- Đối tƣợng: Cây lan Ý thảo (D. gratiosissimum) in vitro.
- Ph m vi nghiên cứu: ảnh hƣởng của nồng độ một số chất điều hòa sinh trƣởng và sự phối hợp các chất điều hòa sinh trƣởng đến sự phát sinh chồi cây in vitro của loài lan Ý thảo (D. gratiosissimum) in vitro.
- Đ a điểm nghiên cứu: Các th nghiệm đƣợc thực hiện t i Trung tâm nghiên Cứu công nghệ Sinh h c – Trƣờng Đ i h c H ng Vƣơng – Th xã Ph Th – T nh Ph Th .
. . Nội dung nghi n cứu
- Ảnh hƣởng của BAP, Kinetin, NAA đến sự phát sinh cơ quan của loài lan Ý thảo (D.gratiosissimum) in vitro.
- Ảnh hƣởng của sự kết hợp giữa BAP với NAA, Kinetin với NAA và BAP với Kinetin đến sự phát sinh cơ quan của loài lan Ý thảo (D.gratiosissimum) in vitro.
- Ảnh hƣởng của BAP đến khả năng kéo dài chồi của loài lan Ý thảo (D.gratiosissimum) in vitro.
.3. Phƣơng ph p nghi n cứu
2.3.1. Phương pháp luận
- Các nhân tố ch tiêu nghiên cứu phải chia thành các công thức khác nhau.
- Các nhân tố không phải ch tiêu nghiên cứu phải đảm bảo t nh đồng nhất giữa các công thức thí nghiệm.
- Số mẫu của mỗi công thức thí nghiệm phải đủ lớn (≥20).
2.3.2. Phương pháp bố trí thí nghiệm
- Thí nghi m 1: Đánh giá ảnh hƣởng của BAP đến sự phát sinh chồi cây in vitro loài lan Ý thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu:
Cụm protocorm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: BSI1: MT nền (ĐC)
BSI2: MT nền + 1 mg/l BAP BSI3: MT nền + 2 mg/l BAP BSI4: MT nền + 3 mg/l BAP
Chồi in vitro chiều cao chồi từ 0,5-1 cm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: MT nền (ĐC) B05K0: MT nền + 0,5 mg/l BAP B1K0: MT nền + 1 mg/l BAP B15K0: MT nền + 1,5 mg/l BAP B2K0: MT nền + 2 mg/l BAP B25K0: MT nền + 2,5 mg/l BAP
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS ở bổ sung thêm 100 ml/l nƣớc dừa + 20 g/l saccharozơ + 6,5 g/l agar + 100 g/l khoai tây + 0,5 g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá:
Hệ số nhân, đặc điểm chồi đối với vật liệu ban đầu là protocorm.
Hệ số nhân, chiều cao chồi/chồi, số lá/chồi đối với vật liệu ban đầu là chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
- Thí nghi m 2: Đánh giá ảnh hƣởng của NAA đến sự phát sinh chồi cây in vitro loài lan Ý thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu: Cụm protocorm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: BSI1: MT nền (ĐC)
BSI5: MT nền + 0,1 mg/l NAA BSI6: MT nền + 0,2 mg/l NAA BSI7: MT nền + 0,3 mg/l NAA
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung thêm 100ml/l nƣớc dừa + 20g/l saccharozơ + 6,5g/l agar + 100g/l khoai tây + 0,5g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá: hệ số nhân, đặc điểm chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
- Thí nghi m 3: Đánh giá ảnh hƣởng của Kinetin đến sự phát sinh chồi cây in vitro loài lan Ý thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu:
Cụm protocorm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: BSI1: MT nền (ĐC)
BSI8: MT nền + 1 mg/l Kinetin BSI9: MT nền + 2 mg/l Kinetin
BSI10: MT nền + 3 mg/l Kinetin
Chồi in vitro chiều cao chồi từ 0,5-1 cm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: MT nền (ĐC) B0K05: MT nền + 0,5 mg/l Kinetin B0K1: MT nền + 1 mg/l Kinetin B0K15: MT nền + 1,5 mg/l Kinetin B0K2: MT nền + 2 mg/l Kinetin B0K25: MT nền + 2,5 mg/l Kinetin
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung thêm 100ml/l nƣớc dừa + 20g/l saccharozơ + 6,5g/l agar + 100g/l khoai tây + 0,5g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá:
Hệ số nhân, đặc điểm chồi đối với vật liệu ban đầu là protocorm.
