2190.
24. Collins, C. H., Patricia M. L. and Grange, J. M. (1995), “Staphylococcus and Micococcus”, Co ines and Lyne’s Microbio ogica Methods, pp.329-333.
25. Deplano, A., Schuermans, A., Van Eldere, J., Witte, W., Meugnier, H., Etienne, J., ... & Van Belkum, A. (2000), “Multicenter evaluation of epidemiological typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains by repetitive-element PCR
analysis”, Journal of clinical microbiology, 38(10), 3527-3533.
26. do Carmo, L. S., Dias, R. S., Linardi, V. R., de Sena, M. J., dos Santos, D. A., de Faria, M. E., ... & Heneine, L. G. (2002), “Food poisoning due to enterotoxigenic strains of Staphylococcus present in Minas cheese and raw milk in Brazil”, Food
Microbiology, 19(1), 9-14.
27. Enright, M. C., Day, N. P., Davies, C. E., Peacock, S. J., & Spratt, B. G. (2000), “Multilocus sequence typing for characterization of methicillin-resistant and
methicillin-susceptible clones of Staphylococcus aureus”, Journal of clinical
microbiology, 38(3), 1008-1015.
28. Felix, B., Vingadassalon, N., Grout, J., Hennekine, J. A., Guillier, L., & Auvray, F. (2015), “Staphylococcus aureus strains associated with food poisoning outbreaks in France: comparison of different molecular typing methods, including MLV ”,
29. Goh, S. H., Byrne, S. K., Zhang, J. L., & how, . W. (1992), “Molecular typing of Staphylococcus aureus on the basis of coagulase gene polymorphisms”, Journal
of Clinical Microbiology, 30(7), 1642-1645.
30. Haeghebaert, S., Le Querrec, F., Gallay, A., Bouvet, P., Gomez, M. and Vaillant, V. (2002), “Les toxi-infections alimentaires collectives en France, en 1999 et 2000”, Bull. Epidémiol. Hebdo. 23: 105-109.
31. Hartstein, A. I., Phelps, C. L., Kwok, R. Y., & Mulligan, M. E. (1995), “In vivo stability and discriminatory power of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
typing by restriction endonuclease analysis of plasmid DNA compared with those of other molecular methods”, Journal of clinical microbiology, 33(8), 2022-2026. 32. Hennekinne, J. A., De Buyser, M. L., & Dragacci, S. (2012), “Staphylococcus
aureus and its food poisoning toxins: characterization and outbreak
investigation”, FEMS microbiology reviews, 36(4), 815-836.
33. Huong, B. T. M., Mahmud, Z. H., Neogi, S. B., Kassu, A., Van Nhien, N., Mohammad, A., ... & Khan, N. C. (2010), “Toxigenicity and genetic diversity of
Staphylococcus aureus isolated from Vietnamese ready-to-eat foods”, Food Control, 21(2), 166-171.
34. Jackson, C. R., Davis, J. A., & Barrett, J. B. (2013), “Prevalence and characterization of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from retail meat and humans in Georgia”, Journal of clinical microbiology, JCM-03166. 35. Javid, F., Taku, A., Bhat, M. A., Badroo, G. A., Mudasir, M., & Sofi, T. A. (2018),
“Molecular typing of Staphylococcus aureus based on coagulase gene”, Veterinary World, 11 (4): 423-430. Abstract.
36. Jeršek, B., Tcherneva, E., Rijpens, N., & Herman, L. (1996), “Repetitive element sequence‐based PCR for species and strain discrimination in the genus Listeria”, Letters in applied microbiology, 23(1), 55-60.
37. Jordan, K., & Dalmasso, M. (2015), “Pulse Field Gel Electrophoresis”, Methods in
38. Jordens, J. Z., & Hall, L. M. (1988), “Characterisation of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus isolates by restriction endonuclease digestion of
chromosomal DN ”, Journal of medical microbiology, 27(2), 117-123.
39. Jørgensen, H. J., Mørk, T., Høgåsen, H. R., & Rørvik, L. M. (2005),
“Enterotoxigenic Staphylococcus aureus in bulk milk in Norway”, Journal of
Applied Microbiology, 99(1), 158-166.
40. Kadariya, J., Smith, T. C., & Thapaliya, D. (2014), “Staphylococcus aureus and staphylococcal food-borne disease: an ongoing challenge in public health”,
BioMed research international, 2014.
41. Le Loir, Y., Baron, F., & Gautier, M. (2003), “Staphylococcus aureus and food poisoning”, Genet Mol Res, 2(1), 63-76
42. Lowy, F. D. (1998), “Staphylococcus aureus infections”, New England journal of
medicine, 339(8), 520-532.
43. Montesinos, I., Salido, E., Delgado, T., Cuervo, M., & Sierra, A. (2002),
“Epidemiologic genotyping of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by
pulsed-field gel electrophoresis at a university hospital and comparison with antibiotyping and protein A and coagulase gene polymorphisms”, Journal of
Clinical Microbiology, 40(6), 2119-2125.
44. Normanno, G., Firinu, A., Virgilio, S., Mula, G., Dambrosio, A., Poggiu, .,… & Di Giannatale, E. (2005), “Coagulase-positive Staphylococci and Staphylococcus aureus in food products marketed in Italy”, International journal of food microbiology, 98(1), 73-79.
45. Olive, D. M., & Bean, P. (1999), “Principles and applications of methods for
DNA-based typing of microbial organisms”, Journal of clinical
microbiology, 37(6), 1661-1669.
46. Prevost, G., Jaulhac, B., & Piemont, Y. (1992), “DNA fingerprinting by pulsed- field gel electrophoresis is more effective than ribotyping in distinguishing among
47. Sambrook J. and Russell D.W. (2001), Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual, 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NewYork.
48. Sandel, M. K., & McKillip, J. L. (2004), “Virulence and recovery of
Staphylococcus aureus relevant to the food industry using improvements on
traditional approaches. Food Control, 15(1), 5-10.
49. Saulnier, P., Bourneix, C., Prevost, G., & ndremont, . (1993), “Random amplified polymorphic DNA assay is less discriminant than pulsed-field gel
electrophoresis for typing strains of methicillin-resistant Staphylococcus
aureus”, Journal of clinical microbiology, 31(4), 982-985.
50. Schwartz, D. C., & Cantor, C. R. (1984), “Separation of yeast chromosome-sized DNAs by pulsed field gradient gel electrophoresis”, cell, 37(1), 67-75.
51. Shimamura, Y., & Murata, M. (2011), “Pulsed-field gel electrophoretic analysis and some characteristics of Staphylococcus aureus isolated from retail foods and
human hands”, Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 75(6), 1177-1180. 52. Söhngen, C., Podstawka, A., Bunk, B., Gleim, D., Vetcininova, A., Reimer, L.
C., ... & Overmann, J. (2015), “Bac Dive–The Bacterial Diversity Metadatabase in 2016”, Nucleic acids research, 44(D1), D581-D585.
53. Stenfors Arnesen, L. P., Fagerlund, ., & Granum, P. E. (2008), “From soil to gut: Bacillus cereus and its food poisoning toxins”, FEMS microbiology reviews, 32(4), 579-606.
54. Stern, M. J., Ames, G. F. L., Smith, N. H., Robinson, E. C., & Higgins, C. F. (1984), “Repetitive extragenic palindromic sequences: a major component of the bacterial genome”, Cell, 37(3), 1015-1026.
55. Suat Puah, Kek Chua, Jin Tan (2016), "Virulence Factors and Antibiotic
Susceptibility of Staphylococcus aureus Isolates in Ready-to-Eat Foods: Detection of S. aureus Contamination and a High Prevalence of Virulence Genes",
International Journal of Environmental Research and Public Health, Feb 2016,
Vol. 13: 199.
57. Tenover, F. C., Arbeit, R. D., Goering, R. V., Mickelsen, P. A., Murray, B. E., Persing, D. H., & Swaminathan, B. (1995), “Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis: criteria for