Hệ số nhân, chiều cao chồi/chồi, số lá/chồi đối với vật liệu ban đầu là chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
-Thí nghi m 4: Đánh giá ảnh hƣởng sự phối hợp của BAP và NAA đến sự phát sinh chồi cây in vitro loài lan Ý thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu: cụm protocorm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: BSI1: MT nền (ĐC)
BSI11: MT nền + 1 mg/l BAP + 0,1 mg/l NAA BSI12: MT nền + 1 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA BSI13: MT nền + 1 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA BSI14: MT nền + 2 mg/l BAP + 0,1 mg/l NAA BSI15: MT nền + 2 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA BSI16: MT nền + 2 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA BSI17: MT nền + 3 mg/l BAP + 0,1 mg/l NAA BSI18: MT nền + 3 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA BSI19: MT nền + 3 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung thêm 100 ml/l nƣớc dừa + 20 g/l saccharozơ + 6,5 g/l agar + 100 g/l khoai tây + 0,5 g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá: hệ số nhân, đặc điểm chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
-Thí nghi m 5: Đánh giá ảnh hƣởng sự phối hợp của Kinetin và NAA đến sự phát sinh chồi cây in vitro loài lan Ý thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu: cụm protocorm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng: BSI1: MT nền (ĐC)
BSI20: MT nền + 1 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA BSI21: MT nền + 1 mg/l Kinetin + 0,2 mg/l NAA BSI22: MT nền + 1 mg/l Kinetin + 0,3 mg/l NAA BSI23: MT nền + 2 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA BSI24: MT nền + 2 mg/l Kinetin + 0,2 mg/l NAA BSI25: MT nền + 2 mg/l Kinetin + 0,3 mg/l NAA BSI26: MT nền + 3 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA BSI27: MT nền + 3 mg/l Kinetin + 0,2 mg/l NAA BSI28: MT nền + 3 mg/l Kinetin + 0,3 mg/l NAA
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung thêm 100 ml/l nƣớc dừa + 20 g/l saccharozơ + 6,5 g/l agar + 100 g/l khoai tây + 0,5 g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá: hệ số nhân, đặc điểm chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
- Thí nghi m 6: Ảnh hƣởng của BAP và Kinetin đến hệ số nhân chồi in vitro
loài lanÝ thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu: chồi in vitro chiều cao chồi từ 0,5-1 cm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng:
B0K0: MT nền (ĐC)
B1K1: MT nền + 1 mg/l Kinetin +1 mg/l BAP
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung thêm 100 ml/l nƣớc dừa + 20 g/l saccharozơ + 6,5 g/l agar + 100 g/l khoai tây + 0,5 g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá: hệ số nhân, số lá/chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
- Thí nghi m 7: Ảnh hƣởng của BAP đến khả năng kéo dài chồi in vitro loài
lan Ý Thảo (D. gratiosissimum).
+ Vật liệu ban đầu: chồi in vitro chiều cao chồi từ 0,5-1 cm đƣợc nuôi cấy trên các công thức môi trƣờng:
B05: MT nền + 0,5 mg/l BAP B1: MT nền + 1 mg/l BAP B15: MT nền + 1,5 mg/l BAP B175: MT nền + 1,75 mg/l BAP B2: MT nền + 2 mg/l BAP B225: MT nền + 2,25 mg/l BAP B25: MT nền + 2,5 mg/l BAP B3: MT nền + 3 mg/l BAP
Trong đó môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung thêm 100 ml/l nƣớc dừa + 20 g/l saccharozơ + 6,5 g/l agar + 100 g/l khoai tây + 0,5 g/l than ho t tính.
+ Ch tiêu đánh giá: chiều cao chồi/chồi, số lá/chồi. + Thời gian thu thập: sau 8 tuần nuôi cấy.
2.3.3. Phương pháp thu thập số liệu
- Ch tiêu thu thập:
+ Hệ số nhân chồi (lần) = Số chồi ban đầuTổng số chồi + Số lá/chồi (lá) = Tổng số chồiTổng số lá
+ Chiều cao chồi/chồi (mm) = Tổng chiều cao chồiTổng số chồi - Thời gian thu thập: 8 tuần
2.3.4. Phương pháp phân tích và ử l số liệu
Các số liệu đƣợc t nh toán theo phƣơng pháp phân tích thống kê toán h c. Quá trình xử lý số liệu đƣợc thực hiện trên máy tính của chƣơng trình Excel.